丙型肝炎病毒囊膜蛋白基因疫苗的构建及其诱导小鼠体液免疫应答

将丙型肝炎病毒（HCV）H77株全长囊膜蛋白基因克隆到真核表达载体pcDNA4.0的CMV启动子下游，采用磷酸钙转染法将重组质粒转入293T细胞，用流式细胞仪检测细胞瞬时表达的目的蛋白。将构建的重组质粒肌注BALB/c小鼠，用表达HCV囊膜蛋白的SP2/0细胞作为抗原，用流式细胞仪检测小鼠血清HCV囊膜蛋白抗体。再用原核系统表达的E2蛋白作为抗原,Western Blot检测免疫小鼠血清抗体。试验结果显示,囊膜蛋白E1E2在293T细胞膜上进行了瞬时表达，基因疫苗免疫小鼠后产生了抗HCV囊膜蛋白的抗体，该抗体能与表达HCV囊膜蛋白的SP2/0细胞特异性结合，Western Blot表明该抗体也能与原核系统表达的E2蛋白结合。     

山羊海藻百伯史坦菌分离鉴定与药敏试验

为了对陕西省某羊场羊群发生呼吸道疾病进行确诊,取病死羊肺脏进行细菌培养、分离、纯化、生化试验、16S rRNA测序、动物致病性试验以及药敏试验.结果表明,分离株的培养特性与生化试验结果与山羊海藻百伯史坦菌符合;16S rRNA比对结果显示分离细菌与山羊海藻百伯史坦菌同源性为98％;致病性试验表明山羊海藻百伯史坦菌对小鼠...     

小反刍兽疫病毒疫苗株N和M基因的克隆、序列分析及原核表达

根据GenBank已登录的PPRV基因组序列,设计并合成2对特异性引物,以PPRV疫苗株基因组为模板,经RT-PCR扩增获得N和M基因并进行序列分析,再将2个基因插入到原核表达载体pET-28a中,经鉴定正确后转化BL21感受态细胞进行IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE和Western blot检测。成功克隆PPRV疫苗株N和M基因,重组菌经IPTG诱导后表达分子质量为57.7ku N蛋白(核衣壳蛋白)和38.1ku的M蛋白(基质蛋白),2个蛋白均能与小反刍兽疫阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。     

IBDV诱导细胞凋亡的研究进展

凋双称程序化死亡,细胞在形态学和生化特征的改变是其发生凋亡的有力证明。ＩＢＤＶ诱导细胞凋亡,细胞形态学表现为细胞浆膜失去联系,核膜对称性消失,染色质浓缩成为核体,并凝集成团,集于核膜旁,细胞拉长变形,最后细胞裂解成由膜包围着的小团,培养细胞贴壁能力减弱。     

伪结核棒状杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

为建立伪结核棒状杆菌(Cp)血清抗体间接ELISA检测方法,以热灭活处理的不同的浓度Cp菌株作为固相抗原包被酶标板,用不同封闭液封闭,设置不同的封闭时间,再用不同稀释度的待检血清和不同稀释度的酶标二抗与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性临界值.对间接ELISA方法的特异性和重复性进行试验,并在此基础上对采...     

规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征的诊断与防控

2020年11月10日,陕西省某4800头规模化母猪场引种200头后备母猪,2020年11月24日后备猪群出现咳嗽、呼吸困难、体温升高、采食量下降及后备母猪急性死亡等临床症状。2020年12月23日该猪场妊娠母猪群出现流产现象,分娩母猪产木乃伊胎、死胎、白胎及弱仔的比例明显升高。为解决该场的异常情况,兽医实验室通过检测诊断,确诊引起母猪发生繁殖障碍的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的类NADC30毒株。针对该检测结果制定和实施疫苗免疫、药物保健方案及其他生产防控措施。对该猪场的生产成绩进行为期4个月的追踪,通过持续检测分析来评估综合防控效果。结果表明采取疫苗紧急免疫和药物保健等综合防控措施后,该猪场母猪繁殖障碍情况逐渐缓解,猪群趋于稳定,生产成绩得以恢复。     

畜禽疾病计算机诊断专家系统的研究进展

本文较系统的对计算机诊断专家系统的发展概况、基本结构、诊断原理、试验测试、专家系统优点及不足、在临床中的应用及未来展望等方面的研究进展作一综述。     

猪瘟病毒DNA疫苗的构建及动物免疫试验

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)C株E2囊膜蛋白全长基因克隆到真核表达载体pcDNA4.0的CMV启动子下游,采用磷酸钙转染法将重组质粒转入293T细胞,流式细胞仪(FACS)检测293T细胞瞬时表达了E2囊膜蛋白。将构建的重组质粒肌肉注射BALB/c小鼠,用流式细胞仪和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测证明成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体,为下一步利用DNA疫苗免疫小鼠研制抗猪瘟病毒单克隆抗体打下基础。     

猪瘟病毒Shimen株E2基因的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建

根据已发表的猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）Shimen株的全基因组序列，设计2对引物P1／P2和B1／B2，在B1和B2的5’端分别加上EcoR 1和BamH 1位点，以CSFV—Shimen株脾毒为材料。一步法提取总RNA。并以此为模板采用反转录PCR（RT—PCR）和套式PCR（nPCR）。成功地扩增出约1．2kb的E2基因。将PCR产物回收后与pMD18-T载体连接并转化。经PCR和酶切鉴定获得重组质粒E2-T。将E2-T经EeoR 1和BamH 1酶切消化、回收目的基因后。与经BamH 1／EcoR 1酶切的逆转录病毒载体pBABE—puro连接并转化，经酶切鉴定获得重组质粒pBABE—puro—E2。序列测定表明，目的基因的插入位置、方向和读码框完全正确。