狐多样枸椽酸杆菌的分离鉴定

从陕西省某狐病死狐实质器官分离到两株β溶血的革兰氏阴性（G^-)杆菌，经鉴定多样枸椽酸杆（Citrobacter diversus)，致病性试验和药敏试验结果表明，经胰蛋白酶作用的分离菌的肉汤培养物对小白鼠致病性；分离菌对氯霉素、痢特灵、卡那霉素等敏感，对青霉素、先锋霉素、红霉素等不敏感。     

猪附红细胞体病研究进展

猪附红细胞体病是一种由立克闪氏体所引起的发热性溶血性疾病，主要由吸血昆虫传播。该病主要特征是贫血，也可能和其他疾病混合感染，表现不同交叉症状，本综述了猪附红细胞体病的病原、流行病学、发病机理、临床症状，病理变化，诊断方法其防制措施。     

猪链球菌2型的分离鉴定及免疫预防

从某猪场分离到一株细菌，通过培养特性、菌体形态、菌落形态、染色特性、生化试验及血清学试验等一系列的系统鉴定，确定为猪链球菌2型。动物致病性试验表明该菌对小白鼠和仔猪有较强的致病性，引起其死亡。药敏试验证明该菌对青霉素、氯霉素等高度敏感，对头抱拉定、卡那霉素等中度敏感，对痢特灵、氟派酸等不敏感。分离菌制成油佐剂灭活苗能有效的预防该猪场猪群的发病。     

猪流行性腹泻病毒的RT-PCR鉴定及其 M、N和E基因的序列分析

对引起仔猪严重腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)进行RT-PCR检测,并对PEDV部分基因进行克隆和序列分析。从陕西省某发生严重仔猪腹泻的养猪场采集肠道内容物,利用RT-PCR技术成功检测到PEDV感染。克隆检测到的PEDV M、N和E基因片段,并将该基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与其他不同来源的PEDV毒株进行比较分析。结果表明,克隆的M、N和E基因与其他已经发表的PEDV毒株核苷酸的同源性分别为96.3%～99.9%、95.2%～99.5%和96.1%～96.9%,氨基酸同源性分别为95.6%～99.6%、96.1%～99.5%和96.1%～98.7%;系统进化树结果表明,试验检测的PEDV与国内分离株的PEDV株亲缘关系更近。可见:陕西省养殖场存在猪流行性腹泻病毒感染,其M、N和E基因变异不大。     

检测CSFV、PRRSV和JEV感染的多重RT-PCR方法的建立及初步应用

为了建立1种能够应用于临床样本可以同时检测CSFV、PRRSV、JEV 3种RNA病毒感染的多重RT-PCR方法。根据GenBank收录的CSFV、PRRSV、JEV的基因组全序列,选择3种病毒的特异性保守区序列设计了3对特异性引物,优化多重RT-PCR反应条件,建立了能够同时检测3种病毒混合感染的多重RT-PCR诊断方法。特异性分析表明,应用该方法分别从CSFV、PRRSV、JEV毒株以及3种病毒的混合物中扩增出大小分别为777、451、605bp的3条特异性条带,其他对照组检测均为阴性;敏感性分析表明,该方法最低检测量分别为14.2、10.0、8.0pg的CSFV、PRRSV、JEV的RNA;初步应用性试验表明,52份疑似病料中PRRSV、CSFV和JEV的阳性率分别为46.1%、21.1%和1.92%;CSFV和PRRSV混合感染阳性率为21.1%。CSFV、PRRSV和JEV混合感染阳性率为3.84%。本试验建立的多重RT-PCR检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,可以有效检测CSFV、PRRSV和JEV的混合感染。     

山羊痘病毒疫苗株 ORF103基因的克隆、 序列分析及原核表达

根据GenBank已登录的GTPV基因组序列,设计并合成1对特异性引物,以GTPV疫苗株基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF103基因片段并进行序列分析,再将该基因片段亚克隆于原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-ORF103,经鉴定正确后转化BL21感受态细胞进行诱导表达,并进行SDSPAGE和Western blot检测。成功克隆GTPV疫苗株ORF103基因片段。重组菌经IPTG诱导后成功表达分子质量约为35ku的重组蛋白,该蛋白能与山羊痘阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。研究结果为GTPV的分子生物学特性研究提供资料,并为进一步研制GTPV抗体检测试剂盒奠定基础。     

羊布鲁菌陕西分离株OMP19基因的克隆、序列分析及原核表达

对羊布鲁菌(Brucella)陕西分离株OMP19基因进行克隆、序列分析及原核表达。利用GenBank中收录的布鲁菌(KT229642.1)OMP19基因序列,设计合成引物,应用PCR技术扩增OMP19基因,并将OMP19基因连接到原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET28a-OMP19,转化到BL21感受态细胞进行诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot法分析。结果克隆了羊布鲁菌陕西分离株OMP19全基因序列,核苷酸序列分析表明,陕西分离株OMP19基因与国内外已报道的羊布鲁菌核苷酸同源性超过98%,氨基酸同源性超过98%。OMP19重组菌经诱导表达约为19ku的重组蛋白,该蛋白能与本实验室鉴定保存的阳性血清特异性结合,反应原性良好。为羊布鲁菌陕西分离株分子生物学特性研究提供资料,为进一步进行基因工程疫苗研制及ELISA试剂盒抗体检测提供了基础。     

《兽医微生物学》教学实习改革探索

如何提高兽医微生物学教学实习效果,教师仅具有丰富的知识和责任心是不够的,必须讲究教学方法。我们提出以学生自行设计实验为主,教师指导为辅的教学实习改革方法。具体方案包括确定课题、设计实验方案、实验的实施、实习总结、撰写小论文等过程。通过几届兽医专业本科生的实践,对于提高学生的操作技能及分析解决问题的能力、调动学生学习的积极性、主动性都得到很大提高,全面提高了兽医微生物学实习教学效果。     

对《兽医微生物学》教学的几点体会

知识经济社会里,每个人都面临着新的机遇、新的挑战,这种机遇和挑战对即将步人社会的每个高校学生来说,在知识、素质和能力方面都会有更高、更新的要求,这迫使我们注重学生能力的培养、素质的提高,使学生能够适应未来社会。为此,就必须注重各个教学环节、改进教学方法、充实教学内容。兽医微生物学是研究引起动物疾病的微生物及其生命活动规律的科学。     

猪圆环病毒2型Cap蛋白在杆状病毒表面的展示

本试验将猪圆环病毒2型(PCV2)去核定位区ORF2基因克隆到杆状病毒表面展示转座载体pBacSC中,转化DH10Bac大肠杆菌感受态,经抗性及蓝白斑筛选得到含ORF2基因的重组杆状病毒DNA,以脂质体介导法将此重组DNA转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。对重组病毒进行Western-blot分析和免疫金电子显微镜检测。结果表明,PCV2 Cap蛋白在重组杆状病毒中获得表达;免疫金电子显微镜观察表明,重组蛋白展示在杆状病毒囊膜上。本试验成功构建表面展示PCV2 Cap蛋白的重组杆状病毒,为下一步应用重组杆状病毒作为亚单位疫苗奠定基础。