番木瓜CpTIFY10A-like基因克隆及表达分析

[目的]克隆番木瓜CpTIFY10A-like基因序列,并分析其表达特性,为探索该基因功能和抗番木瓜环斑病毒(PRSV)分子机制提供理论依据.[方法]结合前期研究的抗PRSV转录组数据,利用RACE对上调表达基因Cp-TIFY10A-like进行克隆,获得该基因cDNA全长序列,分析其编码区序列(CDS)及进行生物信息学分析.利用已鉴定的PRSV对3月龄番木瓜植株进行不同处理,以感染PRSV且出现病症的植株(CK+)、1.0 mL/L禾甲安(CTS-N)灌施感染PRSV且出现病症的植株(B)为处理组,以清水灌施(不添加禾甲安)不感染PRSV的植株(CK-)为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同处理下PRSV基因和CpTIFY10A-like基因在番木瓜叶片中的表达情况.最后将CpTIFY10A-like基因CDS序列连接至pET28a-sumo载体上构建原核表达载体,转化Rosetta(DE3)感受态细胞,通过不同浓度IPTG诱导蛋白表达,利用SDS-PAGE电泳检测原核表达情况.[结果]CpTIFY10A-like基因全长为1352 bp,CDS序列为822 bp,编码273个氨基酸残基;其编码蛋白理论等电点(pI)9.23,不稳定系数62.97,亲水性平均系数-0.458,属于不稳定的亲水性碱性蛋白,定位在细胞核上,其二级结构以无规则卷曲和α-螺旋为主,同时含有少量的β-折叠和延伸链.CpTIFY10A-like蛋白与酸枣和白梨TIFY蛋白的氨基酸序列相似性较高,均含有特定的TIFY结构域,属于TIFY蛋白家族,三者在系统发育进化树上聚在同一分支,表明亲缘关系较近.不同处理的番木瓜叶片中,PRSV基因的相对表达量排序为CK+(1.02)>B(0.39)>CK-(0),CpTIFY10A-like基因的相对表达量排序为B(53.12)>CK+(1.15)>CK-(1.02),且CpTIFY10A-like基因在经禾甲安处理的感染PRSV番木瓜叶片中相对表达量显著升高(P<0.05,下同),而PRSV基因的相对表达量显著降低.CpTIFY10A-like基因在原核细胞中表达蛋白的分子量与理论分子量(29.36 kD)相符,且不同浓度IPTG诱导下,IPTG浓度越高,蛋白表达量越多,表明该基因在原核细胞中成功表达.[结论]禾甲安可诱导CpTIFY10A-like基因高效表达,进而通过茉莉酸通路起调节作用以抵抗PRSV感染,即CpTIFY10A-like基因在番木瓜抗PRSV过程中发挥重要调控作用.     

基于统计方法的入侵检测模型

随着internet的发展,信息安全越来越引起人们的注意.据计算机紧急响应小组(CERT)公布的从1988年到1999年攻击事件增长数据可以看出,从1988年到1999年短短十年里,攻击事件增长将近20倍,与攻击相应的结果就是经济的损失,据美国商业杂志《信息周刊》公布的一项调查报告称,黑客     

不同小麦品种对麦田磺酰脲类除草剂的耐药性研究

通过敏感性测定，明确了不同小麦品种对麦田磺酰脲类除草剂的耐药性。结果表明，百农６５，豫麦２号耐药性较强；百农６４，豫麦３２号，中育３号耐药性居中，豫麦２１号，豫麦１８号耐药性较弱。豫麦２１号对药剂的敏感性最强，用药不当，易产生药害，并对品种×药剂间及品种×药剂×含量间的协同效应进行了分析。     

物联网技术在经济果树栽培管理上的应用分析

物联网技术是信息技术的重要组成,它以互联网为基础通过智能感知识别收集管理对象信息,实现高速通信,从而达到集中高效控制管理的目的.现如今该技术已日益成熟,在世界农林领域中日渐普及,发挥出了重要的作用、价值.就果树栽培而言,同样可以通过对物联网技术的应用,来提升其管理效率、管理质量,以使果树栽培能够取得更好的综合效益.该文...     

柴松育苗造林技术

柴松是我省特有的优良用材树种,除我省桥北林业局和尚塬林场大麦秸沟保存有成片的柴松林外,其余各地均无分布。为了发展柴松这一珍稀树种,陕西省林学会在柴松现场观察座谈会纪要上提     

艾炙治疗奶牛不孕症

日本山形县畜产合作社研修中心家畜诊所所长胜见晟先生,利用艾炙法治疗濒于废弃的繁殖障碍奶牛,取得了惊人的疗效.在此之前,对于繁殖障碍的奶牛(卵巢疾患)只施用激素治疗,无效时只能废弃.从1998年起,对于因卵巢疾病等不孕的奶牛,施用激素治疗无疗效时,转用艾炙治疗,使许多濒于废弃的荷兰种奶牛连续受孕,去年1年经艾炙治疗的23头奶牛中,有21头治愈(见表1).     

蚜虫性信息素研究进展

本文对蚜虫性信息素成分的分离与鉴定、蚜虫性信息素对蚜虫及其天敌行为调节作用等方面的研究现状作了概述。     

天井山林场天然林保护与利用的探讨

系统地介绍了天井山林场独特的自然环境、丰富的动植物资源、天然林保护措施和经营管理经验,提出了天然林开发利用的建议和具体措施。     

5%氟铃脲乳油防治棉铃虫田间药效试验

棉铃虫是一种世界性害虫。本文拟就5％氟铃脲乳油对棉铃虫的防治效果进行探讨。     

棉铃虫在苹果树上的危害及其防治

棉铃虫在苹果树上的危害及其防治刘志勇，刘焕英，姜广祥，周润生（山东省东阿县林业局·２５２２００）（山东省果树研究所）棉铃虫是棉花上危害最为严重的害虫。近年发现，棉铃虫不仅危害棉花等作物，而且也危害苹果。受害后的苹果树均有不同程度的减产，同时也严重影响...