新型轮状病毒反向遗传学系统的开发及应用

轮状病毒(RV)是导致全球婴幼儿严重腹泻的重要病原体。由于缺乏完全基于质粒的反向遗传学系统,阻碍了对RV复制和发病机制的深入研究。经过多年来对轮状病毒反向遗传系统的开发,2018年终于成功研发了完全基于11个RV质粒的反向遗传系统,该技术不需要辅助病毒和辅助质粒的参与,不需要复杂的筛选过程,且重组病毒的拯救效率高。这项技术的成功研发,将加速RV基础生物学的研究,可应用于RV新型疫苗的设计、筛选RV抗病毒制剂,促进其他病毒反向遗传系统的研发。本文就轮状病毒反向遗传学系统的研究进展及应用作以简要综述。     

执业兽医制度探讨

兽医工作是公共卫生工作的重要组成部分,是保持经济社会全面、协调、可持续发展的一项基础性工作.2005年,同务院下发<关于推进兽医管理体制改革的若干意见>,对兽医管理体制改革作出总体部署,要求逐步建立官方兽医制度和执业兽医制度.     

新城疫病毒F48E9株M和NP基因的原核表达

根据新城疫病毒（NDV）F48E9国内标准强毒株编码序列设计了2对特异性引物,分别用于扩增M和NP基因。经序列测定,将其克隆到原核表达载体pET-30a（＋）上,转化E．coliBL21（DE3）,筛选表达NDVF48E9株M蛋白和NP蛋白的菌株。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析结果表明,NDVM蛋白在E．coliBL21（DE3）内以可溶形式存在,而NP蛋白以包涵体的形式表达。用纯化的M和NP蛋白免疫鸡制备超免疫血清,进行Western-blot分析;结果,它们可以与真核表达系统表达的M和NP蛋白以及NDV发生特异性反应,表明,原核表达系统表达的NDVM和NP蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。     

大鼠成熟的肺表面活性蛋白B的原核表达及纯化

为表达和纯化SP-B蛋白,先对SP-B基因进行稀有密码子优化,PCR反应获得SP-B片段,构建重组质粒pGEX4T-1/SP-B,转化到E.coli BL21(DE3)中诱导表达;用SDS-PAGE与Western blot进行检测;用GSTPrep FF 16/10对融合蛋白进行纯化。经双酶切鉴定证实质粒中插入基因长250bp,测序结果与大鼠SP-B cDNA序列相符;质粒转化后用IPTG进行诱导,在分子质量约34ku处出现1个新条带,与pGEX4T-1/SP-B蛋白预期大小一致,且该融合蛋白能可溶性表达并被纯化。结果表明成功构建了pGEX4T-1/SP-B重组质粒,表达、纯化得到GST/SP-B蛋白,为研究肺表面活性物质替代药物奠定了基础。     

育肥猪黄曲霉毒素B1中毒的诊断报告

育肥猪黄曲霉毒素Ｂ１中毒的诊断报告余景枫余晓波刘海超（巴彦县兽医卫生防疫站·１５１８００）（巴彦县畜牧站）（巴彦县榆树乡畜牧兽医综合服务站）１９９６年８月２２日，我县西集镇镇办猪场的猪突然发生死亡。经猪场兽医连续用各类抗生素治疗和葡萄糖盐水、安那加耳...     

羊传染性脓疱的诊断与防治

羊传染性脓疱又称羊口疮,是由传染性脓疱病毒引起的主要威胁绵羊和山羊的接触性传染性脓疱性皮炎,其特征是口唇等处皮肤和粘膜形成丘疹、脓疱、溃疡,并最后结成疣状厚痂,羔羊最为敏感,并可能死亡。现结合我县王来富养殖场羊传染性脓疱的诊治情况,在此浅谈一下此病的防疫措施。     

苜蓿对褐斑病抗性筛选研究

在实验条件下,就国内外收集的250份苜蓿种质材料幼苗对褐斑病的抗性进行了筛选和评价。结果表明,苜蓿种质材料的抗病性存在很大差异,幼苗发病率为11.1%～100%,病情指数为4.1～73%。有45份（占总数18%）的病指数低于20%,且全部为国外品种。大部分材料（78%）的病指数为：20%～60%。病指数大于60%的10份最敏感的材料中有6份来自国内,4份来自国外。     

牧草种质资源考察团赴美考察报告

美国植物种质资源管理和开发是世界上历史最长、技术最先进、组织体制最完备的系统,为美国及世界农作物的增产和品质的改进做出了贡献,中国是植物种质资源大国,加强植物种质资源保护、管理和开发势在必行.     

血红素氧合酶-2基因真核表达载体的构建

为构建血红素氧合酶-2（HO-2）真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况。试验利用PCR技术从C57BL/6小鼠海马组织中扩增出HO-2基因cDNA序列,用双酶切法将此序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP上,构建HO-2的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,重组载体经EcoRI和BamHI双酶切和测序鉴定。电穿孔法转染小鼠脑血管内皮细胞,48h后,实时定量PCR、Western blot检测HO-2在小鼠脑血管内皮细胞中mRNA和蛋白质水平的表达情况。结果表明,pEF1α-HO-2-AcGFP载体构建正确;重组载体转染小鼠脑血管内皮细胞后HO-2在mRNA水平表达量较空载体转染极显著增高（P〈0.01）,在蛋白水平表达量较空载体转染显著增高（P〈0.05）。表明HO-2基因的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP构建成功,为进一步研究其机制和功能奠定了基础。     

激素对白三叶愈伤组织形成的影响及体细胞胚的组织学观察

以白三叶3个品种瑞文德、铺地和海法的子叶和下胚轴为外植体,采用正交设计试验研究2,4-D、6-BA和KT三种生长调节剂的不同浓度水平对白三叶愈伤组织诱导及继代的影响,筛选最佳激素组合并进行体细胞胚的组织学观察.结果表明:同一品种同一时期不同外植体愈伤诱导的最佳激素组合不相同,不同品种间也不一致;瑞文德子叶胚性愈伤诱导的最佳培养基为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.35mg/L+KT 0.5mg/L,下胚轴为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.2mg/L+KT 0.35mg/L;铺地子叶胚性愈伤诱导的最佳培养基为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L,下胚轴为改良SH+2,4 D 5mg/L+6-BA 0.35mg/L+KT 0.5mg/L;海法子叶胚性愈伤诱导的最佳培养基为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.2mg/L+KT 0.35mg/L,下胚轴为改良SH+2,4-D5mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L.组织学观察表明,体细胞胚的发育经历球形胚、心形胚、鱼雷胚及子叶胚四个阶段后形成一个完整的体细胞胚.