安徽合肥地区2018—2019年犬细小病毒遗传进化分析

为掌握安徽地区犬细小病毒(CPV)的遗传变异情况,采用PCR法扩增2018—2019年安徽地区收集的10株CPV全基因组,采用生物信息学分析安徽地区CPV遗传进化特点与VP2抗原的变异情况。遗传进化分析发现,安徽地区分离的10株CPV主要以CPV-2c亚型为主,起源于CPV-2aB004(EF011664)和CPV-LZ1(JQ268283)株,正在形成一个独立的分支;NS1基因和VP2基因在遗传进化分支中出现不同步现象,为CPV基因重组提供了依据。VP2蛋白保守性分析发现,安徽分离的CPV毒株的VP2蛋白存在部分氨基酸位点的突变,是否对VP2蛋白的结构和功能产生影响需进一步探究。本研究通过分析安徽地区CPV的遗传进化特点与VP2蛋白氨基酸位点突变特征,为CPV的研究提供了参考。     

鸡胚增菌研制鸭疫里氏杆菌灭活苗

鸡胚增菌培养鸭疫里氏杆菌有很好效果 ,增菌后的菌液含菌量一般可达 2 70× 10 8～ 3 0 8× 10 8CFU/ml。通过鸡胚增菌法所研制的鸭疫里氏杆菌灭活苗 ,1次免疫保护率平均可达 82 .4% ,2次免疫保护率平均可达 93 .5 % ,能很好地控制鸭传染性浆膜炎的发生     

神经肽Y阳性神经元在皖西白鹅小肠的分布

用免疫组化SABC法,观察神经肽Y(NPY)免疫反应阳性物质在成年皖西白鹅小肠的分布。结果表明神经肽Y阳性神经元主要分布于皖西白鹅的十二指肠、空肠和回肠的黏膜、黏膜下组织。细胞体形态多样,数量从十二指肠向空肠和回肠逐渐减少,密度分别为(62.10±4.25)/mm2、(51.14±2.12)/mm2、和(41.21±3.15)/mm2。神经纤维主要分布于小肠肌层。本文还讨论了神经肽Y的起源及对小肠黏膜功能的调节作用。     

成年皖西白鹅母鹅消化腺的形态学观察

本试验研究了成年皖西白鹅母鹅消化腺的形态特征。实验应用20只皖西白鹅母鹅。鹅放血致死后,解剖观察消化腺的组成,取消化腺的各部分,制作组织切片。结果表明:成年皖西白鹅母鹅消化腺由唾液腺、肝脏和胰腺组成。肝脏的组织结构由肝小叶和门管区构成,肝小叶由中央静脉、肝细胞管和肝窦组成,门管区包括小叶间胆管、小叶间动脉和小叶间静脉,还有淋巴组织分布。胰腺包括外分泌部和内分泌部,外分泌部由腺泡和导管组成,内分泌部为一细胞团,即胰岛。     

产蛋期皖西白鹅生殖系统的形态学观察

研究采用大体解剖法、石蜡切片法、HE染色法等对20只产蛋期的皖西白鹅母鹅生殖系统的形态结构和组织结构进行了观察,结果如下:皖西白鹅母鹅的生殖系统包括卵巢和输卵管两部分,仅左侧发育正常,右侧早已退化,卵巢表面被覆生殖上皮,下方是白膜,其实质由皮质和髓质组成,皮质内含有不同发育阶段的卵泡和萎缩卵泡,大卵泡突出了卵巢表面,卵泡无卵泡腔,也无卵泡液,排卵后不形成黄体。输卵管分为漏斗部、蛋白分泌部、峡部、子宫部和阴道部5个部分,各段均由黏膜层、肌层和外膜构成,黏膜上皮有纤毛,固有层内有腺体和淋巴组织,无黏膜肌层,肌层由内环外纵两层平滑肌组成,外膜为浆膜。     

Ghrelin在成年皖西白鹅小肠内的免疫组化定位研究

采用免疫组化SABC法并结合DAB显色技术研究了皖西白鹅小肠内Ghrelin阳性细胞及其分布。结果：①Ghrelin免疫阳性细胞主要位于小肠的黏膜层，而黏膜下层和肌层未见Ghrelin阳性细胞。这些阳性细胞，胞浆着色，主要有两类，一类为“闭合型”细胞，呈圆形或椭圆形，其顶部不露于腔面，另一类为“开放型”细胞，呈锥体型，细胞顶部达到腔面。②在十二指肠，“开放型”和“闭合型”两种阳性细胞均可观察到，而在空肠和回肠，主要为“闭合型”阳性细胞。产生Ghrelin的细胞在成年皖西白鹅小肠黏膜层有广泛的分布，揭示Ghrelin可能调节小肠的功能。     

口疮病毒O2O基因的克隆、表达及多抗制备

羊口疮是由口疮病毒(orf virus,ORFV)引起的接触性、嗜上皮性的传染病。020基因是该病毒重要的酶活力调节蛋白。根据Gen Bank中020基因的序列设计引物,从ORFV-F10株感染的病料中提取DNA,PCR扩增获得目的基因。然后将其亚克隆至p ET-32a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒p ET-32a-ORF-020。鉴定正确后转化BL21感受态细胞,进行IPTG诱导表达。表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析。最后将纯化的020蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备多抗血清。SDS-PAGE结果表明,ORFV 020基因在体外获得正确表达,大小约37 k Da。Western-blot结果表明,制备的多抗血清能够与020蛋白发生特异性反应具有良好的反应原性。     

羊口疮病毒127基因的克隆表达及亚细胞定位分析

为了对羊口疮病毒(ORFV) AH-F10株127基因进行原核表达及亚细胞定位,本试验采用PCR方法扩增出ORFV127基因,成功构建原核表达重组质粒pG EX-6p-1-ORFV127和真核重组质粒pE GFP-N1-ORFV127。将原核表达重组质粒转化到大肠埃希氏菌中表达,并进行纯化和鉴定。以纯化的蛋白质免疫BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,利用Western-blot技术鉴定其反应原性。利用脂质体介导法将重组质粒pE GFP-N1-ORFV127转染至Vero细胞,通过倒置荧光显微镜观察其在细胞中的表达及亚细胞定位。结果表明,获得的ORFV127基因序列全长为558bp,ORFV127蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,主要以包涵体蛋白质的形式表达,大小约49 000。Western-blot结果显示,免疫小鼠获得的抗ORFV127蛋白的多克隆抗体可特异性识别ORFV127蛋白,倒置荧光显微镜观察发现,ORFV127蛋白主要定位于细胞质。本试验结果为后续研究ORFV127蛋白的功能提供了宝贵的生物材料。     

犬子宫蓄脓的诊治

犬子宫蓄脓为囊性或腺囊性子宫内膜增生性炎症,根据子宫颈是否开张可分为开放型和闭锁型两种。多发于中、高龄犬和有激素治疗史犬(如雌激素、地塞米松和孕酮等)。我院共收治子宫蓄脓病例35例,小型犬占60％,其中以京巴犬、西施犬及狮子犬为主:大型犬占40％,以德国牧羊、土种犬为主。对     

猪细小病毒7型Cap基因原核表达与生物信息学分析

利用PCR方法扩增猪细小病毒7型(porcine parvovirus 7,PPV7)的Cap基因,将扩增产物克隆至pGEX-6P-1原核表达载体,构建重组质粒pGEX-6P-1-Cap,并进行测序鉴定。经鉴定正确后的重组质粒转化至E. coli Rosetta感受态细胞进行IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE和Western-blot进行鉴定。同时使用生物信息学软件预测该基因编码的蛋白的理化性质、二级结构、信号肽和跨膜结构域等。结果表明,成功从病料中扩增到Cap基因并构建获得重组质粒pGEX-6P-1-Cap,诱导表达出大小约为78 ku的Cap蛋白,与预期相符。诱导获得的Cap蛋白能够与GST单抗发生特异性反应,具有良好的反应原性。生物信息学分析结果显示,该蛋白是亲水稳定蛋白,二级结构中以无规则卷曲(c)结构居多,占62.90%,α螺旋(h)、β转角(t)、延伸链(e)分别占11.09%、4.05%、21.96%,无信号肽区域和跨膜结构域,存在62个磷酸化位点,12个B细胞抗原表位,2个CTL表位和3个Th表位。本研究成功表达了PPV7 Cap蛋白并预测其生物学特性,为该蛋白质的生物学功能相关研究提供参考。