利用水平微注射技术制备转基因兔的研究（英文）

利用常规微注射系统进行原核胚转基因时,由于其透光性能较差,操作不便等原因,使外源基因导入效率很低,另外其开放构造也易造成污染。为了解决这些问题,本研究有针对性地设计了新型的水平微注射系统,利用此系统,可明显缩短常规注射原核胚的平均时间,注射后原核胚的分裂率、8～16细胞胚胎发育率也明显提高。此外,利用该系统还可在低倍镜下（×100）将DNA常规注射量减半注射,提高了原核胚注射后的成活率,其注射胚的外源基因整合率亦明显提高。采用水平微注射系统,以pMT-hIGF-1为目的基因,在移植产下的24只仔兔中,有5只经Southern blot检测,证明为整合外源基因的转基因兔。     

骨泥营养饼干的加工工艺

骨泥是采用新鲜的含丰富骨髓质的畜骨,在冷冻条件下经过超微细研磨加工而成。其含有多种磷脂质、磷、骨胶质、软骨素,各种氨基酸、维生素及矿物质,具有丰富的营养且味道鲜美。骨泥可以促进婴幼儿生长发育,预防和治疗缺铁性贫血及佝偻病和中老年人因缺钙而引起的骨质疏松等疾病。骨泥与植物性食物搭配加工成的食品,可以强化各种营养成分,尤其是钙、磷元素,以促进机体对营养成分的消化、吸收和利用。因此,骨泥食品是解决我国人群钙营养不足的途径之一。骨泥营养饼干是骨泥食品的一个种类。一、工艺方法１．骨泥加工方法鲜牛骨→选择→…     

传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的原核表达及抗原性分析

应用RT-PCR方法扩增了IPNV编码内衣壳VP3蛋白的基因615bp,将VP3基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌BL21中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约30ku的VP3蛋白,与理论值相符,经薄层扫描分析表明目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的30%。用镍离子亲和层析柱纯化可溶性的VP3蛋白,并制备抗血清。Western-blotting结果显示,VP3蛋白可被兔抗IPNV阳性血清识别;间接ELISA结果显示,IPNV细胞培养物作为抗原,兔抗VP3蛋白高免血清稀释度为1∶25600时,P/N>2,抗血清可与IPNV全病毒发生反应,以上两项结果说明,表达的VP3蛋白与天然的IPNVVP3蛋白一样具有相同的抗原性。试验利用原核表达系统成功地高效表达了IPNVVP3蛋白,融合蛋白以可溶性形式存在,并制备了高效价的抗血清。     

双氢睾酮通过调控孕酮、雌二醇和细胞凋亡参与绵羊子宫功能

旨在探究双氢睾酮（dihydrotestosterone,DHT）是否通过调节孕酮（progesterone,P₄）、雌二醇（oestrogen,E₂）和细胞凋亡参与影响绵羊子宫功能,以揭示其在绵羊生殖生理中的潜在作用。本试验以1.5岁左右的雌性小尾寒羊为试验动物,检测卵泡期、黄体期和妊娠期子宫中DHT合成酶和雄激素受体（androgen receptor,AR）的表达变化。随后,体外培养绵羊子宫内膜上皮细胞,并用DHT （10^-10~10^-7 mol·L^-1）和AR拮抗剂氟他胺（Flu,10^-8 mol·L^-1）处理（n=3）。通过酶联免疫吸附试验、细胞免疫荧光、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测P₄和E₂水平、合成酶和受体表达。此外,还检测经DHT和Flu处理后,绵羊子宫内膜上皮细胞中凋亡因子Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、B细胞淋巴瘤蛋白2（B cell lymphoma protein 2,Bcl-2）、半胱天冬酶3（caspase 3,CASP3）和活化半胱天冬酶3（active-caspase 3,Act-CASP3）的表达变化。结果表明,绵羊子宫不同时期DHT的合成和AR的表达存在差异,妊娠期子宫DHT合成及AR表达显著低于卵泡期和黄体期（P<0.05）。10^-10~10^-7 mol·L^-1DHT处理后,P₄合成酶表达显著上调（P<0.05）,在10^-8~10^-7 mol·L^-1 DHT时P₄合成显著增加（P<0.05）,在10^-10~10^-8 mol·L^-1 DHT时孕酮受体蛋白表达显著增加（P<0.05）,但10^-7mol·L^-1 DHT时孕酮受体蛋白表达显著下降（P<0.05）;在10^-8~10^-7 mol·L^-1 DHT时E₂相关合成酶显著减少,并且E₂水平显著下降（P<0.05）,在10^-9和10^-7 mol L^-1 DHT时E₂受体ERα蛋白显著下调（P<0.05）,在10^-10~10^-7 mol·L^-1 DHT时ERβ和GPER显著增加（P<0.05）。经Flu处理后部分解除DHT对P₄和E₂的调控。此外,10^-10~10^-7 mol·L^-1 DHT显著促进子宫内膜上皮细胞凋亡（P<0.05）。本研究证实DHT至少部分通过AR调节P₄和E₂合成及受体表达,影响细胞凋亡,参与调节子宫功能,这为进一步阐明雄激素参与调节子宫功能提供了新的基础和相关数据。     

水分胁迫对小黑麦生理生化特性和可溶性蛋白质的影响

为揭示小黑麦的抗旱机制并为抗旱育种提供理论依据,采用30％PEG-6000渗透液模拟干旱环境对小黑麦H01-4幼苗进行干旱胁迫处理,结果表明,随着胁迫时间的延长,H01-4叶片相对含水量下降,复水后上升,再胁迫后又下降;脯氨酸含量与叶片相对含水量变化呈相反趋势。H01—4叶片中也诱导出了新蛋白带,胁迫24h诱导产生了26．21kD和23．50kD的新蛋白,胁迫48h诱导产生了29．97kD的新蛋白,49．44kD和27．77kD的蛋白只发生了量的变化。     

小麦转基因技术研究进展

自1992年第一株转基因小麦问世以来,小麦的遗传转化一直受到人们的关注。十几年来,通过转基因技术实现的小麦遗传转化弥补了经典小麦育种的不足,突破了可利用基因库的限制,取得了可喜的进展。本文主要从小麦的转化目标基因、相关报告基因与选择标记基因、转化受体、基因转化方法等方面对小麦转基因技术研究进展做简要概述。     

施用液态有机碳肥对低温胁迫烟苗生长及生理生化特性的影响

为明确烟苗在低温胁迫环境下施用液态有机碳肥的效果,采用盆栽试验,设计1.25、3.75、6.25 g/株等3个液态有机碳肥施用量,在人工气候箱中模拟烤烟移栽初期的低温环境,研究了液态有机碳肥施用量对低温胁迫烟苗的生长、干物质积累及叶片SPAD值、丙二醛含量、硝酸还原酶活性、氧化酶活性的影响.结果表明:施用适宜浓度(1....     

中油杂 501 在陕南黄褐土分布区域轻简化直播栽培技术

陕南地区海拔 900m 以下区域广泛分布黄褐土,耕作层冲刷流失严重,在高温、高湿、多雨的作用下,普遍存在耕性差、有机质和养分缺乏、土质黏重等问题。加之陕南秋淋天气的影响,秋播宜耕期短、油菜出苗率低已成为制约陕南地区油菜生产发展的重要瓶颈。陕南农技人员积极引进了高产、高油、高品质、苗期生长势强的油菜新品种中油杂 501,并在生产实践中结合黄褐土生产特性及秋播期间天气特征,总结了中油杂 501 在陕南黄褐土区域的轻简化直播栽培技术,在汉中、安康等地开展了大面积示范推广。该品种的引进及其在陕南黄褐土区域轻简化栽培技术的研发和推广,丰富了陕南油菜高产栽培技术内容,促进了陕南地区油菜生产技术水平的提高。     

砀山早熟苹果、葡萄量少价俏

本刊讯(特约通讯员葛德光)进入7月以来,安徽省砀山县早熟苹果辽伏、黄魁、伏花皮、藤牧1号、伏帅等品种陆续成熟上市。今年该县早熟苹果上市量稀少,价格持续走高。目前市场上销售的单果重     

传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白在干酪乳杆菌的表面表达

为获得传染性胰腺坏死病毒(IPNV)VP3蛋白在菌体表面表达,本研究将IPNV VP3基因定向插入乳酸杆菌表面表达型载体pPG1,构建的重组质粒pPG1-VP3电转化干酪乳杆菌,获得了重组干酪乳杆菌表达系统pPG1-VP3/Lactobacillus casei393。经1%糖诱导表达后,SDS-PAGE和western blot检测表明,有约31ku蛋白得到了表达,其大小与理论值相符;诱导表达的菌体进行间接免疫荧光试验表明,重组蛋白在菌体表面获得了表达。该病毒VP3蛋白在乳酸菌的表面表达为进一步探讨传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白免疫原性及相关功能奠定了基础。