猪丹毒病原分离鉴定及防治

2014年6—8月江苏淮安数个猪场先后出现疑似猪丹毒的病例,发病猪体温40～42℃,以突然暴发、急性经过和高死亡率为特征。病猪精神不振,不食,结膜充血,粪便干硬,附有黏液。部分发病猪在胸侧、背部、颈部至全身出现界限明显,圆形、四边形,有热感的疹块,指压退色。     

猪圆环病毒2型201105ZJ分离株的遗传变异分析

[目的]了解我国部分地区猪圆环病毒2型（PCV2）的遗传变异特性。[方法]使用细胞传代的方法对 PCR检测为猪圆环病毒2型阳性的病料进行病毒分离,并通过 PCR、IFA进行初步鉴定,并特异性扩增出该分离病毒的全基因组,并进行同源性和系统进化树分析。[结果]该研究成功分离出1株 PCV2毒株,并命名为201105ZJ株;该分离株能在 PK15细胞上增殖,特异性 PCR检测可扩增出特异性片段,经 PCV2阳性血清作用后,呈现特异性免疫荧光,其 TCID50偏低,为102.67;基因组全长1768bp,与13株参考毒株的序列同源性介于94.1%～96.8%;与 AF055392PCV2a的同源性最高,为96.8%;分离株201105ZJ 和AF055392属于基因型 PCV2a,与 PCV2c基因型亲缘关系较远。[结论]该研究中201105ZJ分离株的遗传变异特征对于疫苗的研发、PCV2致病机理的研究和华东地区 PCVAD的防控提供了理论依据。     

规模猪场不同日龄仔猪O型口蹄疫母源抗体消长规律及免疫试验

为确定仔猪口蹄疫疫苗首次免疫时间,以规模化养猪场经猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫后母猪所生产的仔猪为研究对象,利用液相阻断ELISA诊断试剂盒对仔猪母源抗体消长情况进行检测.结果表明,10、20、30、40日龄仔猪99％以上被保护的分别占该日龄组的60％、80％、80％、50％,50、60、70、80日龄仔猪99％以上被保护的分别占该日龄组的40％、0、0、0,60％以上仔猪未被充分保护.随着日龄的增加,抗体效价明显下降.对检测猪O型口蹄疫抗体小于1∶45的45日龄仔猪10头进行猪O型口蹄疫免疫试验,结果O型口蹄疫一免后14 d抗体效价≥27的有10份,达到100％保护.因此,对规模化猪场的仔猪进行口蹄疫疫苗的最佳首免时间为45～50日龄.     

猪圆环病毒2型Rep蛋白基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

采用PCR方法扩增猪圆环病毒2型(PCV-2)Rep蛋白基因,克隆入原核表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21构建重组表达菌,经SDS-PAGE检测目的蛋白得到成功表达,采用His标签单抗和PCV-2阳性猪血清进行Western blot鉴定表明重组蛋白具有良好的抗原性.利用纯化的重组蛋白rRep作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了间接ELISA抗体检测方法.抗原最适包被质量浓度为1 mg/L(0.1 μg/孔),待检血清最适稀释度为1∶100,作用时间为1h,酶标抗体最适稀释度为1∶3 000.用该方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)阳性血清,结果均为阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为＜5％和＜10％,表明本方法具有较好的特异性和重复性.应用rRep-ELISA对113份血清样品进行检测,与rCap-ELISA结果比较,rRep-ELISA检测阳性率为50.44％(57/113),略低于后者的54.87％(62/113),2种方法检测符合率为88.5％(100/113),具有较好的一致性.这为PCV-2感染的流行病学调查和新型ELISA诊断试剂盒的研制奠定基础.     

4例鸭巴氏杆菌病的诊治

近年来,随着养鸭业规模化、集约化程度的不断提高,鸭巴氏杆菌病已成为危害养鸭业的主要传染病之一。2014年8—9月对苏北和皖南地区部分规模化鸭场送检的4例疑似鸭巴氏杆菌感染的病例进行流行病学调查、涂片镜检、生化试验、动物试验和鸭胚接种试验,最终确诊为鸭巴氏杆菌病。分别对4株分离菌株进行药敏试验,结果表明:不同分离菌株对相同药物的敏感性存在差异,多数分离菌株对头孢曲松、头孢噻肟和左旋氧氟沙星的敏感性较高,安徽分离菌株的耐药性较为严重。治疗情况表明:药敏试验结果与临床用药效果均比较吻合;发病原因可能与苏皖地区2014年秋季雨水较多有一定关系。     

2013～2014年猪嵴病毒分子检测和3D基因遗传变异分析（英文）

[目的]为调查猪嵴病毒(PKV)在我国哺乳仔猪中的流行和变异情况。[方法]采集2013~2014年我国5个省份27个猪场224份哺乳仔猪腹泻粪样,采用RT-PCR方法对PKV的3D基因进行检测,并对其中的29个PKV3D基因进行序列测定和遗传变异分析。[结果]腹泻粪样中PKV总阳性率为65.18%(146/224),猪场PKV总阳性率为85.2%(23/27);29个PKV3D基因与国内外6株其他PKV株相关序列的核苷酸同源性为87.0%~100%,所推导的氨基酸序列同源性为92.7%~100%。[结论]我国哺乳仔猪中普遍存在PKV感染,PKV 3D基因呈现多样性。     

类圆环病毒因子P1感染对猪外周血单个核细胞抗病毒蛋白mRNA转录的影响

为探讨类猪圆环病毒2型因子P1感染对猪抗病毒蛋白分子mRNA转录的影响,将P1分子克隆接种30日龄健康广西巴马小型猪,利用实时荧光定量PCR技术对猪外周血单个核细胞抗病毒蛋白分子PKR、2'-5'OAS2、 RNase L和Mx1的mRNA转录水平的变化进行了定量分析。结果表明,PKR mRNA转录在接种后8 d和40 d呈上调趋势;而2'-5'OAS2 mRNA在3 d和17 d下调,Mx1 mRNA也在接种后17 d下调;RNaseL mRNA转录水平则没有发生明显变化。研究揭示P1感染猪后,机体的抗病毒蛋白的功能受到了不同程度的影响。     

类猪圆环病毒因子P1感染对外周血单个核细胞Toll样受体mRNA转录的影响

采用实时定量反转录多聚酶链反应方法,检测健康对照组及类圆环病毒因子P1感染组的猪外周血单个核细胞中TLRs mRNA的表达。结果表明,病毒感染后3 d,除TLR2和TLR10外,其余TLRs mRNA表达皆下调。此后不同时相感染组的TLRs mRNA表达水平基本都处于恢复、上调地位。具有明显变化的表现为感染后第24天和第40天,TLR2 mRNA的表达显著上调(P0.05);此外,感染后第31天和第40天的TLR9 mRNA表达也呈现上调趋势(P0.1)。结果提示,TLR2和TLR9介导的炎性反应可能在P1识别及其致病机制中起重要作用。     

2008-2010年中国华东地区PRRSV ORF5基因遗传变异分析(英文)

[目的]对来自2008～2010年中国华东地区7个不同省市的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场送检的病料进行PRRSV检测,并对其ORF5基因进行测序,确定当前PRRSV在中国华东地区的分子流行病学特征,并分析PRRSV在中国的遗传演化规律。[方法]利用RT-PCR方法对采集的样品进行PRRSV检测,并对PRRSV检测呈阳性的36份病料进行ORF5基因的序列测定和分析。[结果]260份病料中共检测到118份PRRSV阳性样品,阳性率为45.4%。ORF5序列分析和系统进化树分析结果表明,本试验所获得的36株PRRSV毒株序列均属于北美型,与GenBank中高致病性PRRSV(HP-PRRSV)参考毒株的氨基酸同源性为94.6%～100%,并可分为5个亚群,亚群III与HP-PRRSV同源性最高,几乎所有的亚群中和表位(primaryn eutralizing epitope,PNE)都存在变异,亚群III和IV相对于其它亚群具有更多的糖基化位点。由于36个毒株是于2008～2010年间采集自安徽、江苏、上海等7省,进化树分析结果表明,病毒的分型并没有呈现明显的地域性。[结论]2008-2010年间中国华东地区普遍存在PRRSV感染,PRRSV流行株为HP-PRRSV,其遗传演化相对稳定,但也具有不同的遗传特征。来源于不同省市的PRRSV毒株的遗传关系存在交叉,虽然亚群IV和V只出现在部分省市,但PRRSV的分布没有呈现明显的地域特征。     

猪抗病毒蛋白基因重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的建立

根据GenBank中的猪抗病毒蛋白PKR、OAS/RNase L及Mx核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增和克隆了PKR、OAS/RNase L及Mx的101 bp核苷酸片段。测序鉴定后,将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板,通过实时荧光定量PCR方法,建立了抗病毒蛋白PKR、OAS/RNase L及Mx标准曲线及其直线回归方程;该方法具有线性关系好,特异性、敏感性、重复性高等特点;建立的荧光定量PCR方法可检测抗病毒蛋白PKR、OAS/RNase L及Mx mRNA水平。为猪体内抗病毒蛋白PKR、OAS/RNase L及Mx的mRNA水平的定量检测提供必要的技术。