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【目的】克隆小麦籽粒胚乳14-3-3基因,并进行体外表达,为进一步研究其对籽粒生长发育的调控作用奠定基础。【方法】根据已有同源基因保守序列,设计插入限制性酶切位点的特异性扩增引物,采用RT-PCR方法扩增发育的小麦胚乳14-3-3基因,克隆测序后转入表达载体,在大肠杆菌中进行表达,并进行纯化。【结果】从开花后灌浆13-15 d的小麦品种济麦22籽粒胚乳中克隆到1个14-3-3基因,序列分析表明为非ε型,含1个777 bp的开放阅读框,编码蛋白259 aa,分子量约29 kD。核苷酸序列分析表明与小麦、水稻、玉米、大麦、大豆等主要农作物和模式植物拟南芥的14-3-3基因有较高的同源性,最高达98%,编码蛋白氨基酸长度也一致(260 aa左右);在大肠杆菌中高效表达的重组蛋白约为30 kD,分子量大小与根据核苷酸序列推导的编码蛋白一致。从基因序列的同源性、编码蛋白的氨基酸长度、表达蛋白的分子量大小分析都说明克隆到的基因为14-3-3基因,并准确插入表达载体,得到了高效正确表达。将克隆的基因插入pET29c载体,热激转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP,得到了高效表达,但主要以包涵体形式(80%)存在。对重组蛋白进行了纯化,可溶性重组蛋白利用S-蛋白琼脂糖树脂得到纯化的蛋白,包涵体重组蛋白经变性溶解、复性后,也利用S-蛋白琼脂糖树脂得到了高度纯化的重组蛋白。【结论】利用RT-PCR技术从发育的小麦胚乳中克隆到1个14-3-3基因,并在大肠杆菌中得到了高效表达,重组蛋白经过纯化得到了纯度较高的活性蛋白。 相似文献
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随着城镇化步伐不断加快,城乡人口结构、就业结构、社会结构调整,我国农业发展方式由传统小农业生产向新型农业经营体系加快转变,以农业大户、农民专业合作社、家庭农场和农业产业化农头企业为代表的新型农业经营主体已展现了巨大的活力。 相似文献
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基于支持向量回归的鱼粉TVB-N值电子鼻检测 总被引:1,自引:0,他引:1
挥发性盐基氮(TVB-N)是衡量鱼粉新鲜度一个十分重要的指标,探索鱼粉TVB-N快速检测方法对鱼粉品质检测具有重要意义。利用研制的电子鼻对不同新鲜度的鱼粉样本进行电子鼻数据采集,建立了电子鼻数据和TVB-N值之间的支持向量回归模型(SVR),利用预测集进行验证,并与多元线性回归(MLR)方法进行比较。结果表明,支持向量回归模型预测精度优于MLR模型,其决定系数R2、预测标准差SEP、最大相对误差RE-max、平均相对误差RE-mean分别为0.910、4.32、8.92%、1.87%。支持向量回归和电子鼻技术检测鱼粉TVB-N含量是可行、有效的方法。 相似文献
200.
基于模糊物元的新疆伊犁河谷水库移民可持续生计评价研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为确立水库移民生计评价体系和量化标准系统,采用层次分析法和统计分析法并结合模糊物元模型对伊犁河谷水库移民可持续生计状况进行实证评价。结果表明,伊犁河谷水库移民的总体生计处于维持搬迁前的水平,离生计可持续目标还存在较大的差距,原因主要集中在经济基础和政策保障两方面。收入、土地产出、就业保障、职业技能水平和移民生活融入度对伊犁河谷水库移民生计的可持续发展有主要影响,因此,可以通过健全组织管理机构、增加移民认可度和完善后扶保障体系来实现伊犁河谷水库移民生计的可持续发展。 相似文献