犬SLAM基因真核表达载体的构建及在MDCK细胞中的稳定表达

为了构建稳定表达犬信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的MDCK细胞系,该研究从犬外周血淋巴细胞中克隆了犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)细胞受体SLAM基因,将鉴定正确的SLAM基因插入到高效真核表达载体pcDNA3.1(+)中.采用脂质体转染的方式将重组质粒pcDNA3.1/SLAM转染到MDCK细胞中,采用G418加压筛选及有限稀释法克隆,获取稳定表达SLAM的MDCK细胞株.结果表明,成功构建了SLAM的真核表达载体pcDNA3.1/SLAM,并通过G418筛选获得了稳定表达SLAM的细胞系MDCK.     

水泡性口炎病毒人工感染小白鼠的免疫病理学研究

[目的]探讨水泡性口炎病毒在动物体内的致病机制。[方法]利用H.E、免疫组织化学染色法,研究了水泡性口炎病毒感染小白鼠的免疫病理过程。[结果]病变以肺脏变化最明显,脑次之,呈肺淤血、出血、水肿及支气管肺炎变化,大脑皮质有脓性坏死灶。免疫组化染色显示,肺、脑部和脊髓出现了阳性反应,脑的阳性率高。[结论]水泡性口炎病毒对小白鼠的致病性主要表现在肺脏和脑部。     

人参皂苷及其衍生物体外抗MDV的作用

通过透射电子显微镜观察人参皂苷及其衍生物对马立克氏病毒(MDV)感染鸡胚成纤维细胞(CEF)的保护效果,探讨人参皂苷及其衍生物体外抗马立克氏病毒的作用机理。结果表明,人参皂苷及其衍生物均具有较好的抗病毒作用,可以减轻病毒对鸡胚成纤维细胞的损伤程度。     

人参皂苷Rg3体内抗马立克氏病毒的作用

为探讨人参皂苷Rg3对马立克氏病毒感染的防治效果,采用马立克氏病毒人工感染雏鸡模型,通过人参皂苷Rg3口服途径,并应用发病率、保护率、平均存活日龄等指标来评价了药物对机体的保护作用。结果表明,人参皂苷Rg3可明显降低试验鸡的发病率与肿瘤检出率,能保护感染鸡的免疫器官,增强了感染鸡的免疫力,具有抗病毒作用。     

抗鸡致病性大肠杆菌中药的筛选及其疗效观察

[目的]为获得有效防治鸡大肠杆菌病的中药制剂奠定基础。[方法]以西药盐酸洛美沙星氯化钠注射液为对照,对15味中药及7个自拟中药复方进行药敏试验,并对7个中药复方和体外抑菌效果较好的单味中药进行体内试验。[结果]药敏试验结果表明,15味单味中药均有一定的抗大肠杆菌作用,其中以芦荟、石榴皮、地榆等抑菌效果明显。7个自拟复方中复方一、复方二和复方五的抗大肠杆菌效果较好。体内试验结果表明,中药对人工感染大肠杆菌的鸡只治疗效果优于西药,以复方一和复方二效果较好。[结论]中药制剂对鸡大肠杆菌病具有较好的治疗效果,但其在体内与体外的抑菌作用机制有所不同。     

犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定

用纯化的犬瘟热病毒免疫Balb/C小鼠,采用问接ELJSA方法筛选分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,挑选阳性孔进行亚克隆,用Vero细胞交叉反应试验及间接免疫荧光试验检测单抗的特异性.结果获得6株能稳定分泌抗犬瘟热病毒的单克隆抗体细胞株,分别命名为AD7、AE2、CE3、EH5、GG6和GF1.交叉反应试验及间接免疫荧光染色检测表明,6株单抗的特异性良好;经过体外连续传代及反复冻存、复苏,杂交瘤细胞均能稳定分泌特异性单抗.培养上清液及小鼠腹水ELISA效价分别为26～211和104～107.相加试验表明:单抗AE2、CE3、GG6和GF1具有共同的表位,而单抗AD7和EH5识别的位点与其他4株不同.     

马立克氏病毒pp38基因的克隆测序和B细胞抗原表位预测

对Ⅰ型马立克氏病毒的pp38基N进行了扩增、克隆及序列测定。采用DNAStar Protean软件对pp38蛋白的二级结构、亲水性和抗原性指数等参数进行分析，并预测其B细胞表位分布。结果表明，pp38基N长873bp，包含完整的开放阅读框架，编码290个氨基酸。蛋白的B细胞表位可能位于第1～11，18～162，180-217和274-290位等氨基酸区域内或附近。本试验为pp38蛋白的表达和抗体制备奠定了理论基础。     

TaqMan探针实时荧光定量PCR诊断犬瘟热病毒方法的建立

根据犬瘟热病毒核蛋白基因的保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针建立荧光定量PCR。构建FQ-PCR绝对定量的标准品,并对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用十倍稀释法检验方法的灵敏度并与普通RT-PCR法进行比较;特异性检验后进行临床标本的检验。结果显示:实验成功构建了绝对定量的参照质粒,标准曲线相关系数为0.994。犬瘟热病毒FQ-PCR检测反应的灵敏度为10TCID50;5种非犬瘟热病毒病原体检测均为阴性;说明实验建立的FQ-PCR具有快速、灵敏和稳定的特点,适用于临床样品的检验。     

犬细小病毒四川株的分离与鉴定

为更好地了解我国细小病毒流行情况,笔者从四川农大动物医院采集5份患出血性肠炎犬的粪便,通过猫肾细胞(F81)传代培养后,成功分离到两株犬细小病毒。对两株病毒进行病毒形态学、理化学、血凝试验、PCR鉴定与分子生物学系统鉴定后,证实分离株是犬细小病毒,通过VP2结构蛋白测序分析表明,新分离到的两株细小病毒抗原型分别属于CPV-2a和CPV-2b。     

乌鸡肠道中一株乳酸菌的分离鉴定及生物学特性研究

本试验采用添加碳酸钙的MRS培养基作为筛选培养基，从乌鸡肠道中筛选乳酸菌，并对分离到的菌种进行16S rDNA基因序列鉴定以及益生性能研究，测定其生长速率、产酸能力、耐酸和耐胆盐性能、抑菌能力及抗生素敏感性。试验结果表明：分离到的溶钙圈较好的菌株N为乳酸菌，分离菌株N产酸能力强，达到对数期的时间短，在低pH、高胆盐浓度时，仍具有较好生长活性。 [关键词] 乳酸菌|乌鸡|益生性能