犬SLAM基因真核表达载体的构建及Vero细胞系转染的研究

为了研究犬瘟热病毒细胞受体SLAM基因的特性和功能。将基因SLAM克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建真核表达载体pCDNA3.1/SLAM,重组质粒纯化后应用脂质体2000转染到Vero细胞中,通过RT-PCR和免疫印迹方法检测犬SLAM基因在Vero细胞中的转录和表达情况。结果表明：成功构建了表达SLAM基因的真核表达载体,RT-PCR和免疫印迹显示SLAM基因获得表达;pcDNA3.1/SLAM载体的构建为研究犬SLAM基因在Vero细胞中的稳定表达奠定了基础。     

犬细小病毒四川株的分离与鉴定

采集5份患出血性肠炎犬的粪便,通过猫肾细胞(F81)传代培养后,成功分离到2株病毒。对2株病毒进行病毒形态学、理化学、血凝试验、PCR鉴定与分子生物学系统鉴定后,证实分离株是犬细小病毒,通过VP2结构蛋白测序分析表明,新分离到的2株细小病毒抗原型分别属于CPV-2a和CPV-2b。     

七味地藿颗粒黄酮的提取工艺优化研究

采用超声波辅助乙醇提取法提取七味地藿颗粒中的黄酮,通过NaNO_2-AL(NO_3)_3-NaOH显色体系应用紫外分光光度法对该方剂中黄酮的含量进行测定,分析提取时间、料液比、超声波功率、乙醇浓度、提取温度等因素的影响,并在此基础上进行正交试验,优化提取工艺参数。结果表明,提取时间为45min,料液比为1∶25,超声波功率为300W,乙醇浓度为600mL/L,提取温度为60℃时,七味地藿颗粒黄酮提取效果最好,提取率为18.45mg/g。该优化工艺条件稳定、可靠,为工业化生产七味地藿颗粒奠定了技术基础。     

植物多糖免疫调节功能研究进展

对植物多糖的免疫调节功能进行了综述,归纳总结了植物多糖对免疫器官、细胞、细胞因子和免疫信号通道的免疫调节作用及在黏膜免疫方面的最新研究进展。     

白头翁药理作用研究进展

白头翁为毛茛科白头翁属植物的干燥根入药,是临床治疗消化道疾病的要药,无论是单味使用,还是作为君药使用的白头翁汤,均具有较好的预防和治疗效果。现代药理研究证实,白头翁的提取物具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗血吸虫、抗球虫和促免疫等功效。对白头翁药理作用的研究进展进行了综述。     

基于DPPH自由基清除效果研究白头翁的提取工艺

为了优化白头翁的提取工艺,以白头翁提取液对DPPH自由基的清除率作为评价指标,考查料水比、提取时间、提取次数、提取温度等不同单因素对白头翁提取液清除DPPH自由基效果的影响,并通过正交试验对单因素结果进行优化。结果表明,当料水比为1∶40、提取时间为45min、提取次数为2次、提取温度为60℃时白头翁提取液对DPPH自由基的清除率最大,可达到54.9%。由该结果可以得出,提取方法对白头翁提取液清除DPPH自由基效果具有影响,高温和长时间提取可能对白头翁提取液清除DPPH自由基的有效成分具有破坏作用。     

芦荟多糖提高鸡免疫功能的研究

[目的]研究芦荟多糖对鸡免疫功能的作用。[方法]采用环磷酰胺复制雏鸡免疫抑制模型,通过多项免疫学指标检测,探讨芦荟多糖对正常、免疫抑制及新城疫疫苗免疫雏鸡免疫功能的影响。[结果]芦荟多糖可以增加健康雏鸡的增重,促进免疫器官胸腺、脾脏和法氏囊的发育,特别是胸腺的发育,对正常雏鸡血清IFN-γ和血清IL-2具有一定的诱生能力;芦荟多糖对于环磷酰胺引起的雏鸡免疫抑制试验显示,可以明显增加免疫抑制雏鸡的增重,能促进血清IL-2和IFN-γ的诱生,提高机体的抵抗力,特别是在高剂量对IL-2的诱生作用上差异显著（P〈0.05）;芦荟多糖能够提高ND抗体水平。[结论]芦荟多糖可以改善正常雏鸡的免疫状态、增重和细胞因子诱生水平。     

水泡性口炎病毒诱导BHK-21细胞凋亡的初步研究

采用倒置相差显微镜、电子显微镜、琼脂糖凝胶电泳等技术研究水泡性口炎病毒诱导BHK-21细胞凋亡．形态学观察结果显示,水泡性口炎病毒感染BHK-21细胞的形态变化具有较典型的凋亡特征,如细胞膜内陷、核染色质凝集边聚等;琼脂糖凝胶电泳出现180-200bp整倍数的DNA梯形带．上述结果表明水泡性口炎病毒可诱导BHK-21细胞凋亡。     

中药抗大肠杆菌病研究进展

分析了大肠杆菌给人类和动物造成的危害,介绍了大肠杆菌的防治现状,阐述了中药防治大肠杆菌的概况,并从中药抗大肠杆菌病的研究近况和临床应用前景方面论述了目前国内外中草药的研究现状。     

中性红染色法检测人参皂苷及其衍生物对CEF增殖的影响（摘要）

[目的]为体外研制人参皂苷及其衍生物的抗MDV作用机制提供理论依据。[方法]分别吸取各试验药物（人参皂苷、人参皂苷衍生物1～8,阳性对照盐酸吗啉胍）溶液0.5 ml至24孔细胞培养板第1孔中,然后1～10孔每孔加入0,5 ml细胞维持液,再将第1孔内液体混匀,吸取0.5ml至第2孔内,再混匀,吸取0.5ml至第3孔内,如此反复至第10孔。则药物的稀释倍数分别为2~1～2~（10）。其浓度分别是3.000 mg/ml,1.500 mg/ml,0.750 mg/ml,0.375 mg/ml,187.500μg/ml,93.750μg/ml,46.880μg/ml,23.440μg/ml,11.720μg/ml,5.860μg/ml。采用中性红染料吸收法,检测人参皂苷及其衍生物对鸡胚成纤维细胞（CEF）体外培养中增殖活性的影响。试验中必须结合细胞病变观察法,通过在光镜下观察细胞的CPE,确定进行测定的最佳时间,以保证结果的准确性。具体操作如下：测定前2 h各孔加入50μl中性红染液,测定时倒掉孔内液体,用PBS洗细胞3次,每孔加入200μl脱色液,置微量振荡器上振荡10 min,使结晶溶解。然后用酶联免疫检测仪测定OD（570）值,作为细胞增殖的指标。OD值与活细胞的增殖呈正比,OD值越大,表明细胞增殖越旺盛。[结果]人参皂苷在大于750μg/ml浓度下对细胞有毒性,在5.86～46.88μg/ml浓度下对细胞有促增殖作用。毒性作用在72 h下降,而促增殖作用在给药24 h后就表现出来。衍生物1在高浓度的4组均有毒性,OD值显著低于细胞对照组,但衍生物1的促增殖作用不明显。衍生物2在48～72 h分别有5～6组高浓度的OD值显著低于细胞对照组。衍生物3在高于187.5μg/ml的浓度时,OD值低于细胞对照组,并且在72 h时,有2组OD值（11.72和5.86μg/ml）高于细胞对照组,表现出促增殖作用。衍生物4的毒性较高,大部分孔的OD值显著低于正常对照组。衍生物5在浓度高于187.5μg/ml时,OD值低于正常细胞对照组（P〈0.05）,在24和72 h,分别有一组的OD值显著大于细胞对照组。衍生物6的毒性较大。衍生物7的促增殖作用较明显,从浓度93.75μg/ml开始以后的OD值都大于细胞对照组,且在48 h有2组,72 h有3组显著大于细胞对照组。衍生物8在72 h时,低浓度表现出促增殖作用。盐酸吗啉胍没有促增殖作用,3 000μg/ml浓度下与细胞对照组的OD值差异显著。可见,各药物的促增殖作用不完全相同,低毒性的药物促增殖作用更明显。从药物对CEF细胞的不同作用时间点来看,以72 h的OD值和正常对照的差异最大,在24 h和正常对照组差异不显著。[结论]人参皂苷及其衍生物在中、低浓度能够促进CEF细胞的增殖,且药物作用具有时间依赖性。