近暗散白蚁 β-葡萄糖苷酶RpBgl7的异源表达及酶学性质研究

为研究近暗散白蚁(Reticulitermes perilucifugus)β-葡萄糖苷酶RpBgl7,利用生物信息学分析β-葡萄糖苷酶RpBgl7的家族及结构特点,构建RpBgl7的重组表达载体pCold-TF-RpBgl7,在大肠杆菌中过量表达并纯化,分析其最适反应条件和酶动力学参数。结果表明,RpBgl7属于糖苷水解酶1家族,具有2个保守的谷氨酸催化残基Glu187和Glu394。RpBgl7在BL21(DE3)中过量表达,经过镍离子亲和层析1步纯化可得到高纯度RpBgl7重组蛋白。以4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷为底物,测得RpBgl7的最适pH值为6.0,最适温度为70℃;动力学参数K_m=0.13 mmol/L,k_(cat)=3.15 s~(-1)。RpBgl7可耐受Na~+、K~+、Mg~(2+)、Cu~(2+)和Ba~(2+),而Ca~(2+)、Hg~(2+)和Fe~(3+)明显抑制RpBgl7的酶活力。     

正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库构建及EST初步分析

【目的】构建猪淋巴细胞基因文库,初步绘制正常猪外周血淋巴细胞的基因表达谱,为进一步筛选免疫相关基因提供平台。【方法】以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与质粒载体连接后转化大肠杆菌,进一步扩增后,获得猪外周血淋巴细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合,并进行序列分析和注释。【结果】构建了正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库,获得库容量为1．2×10^6PFU／mL、重组率为93．3％、85％插入片段处于750～2000bp的高质量文库;随机测定1100条ESTs,经拼接和聚类,获得152条高表达的基因重叠群（Contigs）和619条低表达基因——单拷贝的EST（Singletons）;经序列比对分析,发现23．3％ESTs为与任何物种都没有匹配的新基因,75．9％ESTs为与猪没有匹配的新基因。用GO数据库对获得的EST进行基因功能分类和KEGG路径图分析,发现丝裂原活化蛋白激酶途径（Mitogenn—activated protein kinase,MAPK）、钙信号通路、胰岛素信号通路、脂肪细胞因子信号通路、Toll—like受体信号通路、B细胞受体信号通路和T细胞受体信号通路的基因均有较高表达。【结论】大部分的猪外周血淋巴细胞基因尚未被分离和鉴定出来,但这些基因mRNA转录和表达丰度均较高,且在猪外周血淋巴细胞中起着非常重要的作用。     

蛋白质饲料鱼粉、豆粕的掺假鉴定及分析

对蛋白质饲料鱼粉和豆粕的掺假鉴定方法进行了概述.分析结果表明,蛋氨酸和赖氨酸含量可作为鉴定这两种饲料掺假与否的指标.     

迷迭香提取物降低仔猪断奶氧化应激的机制研究

试验旨在研究迷迭香提取物对断奶仔猪氧化应激的影响。选择144头体重8.0 kg左右、26日龄断奶的“杜×长×大”三元杂交仔猪,随机分为4组,每组6个重复,每个重复6头仔猪（公、母各半）。对照组仔猪饲喂基础日粮,试验组（200、400、600 mg/kg RE组）分别在基础日粮中额外添加200、400、600 mg/kg迷迭香提取物（RE）。试验期24 d。结果显示,与对照组相比,添加200 mg/kg RE能够显著提高仔猪平均日增重和平均日采食量（P<0.05）,显著降低料重比（P<0.05）。试验第10 d,与对照组相比,试验组断奶仔猪血清中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性显著升高（P<0.05）,600 mg/kg RE组断奶仔猪血清中过氧化氢酶（CAT）活性显著升高,丙二醛（MDA）含量显著下降（P<0.05）;试验第10 d,200 mg/kg RE组断奶仔猪血清中胰岛素样生长因子1 (IGF-I)和胃饥饿素（Ghrelin）水平显著提高（P<0.05）,400 mg/kg RE组断奶仔猪血清中生长激素（GH）水平显...     

白蚁肠道内的共生微生物区系

白蚁是少数几种以木质纤维素类物质为食的动物之一,在自然界木质纤维素循环中担当重要角色,并可为木质纤维素转化为生物燃料提供生化催化剂。白蚁的后肠内包含有密集的和种类丰富的微生物,这些微生物可降解纤维素和半纤维素、发酵成短链的脂肪酸、脂肪酸被白蚁吸收,它们主要有原生动物(低等白蚁)、细菌、真菌等。综述了白蚁肠道内共生微生物与宿主的共生关系及其微生物的应用前景。     

植物血凝素对小白鼠免疫功能的影响

[目的]探究植物血凝素对小白鼠免疫功能的影响。[方法]以小白鼠为试验动物,试验设试验组和对照组,各试验组腹腔注射不同剂量的植物血凝素,对照组腹腔注射生理盐水,连续注射15 d处死并测定免疫器官指数、巨噬细胞吞噬指数、血清中抗体水平、E玫瑰花环形成率4项指标。[结果]结果表明:试验各组与对照组比较,免疫器官指数无显著差异(P>0.05);巨噬细胞吞噬指数、血清中抗体水平、E玫瑰花环形成率3项指标均有显著差异(P<0.05)。[结论]植物血凝素的中剂量组(120μg)可显著提高小白鼠的体液免疫功能和细胞免疫功能。     

动物学野外实习教学的改革模式探索

介绍了动物学野外实习模式的改革,包括建立稳定的实习基地、明确实习目的和要求、做好实习前的准备工作、改进实习方法、建立综合的考核方式等,在提高学生动物学实践能力,保证实习质量方面取得了初步成效。     

正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库部分EST序列的电子克隆及验证

【目的】探讨从EST序列电子克隆全长基因序列的有效性,为今后快速克隆和研究免疫相关基因提供新方法。【方法】以正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库测序所得的EST序列作为起始材料,应用生物信息库对文库中的部分EST序列进行电子克隆,并用RT-PCR验证其准确性。【结果】电子克隆正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库序列,共获得20条片段重叠群（Contigs）,经基因注释,证实其均得到了有效延伸,具有完整开放阅读框（ORF）,其中已知的猪基因序列14条,猪新基因序列6条;从已知猪基因序列和未知猪新基因序列中各抽取1条感兴趣序列（EST contig110和EST contig133）进行全长cDNA预测,发现电子克隆所得序列EST contig110和EST contig133的预期扩增片段（ORF）与实际扩增片段（ORF）基本一致,核苷酸相似性在98.0%以上,氨基酸相似性在93.0%以上。而对EST contig133的ORF序列（猪的60S核糖体蛋白L18a亚基）进行基本特性及结构预测,发现ORF133蛋白为非分泌型蛋白,由6个折叠和6个螺旋结构组成,含有8个不同的磷酸化位点。【结论】从EST序列电子克隆全长基因是可行的,为今后快速克隆和研究免疫相关基因提供了参考。     

浅谈沙质堤防生物治理

1堤防现状 辽中县地处辽河下游,为防洪而修建的各级堤防,在辽中县境内有辽、浑、绕、蒲河堤防近268km,多为就地取材,根据当地土质修成的均匀土坝.其中沙基沙坝段占相当大的比例.这种坝堤在防洪减灾方面发挥了巨大作用.但因其筑坝材料为沙土,抗侵性较差,尤其是抗洪水、风浪冲刷性能更差.随着时间的推移、工程运用和自然侵蚀,使工程标准有所降低.虽然堤防工程建成后,栽植了防浪林,但树木生长需要一段过程,而不能马上发挥效益,致使堤防坝身侵蚀严重,堤坡变瘦,其中沙坝段表现的尤为突出.被洪水冲刷的堤防,原设计边坡已变为陡坡,坝堤运行出现隐患,影响防洪工程整体效益的发挥.     

根癌农杆菌介导mBt886Cry3Aa转化菊花及对菊天牛毒杀作用

 【目的】将对鞘翅目害虫有毒杀作用的基因 mBtCryAa 转入菊花;并测定转基因菊花对靶标害虫—菊天牛的毒杀效果;为防治鞘翅目害虫提供新途径。【方法】以菊花为材料;确定茎段最适分化培养基和不定芽最佳生根培养基;卡那霉素最适筛选浓度;头孢噻肟钠最适抑菌浓度;通过农杆菌介导法完成mBtCryAa的遗传转化;利用转基因菊花与人工饲料混合对菊天牛 龄幼虫饲喂进行室内生物测定。【结果】经卡那霉素筛选和 PCR 检测;最终得到 株转基因菊花;选取长势健壮的 株转基因菊花混合人工饲料喂养菊天牛 龄幼虫;结果表明菊天牛 龄幼虫取食转基因菊花后的死亡率与对照幼虫（CK）死亡率差异显著。【结论】室内生物测定表明转基因菊花对菊天牛 龄幼虫具有较强的毒杀作用。