生长因子及其受体(综述)

本文综述了各类生长因子及其受体的研究进展，着重介绍了各类生长因子的结构、分泌与功能；并讨论了生长因子对卵泡发育和早期胚胎发育等生殖过程的影响。     

猪多能干细胞的分离、鉴定与应用前景

多能干细胞来源于着床前的囊胚内细胞团或早期胎儿的原生殖细胞,具有分化为多种特定细胞类型的能力;可在体外适宜培养条件下无限增殖并保持未分化状态,并且具有正常的核型。本文重点讨论猪多能干细胞分离建系的研究现状及其应用前景,并对嵌合体形成及生殖系传递能力的实验进展情况进行了分析。     

血管紧张肽Ⅱ在哺乳动物卵巢中的作用

肾素-血管紧张肽系统(renin-angiotensin system,RAS)是哺乳动物体内重要的生理功能调节系统,血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)是RAS发挥功能的主要活性物质。AngⅡ通过与其受体(AT1R和AT2R)的特异性结合,激活细胞内多种信号转导通路,在动物卵巢功能调节过程中起着重要的作用。本文就AngⅡ及其受体在哺乳动物卵巢的分布、作用和发挥作用的信号通路等进行综述。     

敲低TPX2对猪卵母细胞纺锤体组装及凋亡的影响

[目的]本研究旨在探究Xklp2靶蛋白(TPX2)在猪卵母细胞减数分裂过程中的表达定位及其潜在功能。[方法]采集猪卵丘-卵母细胞复合体(COC)并随机分组后进行体外成熟培养,通过间接免疫荧光染色与蛋白免疫印迹等方法检测TPX2在卵母细胞减数分裂过程中的亚细胞定位与动态表达情况;通过生发泡期(germinal vesicle, GV)显微注射特异性siRNA以敲低TPX2,研究其对卵母细胞减数分裂进程、纺锤体结构以及早期凋亡的影响。[结果]TPX2在第一次减数分裂中期(metaphaseⅠ,MⅠ)表达量显著上升,其亚细胞定位与α-微管蛋白(α-tubulin)的分布特点相似,并主要富集在纺锤体两极。TPX2被敲低后卵母细胞第一极体(PB1)排出率显著下降(P<0.05),且大多数细胞被阻滞在生发泡破裂期(GVBD)和第一次减数分裂后末期(ATⅠ),同时纺锤体结构异常比例显著升高(P<0.05),并伴随染色体排列紊乱。与对照组相比,敲低TPX2后卵母细胞早期凋亡率急剧增加(P<0.05),凋亡相关基因Caspase 3表达量以及Bax/Bcl2值显著升高(P<0.0...     

猪瘟病毒中和性单克隆抗体制备及阻断ELISA方法建立

采用毕赤酵母表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接免疫荧光(IFA)筛选,获得了17株特异性单抗。经病毒中和试验(VNT)验证,上述单抗均具有CSFV中和活性,其中单克隆抗体3H9的病毒中和效价最高,大于1∶10 240。采用HRP标记的CSFV单抗3H9为阻断抗体,配合酵母表达的CSFV E2蛋白作为包被抗原,建立了一种用于检测猪血清中CSFV中和抗体的阻断ELISA方法。该方法优化后的抗原包被浓度为0.5μg/mL,阻断抗体稀释度为1∶8 000。通过对100份阴性猪血清的检测,确定该方法的阻断率cut-off值为30%。该方法敏感性高,对中和抗体效价低至1∶16的血清检测仍呈阳性;特异性强,仅与CSFV抗体阳性猪血清呈阳性反应,与其他猪病病毒及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体阳性猪血清均呈阴性反应;良好的可重复性,批内、批间变异系数分别为0.90%～3.21%、1.89%～6.57%,均小于10%。对188份现有猪血清检测结果显示,该方法与病毒中和试验和IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合率分别为96.3%、94.7%。用该方法对南京市浦口区某养殖场...     

Aurora A对猪卵母细胞向胚胎转换过程中纺锤体结构的影响

极光激酶A(Aurora A)是一种参与体细胞中心体复制、纺锤体组装与胞质分裂等生物学事件的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶.为了探讨AuroraA在猪(Susscrofa)卵母细胞向胚胎转换这一特殊时期的动态表达及其相关功能,本研究采用间接免疫荧光结合激光共聚焦显微成像技术检测AuroraA在转换过程中动态表达与亚细胞定位,并在此基础上通过特异性抑制实验分析Aurora A在该特殊转换时期的调节作用.结果表明,AuroraA在猪卵母细胞向胚胎转换的各个时期均有表达,并与α-微管蛋白(α-tubulin)具有相似的亚细胞定位;使用AuroraA特异性抑制剂MLN8054处理卵母细胞,卵母细胞的第一极体排出率呈浓度依赖性下降,且纺锤体异常率显著升高(P＜0.05);将经MLN8054处理且排出第一极体的卵母细胞孤雌激活后,胚胎卵裂率与对照组相比无显著差异.结果表明,在猪卵母细胞向胚胎转换过程中,AuroraA 的表达与α-tubulin分布密切相关,且呈现阶段性分布特点;AuroraA主要通过调节纺锤体组装及其稳定性参与猪卵母细胞成熟分裂的调控;MLN8054抑制AuroraA后,对所获得的第二次减数分裂中期(metaphaseⅡ,MⅡ)卵母细胞顺利向胚胎期转换并无显著影响.研究结果为进一步了解AuroraA在猪卵母细胞向早期胚胎转换这一特殊时期的调控作用提供了重要的实验依据.     

猫的繁育管理

猫属季节性多次发情动物 ,在繁殖方面具有许多独特的特征和规律 ;猫繁育研究有助于加深对猫科动物繁殖功能的认识。猫首次发情时间受品种、季节、体况等因素的影响 ,其发情周期可分为发情期 (发情前期和发情期 )和非发情期 (间情期、乏情期、假孕和妊娠 )。要引起母猫足量的促黄体素释放与排卵 ,交配次数需 4次以上。通常认为 ,猫是诱发性排卵动物 ,但事实上也频繁出现自发性排卵。猫配种时 ,一个有效的方案是在发情的 2～ 3 d,每天配 3次 (每次间隔 4h) ,这个方案能使 90 %以上的母猫诱发排卵。     

猪卵母细胞第1极体与核相对位置变化对去核率的影响

为探讨猪受体卵母细胞体外成熟过程中第1极体(pbⅠ)与细胞核相对位置的动态变化规律及其对去核效率的影响,准确判定受体卵母细胞去核"窗口期"提供试验依据。将体外采集的GV(Germinal vesicle)期卵母细胞随机分为3组,分别成熟培养42～44 h、44～46 h、46～48 h,并采用Hoechst33342荧光染色法对成熟过程中pbⅠ与细胞核相对位置进行检测判定。结果显示,随着体外成熟时间的延长,卵母细胞的成熟率呈逐渐增加的趋势,但pbⅠ与细胞核的位置发生偏离的比率逐渐增加,而去核率则表现为逐渐降低的趋势,pbⅠ偏离率与去核率之间呈现一定程度的负相关;体外成熟44～46 h,既能获得较高的卵母细胞成熟率(80.2%),又可以保证理想的去核率(81.2%)。说明延长体外成熟时间所造成的去核率显著降低与pbⅠ发生偏离有关,体外成熟44～46 h是该试验条件下猪受体卵母细胞去核的最佳"窗口期"。     

猪卵母细胞中Aurora-B的定位与功能

Aurora-B是一种在细胞有丝分裂过程中起重要调控作用的丝氨酸/苏氨酸激酶,在哺乳动物卵母细胞减数分裂过程中的表达、定位与功能研究较少,相关猪的尚未见报道。本实验采用特异性抑制剂处理猪(Susscrofa)卵母细胞,研究其减数分裂过程中Aurora-B的表达、亚细胞定位与功能作用。激光共聚焦显微镜分析表明,Aurora-B均匀分布在生发泡(GV)期卵母细胞质中;生发泡破裂后,Aurora-B主要集中在浓缩染色质的周围,并随纺锤体的装配和染色体的分离而发生相应的迁移。使用Aurora-B特异性抑制剂AZD-1152处理后,阻滞在Pro MⅠ-AITI期卵母细胞与对照组相比有显著增加(P0.05),MⅡ期卵母细胞显著降低(P0.05),同时MⅡ期卵母细胞染色体的排列发生紊乱、纺锤体形态异常,并出现一定程度的微丝断裂和分散。抑制猪卵母细胞Aurora-B的表达,其孤雌胚胎的发育将受严重影响。本研究表明,Aurora-B可能在猪卵母细胞减数分裂过程中对于微管装配、染色体分离等,起着关键的调控作用。     

猪单精注射胚与孤雌胚激活后的发育

用猪的冷冻精液,以不同的激活方法进行猪单精注射(ICSI)胚胎的生产.结果表明,联合应用电激活和化学激活所获ICSI胚卵裂率(79.28%)明显高于单纯电激活组卵裂率(58.77%),但两组桑囊胚发育率无统计学差异(31.58%对22.67%),电化学联合激活较单纯的电激活更有利于ICSI胚胎的发育.通过比较孤雌电激活胚与ICSI胚胎的发育情况,发现孤雌激活胚与ICSI胚在卵裂率、桑囊胚发育率上均无显著差异,表明现有实验电激活参数完全适用于猪ICSI胚胎的体外生产.