绵羊前体脂肪细胞的原代培养及分化

本试验旨在建立绵羊前体脂肪细胞的原代培养方法,探讨反刍动物脂肪沉积机理.以1日龄羔羊的肾周脂肪组织为试验材料,采用组织块法和酶消化法分离培养前体脂肪细胞,观察形态学变化,测定生长曲线,油红O染色检测细胞内脂肪含量,并用实时定量PCR法检测脂蛋白脂酶、过氧化物体增殖剂活化受体γ、脂肪酸合酶的表达量.结果表明:原代培养的细胞成分均一、增殖旺盛、分化率高,具有前体脂肪细胞的形态特征和基因表达特性,为绵羊前体脂肪细胞.本试验成功建立了绵羊前体脂肪细胞原代培养方法,并在体外重现了增殖和分化的过程.     

基于地源性发酵饲料利用的生猪清洁生产技术模式设计

为促进地源性资源尾菜的饲料化和肥料化利用,实现种养殖业循环健康发展,对传统养猪模式进行改进设计,在整体上融合生物发酵技术、粪污无害化处理技术和清洁养殖技术,本文利用现有设备和技术,从发酵饲料生产、发酵饲料饲喂、清洁圈舍结构和粪污处理系统全流程设计,将尾菜饲料化和肥料化利用技术融入生猪清洁生产,有利于高原夏菜产区农业废弃资源的综合利用,促进养猪业向生态健康绿色方向发展,减少环境污染。     

兰州大尾羊PPARG全长cDNA克隆及生物信息学分析

【目的】克隆兰州大尾羊过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARG）基因,分析其序列及编码蛋白的生物学特性,阐明PPARG基因在绵羊中的生物学作用,为生产应用提供理论依据。【方法】根据绵羊PPARG基因CDS序列设计特异性引物,利用RACE和RT-PCR技术克隆获得兰州大尾羊PPARG基因序列,结合生物信息学方法分析其生物学特性。【结果】克隆获得兰州大尾羊PPARG cDNA 序列全长1 774 bp（GenBank序列号：KF727439）,其CDS区片段长1 428 bp,编码475个氨基酸,编码区两侧翼分别具有5’-UTR 131 bp（1-131 nt）和3’-UTR 214 bp（1 560-1 774 nt）。预测兰州大尾羊PPARG蛋白分子量为54.40 kD,理论等电点为4.94。预测PPARG编码蛋白疏水性最大值为3.600,最小值为-2.744,为非跨膜的疏水性蛋白。亚细胞定位主要在细胞质（65.2%）和细胞核（21.7%）中,少量作用于细胞支架（4.3%）和过氧化物酶体（4.3%）,无信号肽,不属于分泌蛋白。预测其氨基酸序列有26个磷酸化位点,无糖基化位点,含有1个ZnF_C4结构域、1个HOLI结构域和1个LCR结构域,二级结构以随机卷曲为主。同源性分析显示兰州大尾羊PPARG核苷酸序列与山羊、野牛、水牛、绵羊、虎鲸、野猪和人类核苷酸序列间的同源性分别为99% 、98% 、97% 、99%、 94%、92%和90%,兰州大尾羊PPARG氨基酸序列与山羊、野牛、水牛、绵羊、虎鲸、野猪和人类核苷酸序列间的同源性分别为100% 、99.8% 、100% 、100%、 98.7%、98.5%和97.5%。系统发育树表明,兰州大尾羊与山羊、绵羊和水牛的进化水平更为接近,与鱼类、人类和鼠类较远。其基因第486位发生碱基转换（C←→T）,第828位发生碱基转换（C←→A）,但其所编码氨基酸不变。【结论】兰州大尾羊与其他物种PPARG在结构上相似性较高,说明该基因具有高度的保守性。推测PPARG蛋白大部分在游离核糖体上合成,其功能与过氧化物酶体有关,该预测结果符合其过氧化物酶体增殖物激活受体的身份。PPARG氨基酸序列有26个可以成为蛋白质激酶磷酸化的位点,某些位点被磷酸化后,可导致一系列肥胖相关基因的功能失调和表达变化, 如胰岛素增敏激素,脂联素( adiponectin)的表达减少。其序列包含的ZnF_C4锌指结构域具有与脂质结合的功能,HOLI即LBD配体结构域在激素信号转导过程中发挥重要作用,其中PPARG锌指结构域中的磷酸化位点Ser112,被MAPK磷酸化后,可以抑制PPARG同配体的结合,从而降低PPARG蛋白的活性,两个结构域均与成脂分化过程相关联。文章为进一步研究PPARG在成脂分化过程中的作用提供了参考。     

蓝茎冰草DNA的提取方法

以美国蓝茎冰草叶片为材料，比较提取蓝茎冰草叶片DNA的两种方法。结果表明：2倍的CTAB（十六烷基乙基溴化铵）法所得DNA的纯度高、质量好，3倍的CTAB法不能用于蓝茎冰草DNA的提取。     

香芹酚对绵羊瘤胃体外养分降解率和发酵特性及产气量的影响

为了研究香芹酚对绵羊瘤胃体外养分降解率、发酵特性及体外产气量的影响,在瘤胃液中分别添加0、100、250、500、1000 mg/L不同浓度的香芹酚,瘤胃发酵48 h后测定养分降解率、发酵参数及总产气量.结果表明,添加250 mg/L试验组的中性洗涤纤维降解率(NDFD)和酸性洗涤纤维降解率(ADFD)显著高于添加50...     

凤冈绿茶中有效成分的提取工艺

以凤冈绿茶为原料,探讨并确定没食子酸、咖啡因、可可碱、EGC、EGCG提取的最佳工艺条件.在甲醇浓度、浸提温度、浸提时间、料液比4个单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验设计和高效液相色谱法(HPLC)检测,以没食子酸、咖啡因、可可碱、EGC、EGCG的浸出量为指标确定最佳工艺参数.结果表明,各有效成分的最佳提取工艺条件为:甲醇浓度70％,浸提温度65℃,浸提时间40 min,料液比为1:30(g/mL);此工艺条件下得到凤冈绿茶浸提液中没食子酸、咖啡因、可可碱、EGC、EGCG的浸出量分别为(1.58±0.06)、(48.62±1.03)、(20.31±0.56)、(44.36±0.67)、(136.28±1.32)mg/g,精密度、重复性和回收率的RSD均小于5％.该结果可为凤冈绿茶的进一步研究提供理论基础,也为开拓其茶保健产品提供参考依据.     

褪黑素受体在未妊娠和妊娠牦牛子宫表达的研究

旨在研究褪黑素对妊娠牦牛子宫的调控作用,采用real-time PCR法和免疫组织化学S-P法,对未妊娠和妊娠不同时期牦牛子宫中褪黑素受体(MT1)mRNA和褪黑素受体(MT1)蛋白的表达进行研究。结果表明:牦牛未妊娠和妊娠的不同时期,牦牛子宫基质细胞(SC)和肌层平滑肌细胞(MM)中均有MT1蛋白表达(P0.05);血管内皮细胞(EBV)和血管平滑肌细胞(VSM)中的MT1蛋白表达,在妊娠28~35d差异不显著,随妊娠时间的增加,MT1蛋白表达增加(P0.05);腺上皮细胞(GE)中的MT1蛋白,在妊娠初期(妊娠28~35d)差异不显著,妊娠50~60d时,差异显著(P0.05),妊娠90~100d时,差异极显著(P0.01)。而在腔上皮细胞(SE)中,MT1蛋白表达量在妊娠28~35d比未妊娠时低(P0.05),而这种趋势随妊娠时间的增加继续降低(P0.01)。未妊娠牦牛子宫中MT1mRNA表达量显著高于妊娠牦牛(P0.01)。综上表明,在妊娠期,牦牛子宫对褪黑素的需求量降低,褪黑素主要作用于牦牛GE,调节子宫腺功能,使牦牛子宫产生适应妊娠的生理反应。     

不同培养方法对绵羊IVM、IVF和IVC的影响

在绵羊的体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)和体外培养(IVC)过程中,传统的培养方法都是采用微滴覆盖矿物油以保持生长发育的最佳环境.但矿物油有其自身的弊端,诸如处理程序复杂、吸附类固醇激素等.