胰腺特异性表达载体PDX1-eGFP构建及体外验证

为了研究胰腺发育与缺陷的转基因特异性表达系统,探索胰腺特异性表达载体的构建并进行体外验证。以增强型绿色荧光蛋白(e GFP)为报告基因,小鼠PDX1启动子为特异性启动元件,构建胰腺特异性启动e GFP表达载体PDX1-e GFP,载体转染MIN-6胰岛β细胞和猪耳成纤维细胞,培养48 h后,进行荧光观察和RT-PCR、Western blot检测。结果显示,e GFP在MIN-6胰岛β细胞中的RNA水平和蛋白水平均表达,而在非胰腺细胞猪耳成纤维细胞中均不表达。本研究结果表明,成功获得胰岛特异性表达载体PDX1-e GFP,为构建相关基因在胰腺中特异性表达的载体提供依据,为制备胰腺缺陷动物奠定基础。     

牦牛胚胎发育早期部分器官组织形态学观察

为了研究牦牛胚胎发育早期部分器官的形态学与组织学变化,试验采集1~4月龄牦牛胚胎,制作肾脏和性腺的组织切片,用光学显微镜进行观察测量。结果表明:与1月龄后期相比,4月龄牦牛胚胎体长增加了4倍,体重达到245.60 g,心脏、肺脏重量增加比肝脏快。卵巢皮质中分布有大量原始生殖细胞,随着月龄增加,髓质中红细胞、梭状细胞增多。睾丸中先有两种不同的原始生殖腺管腔,之后逐渐分化生成生殖小管。肾脏周围被被膜包裹,2月龄牦牛胚胎被膜上有脂肪细胞,月龄较小的胚胎肾小球内红细胞较少,肾小囊较宽,4月龄牦牛胚胎肾脏皮质、髓质分界清楚,有肾乳头形成。     

农区养牛--中国养牛业可持续发展之路

与世界及发达国家相比 ,中国的畜牧业结构极不合理。中国人口众多 ,可利用耕地面积有限 ,人均粮食占有量一直徘徊在 4 0 0kg左右 ,并由于自然和人为因素影响 ,草场严重退化。因此 ,中国要保持畜牧业的可持续发展 ,必须充分利用农作物秸秆和其它副产品 ,大力发展农区养牛业。     

肉制品中单核细胞增多性李斯特菌快速检测方法──免疫酶染色法的建立和应用

建立了免疫酶染色法快速检测肉制品中学核细胞增多性李斯特菌（LM）的方法。通过50份火腿肠样品用本法和常规法对比试验表明，本法敏感特异，可检出105／mlLM，检出率比常规法高2％。接到样品后24～48小时内即可报告检测结果，比常规法快6～7天。     

陕,甘,宁,青部分鸡场减蛋综合症的血清学调查

用微量血凝抑制试验（ＨＩ）检测鸡减蛋综合症（ＥＤＳ－７６）的感染情况，结果表明，无减蛋症状鸡群平均阳性率为３３．８％（９７／２８７），ＨＩ抗体效价为１∶１６－１∶１２８；有减蛋症状鸡群平均阳性率为９２．７％（１６５／１７８），ＨＩ抗体效价多为１∶６４－１∶１０２４，最高可达１∶１６３８４     

中国荷斯坦牛TLR2基因SNPs的快速筛查及等位基因频率的估算

为了快速筛查Toll样受体2基因的SNPs,采用DNA池和直接测序法确定了荷斯坦牛TLR2基因的多个SNP突变方式,估算了各SNP的等位基因频率,并利用生物信息学方法预测突变对TLR2 mRNA和蛋白的影响。结果显示,在荷斯坦牛TLR2 基因内共发现6个核苷酸突变位点,分别为T602A、G10900C、G11047C、A11076T、C12077T、T10634G,其中T10634G为错义突变,导致第64位氨基酸由原来的谷氨酸(Gly)替换为天冬氨酸(Asp)。研究结果可为中国荷斯坦牛的抗病育种提供实验依据。     

五个地方绵羊品种FAS基因3′-UTR区单核苷酸多态性研究

【目的】探究脂肪酸合成酶(FAS)基因3′端非翻译区(3′-UTR)在绵羊地方品种中的遗传多态性,为进一步揭示地方绵羊品种间遗传分化、开展肉质性状的关联分析和表达调控等研究提供依据。【方法】采用PCR-SSCP和DNA测序技术对兰州大尾羊(38只)、滩羊(58只)、甘加羊(40只)、欧拉羊(30只)和乔科羊(39只)五个地方绵羊品种205只个体的脂肪酸合成酶(FAS)基因3′-UTR进行单核苷酸多态性(SNPs)检测和遗传多态性分析。【结果】在这五个地方绵羊品种的FAS基因3′-UTR区中,有951位点和1005位点2个多态位点;两位点分别存在AA、Aa、aa和EE、Ee、ee各三种基因型,而aa和ee基因型未检测到;AA和EE基因型频率高于Aa和Ee基因型频率,基因型AA和EE为优势基因型;A和E两个等位基因频率高于a和e等位基因频率,为优势等位基因。适合性检验表明,这5个地方绵羊品种在951位点和1005位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态。独立性检验表明:在951位点,兰州大尾羊与滩羊、欧拉羊、甘加羊和乔科羊之间表现为差异显著(0.01P0.05);滩羊与欧拉羊、甘加羊和乔科羊之间表现为差异极显著(P0.01);欧拉羊、甘加羊和乔科羊,甘加羊与乔科羊均表现为差异不显著(P0.05);在1005位点兰州大尾羊、滩羊、欧拉羊、甘加羊和乔科羊品种之间均表现为差异不显著(P0.05)。测序结果表明,951位点在FAS基因在其转录产物mRNA的951位所对应处有一处C→T突变;1005位点在FAS基因在其转录产物mRNA的1005位所对应处有一处A→G突变。FAS基因mRNA二级结构预测结果显示:951位点的突变能导致其二级结构发生了明显的改变,而1005突变不会改变其二级结构。【结论】五个地方绵羊品种在FAS基因3′-UTR区有951位点(C→T)和1005位点(A→G)两个SNPs,2位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态;基因型频率分布的独立性检验结果表明,在951位点,兰州大尾羊与滩羊、欧拉羊、甘加羊和乔科羊之间表现为差异显著(0.01P0.05);滩羊与欧拉羊、甘加羊和乔科羊之间表现为差异极显著(P0.01);欧拉羊与甘加羊和乔科羊、甘加羊与乔科羊均表现为差异不显著(P0.05);在1005位点兰州大尾羊、滩羊、欧拉羊、甘加羊和乔科羊品种之间均表现为差异不显著(P0.05)。     

兰州大尾羊H-FABP基因荧光定量PCR检测方法的研究

通过对兰州大尾羊尾部、大网膜、肝脏、肾周脂肪组织中的总RNA提取,反转录获得总cDNA样品,结合PCR技术,建立了SYBR荧光定量PCR法检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）基因mRNA在不同组织中相对表达量的试验方法,并进行批内、批间重复性检验。结果表明,H-FABP和18S基因标准曲线回归方程分别为CtH-FABP =-3.24375x+38.34230和Ct18S=-3.33137x+33.4573,相关系数（r2）分别为0.9964和0.9992,扩增效率分别为103%和99%;批内、批间重复性测定的变异系数分别为小于1.8%和10%;说明该方法灵敏度高、特异性强、准确可靠、重复性好,是实时荧光定量PCR检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白基因mRNA表达量的有效方法。     

五个地方绵羊品种FAS基因3′-UTR区单核苷酸多态性研究#br#

【目的】探究脂肪酸合成酶（FAS）基因3′端非翻译区（3′-UTR）在绵羊地方品种中的遗传多态性,为进一步揭示地方绵羊品种间遗传分化、开展肉质性状的关联分析和表达调控等研究提供依据。【方法】采用PCR-SSCP和DNA测序技术对兰州大尾羊（38只）、滩羊（58只）、甘加羊（40只）、欧拉羊（30只）和乔科羊（39只）五个地方绵羊品种205只个体的脂肪酸合成酶（FAS）基因3′-UTR进行单核苷酸多态性（SNPs）检测和遗传多态性分析。【结果】在这五个地方绵羊品种的FAS基因3′-UTR区中,有951位点和1 005位点2个多态位点;两位点分别存在AA、Aa、aa和EE、Ee、ee各三种基因型,而aa和ee基因型未检测到;AA和EE基因型频率高于Aa和Ee基因型频率,基因型AA和EE为优势基因型;A和E两个等位基因频率高于a和e等位基因频率,为优势等位基因。适合性检验表明,这5个地方绵羊品种在951位点和1 005位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态。独立性检验表明：在951位点,兰州大尾羊与滩羊、欧拉羊、甘加羊和乔科羊之间表现为差异显著（0.01＜P＜0.05）;滩羊与欧拉羊、甘加羊和乔科羊之间表现为差异极显著（P＜0.01）;欧拉羊、甘加羊和乔科羊,甘加羊与乔科羊均表现为差异不显著（P＞0.05）;在1 005位点兰州大尾羊、滩羊、欧拉羊、甘加羊和乔科羊品种之间均表现为差异不显著（P＞0.05）。测序结果表明,951位点在FAS基因在其转录产物mRNA的 951位所对应处有一处C→T突变;1 005位点在FAS基因在其转录产物mRNA的1 005位所对应处有一处A→G突变。FAS基因mRNA二级结构预测结果显示：951位点的突变能导致其二级结构发生了明显的改变,而1 005突变不会改变其二级结构。【结论】五个地方绵羊品种在FAS基因3′-UTR区有951位点（C→T）和1 005位点（A→G）两个SNPs,2位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态;基因型频率分布的独立性检验结果表明,在951位点,兰州大尾羊与滩羊、欧拉羊、甘加羊和乔科羊之间表现为差异显著（0.01＜P＜0.05）;滩羊与欧拉羊、甘加羊和乔科羊之间表现为差异极显著（P＜0.01）;欧拉羊与甘加羊和乔科羊、甘加羊与乔科羊均表现为差异不显著（P＞0.05）;在1 005位点兰州大尾羊、滩羊、欧拉羊、甘加羊和乔科羊品种之间均表现为差异不显著（P＞0.05）。     

尾菜青贮及其对奶牛泌乳性能影响研究

以"高原夏菜"产生的大量尾菜为主要原料,添加20%的玉米秸秆制成青贮饲料。将尾菜青贮饲料作为试验组,玉米全贮饲料为对照组,进行奶牛饲喂试验。结果表明,尾菜青贮饲料中粗灰分为11.030±2.855%,粗蛋白8.827±1.22%,粗脂肪5.571±0.725%,全磷0.170±0.008%,全钙0.311±0.083%;中性洗涤纤维38.852±2.544%,酸性洗涤纤维20.919±2.178%。尾菜青贮饲料磷含量显著高于玉米全贮饲料(P0.05),中性、酸性洗涤纤维极显著低于玉米全贮饲料(P0.01),粗脂肪等成分二者差异不显著(P0.05)。试验组产奶量在第6周以后显著提高(P0.05),平均每天比对照组产奶量增加1.91 L(P0.05)。乳蛋白率、乳脂率、乳糖、固形物及非固形物均无显著差异(P0.05)。