异育银鲫组织中γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)的免疫组织化学定位

观察γ-氨基丁酸A受体(GABA_AR)异育银鲫中枢神经系统和外周组织中的特异性分布情况,探讨其在不同组织中的作用。本试验以GABA_AR的α1亚基(GABA_ARα1)作为GABA_AR的检测指标,采用免疫组织化学方法对异育银鲫端脑、中脑、小脑、延脑、肝脏、肾脏组织中的GABA_AR进行定位研究。结果表明：在异育银鲫端脑、中脑、小脑、延脑、肝脏、肾脏中均有GABA_AR存在,各组织中的GABA_AR密度从高到低依次为：小脑、中脑、延脑、端脑、肾脏、肝脏。其中,小脑的分子层和蒲氏细胞层、中脑的视盖、延脑的迷走叶、端脑的纹状体、肾脏的肾小管以及肝细胞中GABA_AR的密度较高。研究显示,GABA_AR主要分布于异育银鲫的中枢神经系统,外周组织中也有少量分布。本研究旨在为异育银鲫GABA_AR分布的定位研究奠定一定的科学基础。     

鲫血髓过氧化物酶的表达及其与血药浓度的关联性

为了研究在吡喹酮代谢过程中,鲫血髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)m RNA表达与血药浓度的相关性,以体重为(80±10.5)g的鲫鱼(Carassius auratus)为试验动物,单剂量(10 mg/kg)口灌吡喹酮(praziquantel,PZQ)后,在鲫血液中选取β-actin为内参基因,通过设计特异性引物,利用荧光定量PCR,分析了不同时间点鲫血MPO m RNA水平的相对表达量的变化;利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定了吡喹酮在鲫鱼体内的血药浓度,分析两者之间的相关性。结果显示,吡喹酮能够迅速进入血液,并被快速消除,药时数据符合二室开放模型。在1 h时,血液中吡喹酮的浓度达到最大值,为2.85?g/m L,96 h后血液中检测不到吡喹酮;灌药后,MPO基因表达量随时间呈先升后降趋势,在1 h时髓过氧化物酶表达量最高。此外,0.25 h、0.5 h、1 h、3 h与6 h组与对照组差异性极显著(P0.01),12 h组与对照组差异显著(P0.05)。48 h与96 h组与对照组差异不显著(P0.05)。相关性分析发现,MPO m RNA相对表达量与血液中吡喹酮的浓度之间相关系数r=0.96,为高度相关,并且推测MPO可能参与吡喹酮的氧化代谢。结论认为:(1)MPO m RNA相对表达量的升高与外源性药物吡喹酮的摄入有关。(2)血液中吡喹酮的残留量与MPO m RNA相对表达量线性相关。本研究旨在提供一种从分子水平评价水产动物体内药物残留的新思路。     

Na~+-Ti(SO_4)_2法检测草鱼中孔雀石绿残留

首次建立了Na+-Ti(SO4)2法检测草鱼中孔雀石绿残留的方法:孔雀石绿溶于浓硫酸显黄色,稀释后显暗黄色,Ti(SO4)2使其褪色,加入Na+变为白色沉淀,依据沉淀量对孔雀石绿残留进行定量分析。优化实验条件,采用pH=7.4、硫酸钛和氯化钠的浓度均为2.0 mol/L时,可有效地检测孔雀石绿残留。方法学实验结果表明:该方法最低检测量为0.08 mg/kg,在草鱼肌肉和肝脏中的回收率分别为65.00%~75.63%,63.75%~71.35%,相对标准偏差分别为4.82%~1.89%,4.93%~1.97%。该方法快速、简单、灵敏、准确,依据白色沉淀仅凭肉眼即可进行初筛,适合于快速检测孔雀石绿在水产品中的残留。     

酶联免疫法检测中华鳖肌肉中己烯雌酚

根据酶标免疫法原理，用含有针对兔IgG（已烯雌酚抗体）的羊抗体与待测中华鳖肌肉中的已烯雌酚发生特异性的结合反应。洗涤后，加入的酶标底物连接未结合的已烯雌酚抗体，在酶基质的作用下与无色发色剂生成有色产物。反应后于450nm处理量吸光度，吸光强度与样品中的已烯雌酚浓度成反比。该检测方法平均最低检测下限为0.0125μg/kg，平均回收率74.8%，变异系数为1.763-3.084%。表明本方法快速、灵敏、可靠，适合对已烯雌酚残留限量检测的要求。     

SpHtp1基因在不同种属水霉菌株中的分布

为研究SpHtp1基因在不同种属水霉菌株中的分布,以寄生水霉ATCC200013TM的基因组DNA为模板,设计1对特异性引物,进行PCR扩增。将扩增片段回收,并克隆入T载体,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆测序。将测序结果与GenBank中登录的SpHtp1基因序列进行比较,同源性为99%。以该方法调查从水霉病主要流行地区分离的17株水霉菌SpHtp1基因的分布情况,结果发现:在17株水霉菌株中,有8株水霉菌检测到SpHtp1基因,阳性率为47%,且所有含SpHtp1基因的菌株在分类地位上均隶属于寄生水霉(Saprolegnia parasitica)。SpHtp1基因可能在寄生水霉中特异性存在,该基因有望用于寄生水霉的分离鉴定。     

“美婷”原料药在鱼肌肉组织中残留检测前处理方法

对高效液相色谱法测定草鱼和鲫肌肉组织中“美婷”原料药残留的前处理方法进行探讨。结果表明：以甲醇作抽提剂、二氯甲烷作净化剂,振荡离心,正己烷去脂, 30℃旋转浓缩蒸发的前处理方法,快速、准确、经济、实用性强。该方法“美婷”原料药的最低检测限可达1.0 μg/kg;在加标水平为1.0～100 μg/kg时,回收率为67.72％～95.52％;相对标准偏差为7.76％～37.81％。该前处理方法适合检测“美婷”原料药在鱼体内的残留。     

恩诺沙星微胶囊的制备及其抗紫外、热稳定性的研究

采用冷冻干燥法，分别以羧甲基纤维素和淀粉为壁材，制备恩诺沙星微胶囊制剂。抗紫外和热稳定性试验表明：以羧甲基纤维素和淀粉为壁材的恩诺沙星微胶囊均有抗紫外和热稳定性能。其中，羧甲基纤维素与恩诺沙星、淀粉与恩诺沙星包埋质量比为1：1、1：2时，微胶囊表现出显著的抗紫外作用（P〈0．05）；羧甲基纤维素与恩诺沙星、淀粉与恩诺沙星包埋质量比为2：1、1：1、1：2时，微胶囊表现出极显著的热稳定性（P〈0．01）。羧甲基纤维素的抗紫外和热稳定性均优于淀粉，但差异不显著。     

鲫细菌性疾病控制中甲砜霉素药代-药效动力学联合参数的研究

采用高效液相色谱法,研究了甲砜霉素对致病性嗜水气单胞菌AH10(Aeromonas hydrophila)体外药效学参数及口灌不同剂量的甲砜霉素在鲫体内药代动力学特征,并制定甲砜霉素控制鲫细菌性败血症防耐药突变用药方案。研究结果表明,甲砜霉素对AH10的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations,MIC)为1.0μg/mL;最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentrations,MBC)为2.0μg/mL;防细菌耐药突变浓度(mutant prevention concentration,MPC)为8.0μg/mL;防耐药突变选择窗(mutant selection window,MSW)为1.0~8.0μg/mL。在试验水温(22±1)℃条件下,对鲫口灌20、30、40 mg/kg体重剂量的甲砜霉素,24 h内血药浓度大于MPC的维持时间分别为3、8、22 h;AUC24(area under the drug concentration-time curve)/MIC分别为89.539、174.560、251.682;Cmax(maximum concentration in the interval)/MIC分别为14.92、17.69、24.22;。综合血药浓度维持MPC以上的时间超过24 h、AUC24/MIC125或Cmax/MIC10等指标,建议甲砜霉素控制鲫细菌性败血症的防耐药用药方案为:剂量40 mg/kg,一日一次。根据肌肉内甲砜霉素的药动学方程,药残达到国家限量标准所需时间约为15 d,所以在本试验水温(22±1)℃下,建议休药期不低于15 d。     

氰戊菊酯等4种化学药物对克氏原螯虾的急性毒性及组织病理观察

【目的】评价氰戊菊酯、辛硫磷、硫醚沙星和甲霜灵对克氏原螯虾（Procambarus clarkii）的急性毒性,分析其对克氏原螯虾的组织病理影响,为生态风险评估提供基础数据。【方法】采用静态试验法测定4种药物浸泡下克氏原螯虾的急性毒性作用,分别使用4种药物48 h半致死浓度（LC₅₀）和96 h-LC₅₀的10%浓度浸泡克氏原螯虾48和96 h后取样,基于石蜡切片技术比较分析4种药物对克氏原螯虾肝胰腺和肌肉组织结构的影响。【结果】4种药物浸泡下表现的中毒症状比较类似,且不同浓度组的中毒症状表现出明显的剂量和时间效应。急性毒性试验结果表明,4种化学药物对克氏原螯虾的毒性排序为氰戊菊酯>辛硫磷>硫醚沙星>甲霜灵。氰戊菊酯对克氏原螯虾24、48和96 h的LC₅₀分别为4.375、4.252和3.865μg/L,辛硫磷对克氏原螯虾24、48和96 h的LC₅₀分别为161.301、87.784和81.637μg/L,硫醚沙星对克氏原螯虾24、48和96 h的LC₅₀分别为76.541、72.509和52.529 mg/L,甲霜灵对克氏原螯虾24、48和96 h的LC₅₀分别为20.610、5.499和4.141 g/L。组织病理观察发现,以相对低浓度的化学药物染毒克氏原螯虾后,仍会对克氏原螯虾的组织产生损伤和破坏。染毒后的肝胰腺发现部分细胞破裂、皱缩、坏死,B细胞及其内部转运泡体积明显增大且增多,R细胞颜色加深等现象;肌肉整体呈现肌纤维断裂溶解、细胞排列不紧密、出现明显空腔等现象。【结论】氰戊菊酯、辛硫磷、硫醚沙星和甲霜灵对克氏原螯虾的急性毒性具有较大差异。克氏原螯虾在4种化学药物的安全浓度下均能够存活,但会对肝胰腺和肌肉组织产生破坏。     

聚六亚甲基胍对异育银鲫鳃出血病药效的初步研究

通过PCR检测及序列对比分析,确诊江苏海丰农场两塘口内异育银鲫(Carassius auratus gibelio)所患疾病为鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirusⅡ,Cy HV-2)引发的鲫造血器官坏死症(Crucian CarpHematopoietic Necrosis),而后分别每10 d使用0.5 m L/m~3和0.75 m L/m~3聚六亚甲基胍(Polyhexamethylene guanide,PHMG)泼洒治疗,并定期采样,利用Real Time PCR测定样品中病毒表达量。结果显示:该病毒(DF2015)Cy HV-2的DNA解旋酶基因序列长为316 bp,与绝大多数病毒株有较近的亲缘关系(99%),但与病毒株ST-J1和H.Fukuda的亲缘关系相对较远(63%)。与其余病毒株等有较近的亲缘关系(99%);治疗近2个月后,两塘的病毒相对表达量均呈下降趋势,且具有显著差异性,但0.75 m L/m~3治疗塘病毒相对表达量极显著降低,治疗效果相对更显著。