H5N1亚型禽流感病毒起源及演化关系的探讨H5N1亚型禽流感病毒起源及演化关系的探讨

通过综述感染人类的H5N1亚型高致病性禽流感病毒起源及演化关系，表明感染人的A／Hongkong／97（H5N1）株及目前流行的高致病性禽流感病毒可能起源于禽源的A型流感病毒株（A／Goose／Guangdong／1／96）。自1996年以来，H5N1亚型禽流感病毒的基因型经Gs／Gd，A，B，C，D，E，V，W，）X0—X3，Y，Z和Z^＋不断的演化为目前流行的基因型Z。高致病性禽流感病毒（H5，H7和H9亚型）在禽，特别是水禽体内的重组或重配而相互传播，并随候鸟的迁徙而传播不易消灭，H5N1亚型的禽流感在不同地区的不断暴发与流行已严重威胁着养禽业的发展及人类的健康，需要进行长期监控。     

一株H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白基因的克隆及分子特征

采用RT-PCR方法对H9N2亚型禽流感病毒Ck/GS/2/99株非结构蛋白NS基因进行了扩增,将其克隆到pGEM-T easy载体后进行序列测定与分析。结果表明,该株病毒NS基因开放阅读框（ORF）由890个碱基组成,编码272个氨基酸。经同源性与系统发生树分析表明,该毒株NS基因都与Ck/NX/4/99株的核苷酸和氨基酸同源性在99%以上,与Ck/HB/31/00、Ck/SD/6/96和Sw/HK/10/98关系密切。     

信息能力能促进农户有机肥持续采纳吗?——基于收入不确定性视角

针对当前我国耕地质量持续提升的迫切需求和农户有机肥技术采纳持续性较低的问题,基于蔬菜主产区6个省份的1 667份农户调查数据,将信息能力纳入农户技术采纳决策模型,采用负二项回归和非参数Bootstrap方法,从理论和实证2个层面,对信息能力影响农户有机肥持续采纳行为的效果进行研究,并进一步验证收入不确定性的中介效应。结果表明：1)信息能力在1%水平上显著促进农户有机肥持续采纳行为,边际效应为0.740;2)信息能力对年龄≤52岁和受教育年限≥9年的农户的有机肥持续采纳行为影响最大,影响的边际效应分别为0.808和0.789;3)收入不确定性在信息能力对农户有机肥持续采纳的影响中具有显著的中介效应,其边际效应系数为0.035。政府应适时更新农业技术推广形式、完善生产经营配套的信息技术基建设施、提供针对性的信息培训服务,凭借提高信息能力促进农户有机肥持续采纳。     

茎直黄芪人工中毒解毒实验家兔病理模型的建立及病理学观察

为对由茎直黄芪引起的牲畜中毒病理情况以及解毒治疗效果做进一步评价研究,以茎直黄芪人工饲喂2月龄实验家兔中毒,设置4个实验组,分别为空白对照组、攻毒组、解毒治疗a组、解毒治疗b组,建立中毒及解毒病理模型,并在28天(中毒死亡)、45天(中毒死亡)、49天(解毒a、b组及空白组处死),分别采取心、肝、脾、肺、肾和脑等进行病理组织学检查,利用常规病理学方法对比研究实验家兔体内的病理变化规律.结果表明,实验家兔均在18天左右出现中毒症状,28天左右出现中毒死亡,人工中毒解毒实验家兔病理模型成功建立.攻毒组试验家兔表现为大部分脏器均出现淤血、炎症、坏死等病理变化,解毒治疗a、b组,出现轻度淤血、轻度的细胞变性.     

不同料形对30～50日龄仔猪腹泻率的影响

对196头三元断奶仔猪分成三组,用3种不同形式饲料进行试验,研究膨化颗粒料,膨化碎粒料,粉料对30～50日龄仔猪腹泻病的影响。结果表明,粉料组仔猪的腹泻率明显高于其他两组。     

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因的可溶性表达与反应原性的鉴定

设计特异性引物扩增得到完整的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3AB基因,定向克隆到表达载体pET-30a中,获得了重组质粒pET-3AB,并转化大肠杆菌(Eschenchia coli)BL21(DE3).重组菌分别在37℃和28℃条件下诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定,观察到37℃培养条件下目的蛋白形成包涵体,在28℃条件下培养目的蛋白以可溶性的形式表达.Western blot分析表明,表达的目的蛋白能与FMDV感染牛血清发生特异性反应.以纯化的3AB蛋白作为抗原,采用间接ELISA模式检测了部分FMDV感染动物血清和健康动物血清,证明表达蛋白与FMDV感染血清有很好的反应而与健康动物血清无反应.     

表达H5亚型禽流感同义(Consensus)HA蛋白的重组质粒构建及体外表达

为研究禽流感病毒(AIV)H5亚型同义Consensus HA(Cons-HA5)基因的重组表达质粒在体外的表达情况,本研究通过对从NCBI流感数据库中获得的5000条H5亚型AIV的HA蛋白的序列比对、分析获得一条同义HA蛋白,将其相对应的核苷酸序列进行鸡体偏嗜性密码子优化,人工合成Cons-HA5基因并克隆于真核表达载体pCAGGS中构建重组表达质粒pCACons-HA5。将重组质粒转染293-T细胞,在激光共聚焦显微镜下观察转染后不同时间HA蛋白的表达情况,同时在转染后24 h、48 h后分别进行表达蛋白的western blot检测。结果表明,pCACons-HA5转染293-T细胞后,其表达的HA蛋白先分布于细胞质中,而后转移至细胞膜表面;westernblot鉴定结果表明,Cons-HA5重组蛋白可以与AIV多克隆血清反应分子量约为70 ku。该重组质粒的构建将为进一步Cons-HA5核酸免疫对H5亚型不同抗原群AIV的交叉保护免疫效力研究奠定基础。     

等温扩增技术的原理及其在病原检测中的应用

等温扩增技术(IAT)作为一种新型的体外核酸扩增技术,与PCR相比,该技术具有特异性强、敏感性高、简单便捷和成本低等优点。目前,等温扩增技术在病原检测方面得以应用,论文对环介导等温扩增(LAMP)、依赖解旋酶的等温扩增(HDA)、依赖核酸序列的等温扩增(NASBA)、链置换等温扩增(SDA)、交叉引物扩增(CPA)5种扩增技术的原理、特点及应用分别予以介绍,为该技术在病原检测的实际应用提供参考。     

O型口蹄疫病毒样颗粒编码基因的真核表达载体构建及表达

为了构建O型口蹄疫病毒(FMDV)病毒样颗粒编码基因的真核表达载体,将FMDV结构蛋白VP0、VP1、VP3的基因分别克隆到真核表达载体pVAX1中,再分别通过带有BsmBⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,分别对重组质粒pVAX-VP0、pVAX-VP1和pVAX-VP3扩增后进行酶切,用T4连接酶连接得到重组的真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3。对重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3进行PCR鉴定并测序。用脂质体将重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3转染BHK-21细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)及Western blot检测重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3在细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3,并在BHK-21细胞中得到表达。     

牦牛源干燥棒状杆菌的分离与鉴定

一只牦牛屠宰后肝有干酪样结节,为了探究其形成原因,本研究对该牦牛肝进行细菌的分离培养,对所分离可疑致病菌的16SrRNA以及rpoB基因序列进行扩增和序列分析,并用Vitek 2全自动微生物鉴定仪进行生化表型的鉴定,用K-B法进行药敏试验。结果显示,经细菌分离培养得到一株革兰阳性、棒状、可疑致病菌;其16S rRNA扩增片段大小1 483bp,GenBank序列编号为MH000696,该菌的16SrRNA与干燥棒状杆菌GD34株(KF928790.1)等的相似性最高,序列一致性为99%,系统进化树显示,本菌与干燥棒状杆菌在同一进化分支上;rpoB基因扩增片段大小434bp,GenBank序列编号为MH006608;Vitek 2全自动微生物鉴定仪鉴定为变异库克菌,可信度为93%。该菌对妥布霉素、氨曲南、头孢哌酮、米诺环素等多种药物高度敏感。综上所述,分离的细菌为干燥棒状杆菌,但基因序列,如rpoB等以及生化表型均存在一定程度的变异,本研究为兽医临床上该菌的分离和鉴定提供了依据,且为该菌的致病性研究奠定了基础。