GnIH通过p38MAPK信号通路对猪卵巢颗粒细胞自噬与凋亡的影响

【目的】细胞自噬和凋亡存在着相互制约,p38MAPK信号通路作为细胞凋亡的主要调控通路之一,也对细胞自噬存在促进和抑制的双重作用。已有研究表明,促性腺激素抑制激素(gonadotropin-inhibitory hormone , GnIH)对细胞自噬与凋亡均有影响,但作用机制尚不明确。故探究GnIH通过p38MAPK信号通路对猪卵巢颗粒细胞（pGCs）自噬与凋亡的影响及其机理,为解决母猪的产子率以及同期发情等问题提供参考。【方法】min、10 min、30 min、60 min、90 min)分组,用Western blot检测猪卵巢颗粒细胞p38与p-p38的蛋白表达量变化;2、验证GnIH对p38MAPK信号通路的影响：按（空白对照、GnIH、p38激活剂（U-46619）、U-46619+GnIH）分组,用Western blot检测p38与p-p38的蛋白表达量变化;3、探究不同浓度GnIH对自噬和凋亡的影响：按（空白对照、10 ^-6mol·L ^-1 GnIH、10 ^-8mol·L ^-1 GnIH、10 ^-10mol·L ^-1 GnIH、10 ^-12mol·L ^-1 GnIH）分组,用Western blot检测自噬与凋亡标志性蛋白的表达量变化;4、验证不同浓度GnIH通过p38信号通路对自噬和凋亡的影响：将细胞分成6组（空白对照、U-46619、U-46619+10 ^-6 mol·L ^-1 GnIH、U-46619+10 ^-8mol·L ^-1 GnIH、U-46619+10 ^-10mol·L ^-1 GnIH、U-46619+10 ^-12mol·L ^-1 GnIH）,用Western blot检测自噬与凋亡标志性蛋白的表达量变化。【结果】1. GnIH孵育10 min后,显著降低p38与p-p38的蛋白表达量（P<0.05）,提示,GnIH对p38MAPK信号通路的最佳作用时间为10 min;2. U-46619显著促进pGCs的p38磷酸化水平（P<0.05）,GnIH显著抑制pGCs的p38磷酸化水平（P<0.05）,提示,U-46619使p38MAPK信号通路活化,GnIH对p38MAPK信号通路的活化有抑制作用;3. 当 GnIH的浓度为10 ^-6 mol·L ^-1时,pGCs的自噬和凋亡水平显著升高（P<0.05）,随着GnIH浓度的降低,pGCs的自噬水平逐渐升高（P<0.05）,pGCs的凋亡水平逐渐降低（P<0.05）,提示,高浓度GnIH可以促进自噬和凋亡,随着GnIH浓度的降低,自噬水平逐渐升高,而凋亡水平逐渐下降;4. 加入U-46619后,GnIH使pGCs的自噬显著上调（P<0.05）,并且使pGCs的凋亡显著下调（P<0.05）,提示,不同浓度GnIH通过p38MAPK信号通路影响pGCs的自噬和凋亡。【结论】GnIH可能通过抑制p38MAPK信号通路的活化,上调pGCs的自噬,减少pGCs的凋亡。     

细胞保护蛋白PTD-FNK生物信息学分析

PTD-FNK蛋白是人工形成的重组蛋白质,已被证明在细胞凋亡、精子冷冻保存过程中对细胞有一定的保护作用,虽然在实践中应用普遍,但国内未见其机理分析和通过蛋白结合参与调控的报道。结合Protparam、ProtScale等相关在线软件预测和分析PTD-FNK蛋白的理化性质、亲水性、二、三级结构等;分离培养猪睾丸支持细胞,采用HIS pulldown技术拉下PTD-FNK未知的互作蛋白,得到的数据用UniProt数据库对比。生物信息学结果表明,PTD-FNK蛋白编码295个氨基酸,蛋白质分子量33.195 ku,分子式为C_{1 456}H_{2 225}N₄₃₇O₄₃₉S₁₀;该蛋白含有PKC、PKA特异性磷酸化的结合位点。得到的互作蛋白有葡萄糖调节蛋白78、波形蛋白-1、组蛋白等。预测PTD-FNK蛋白可能通过PKA、PKC特异性磷酸化结合位点或者与蛋白互作的方式参与细胞凋亡、精子发生等过程。     

抗凋亡蛋白PTD-FNK对镉致雄性小鼠生殖受损的保护作用

为探究抗凋亡蛋白PTD-FNK对镉(Cd)引起雄性小鼠生殖系统受损的保护作用，将24只6周龄的雄性小鼠随机均分为3组，对照组(生理盐水),CdCl₂组(20μg/kg CdCl₂),CdCl₂+PTD-FNK组(20μg/kg CdCl₂+300μg/kg PTD-FNK),每天下午7:00腹腔注射1次，连续7 d,每天记录小鼠的生理指标(采食量、饮水量、体长、体重、体温、血糖、Lee’s指数),第8天颈椎脱臼处死小鼠，收集精液测精子畸形率，摘除睾丸观察其病理变化并测定其功能。结果显示：与镉组相比，PTD-FNK同期处理后，降低了小鼠夜间的摄食行为(P<0.001),但其余生理指标无明显变化。该蛋白还显著降低了精子畸形率(P<0.001),缓解了睾丸病理损伤程度，并且抑制了B细胞淋巴相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)基因的表达(P<0.001),恢复了谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)(P<0.01)、超氧化物歧化酶(SOD)(P<0....     

五味子乙素对4℃保存后猪精子质量和获能状态的影响

试验旨在研究五味子乙素（SchB）对4℃保存后猪精子质量及获能状态的影响，根据在冷藏基础液中添加不同浓度的SchB，将精液分为6组，分别为0（对照）、2.5、5、10、20、40μmol/L组，检测冷藏后精子的活力、顶体完整率、质膜完整率、畸形率、平均运动速率、摆动性、线粒体膜电位（MMP）、DNA损伤、总抗氧化能力（T-AOC）等表观指标；用多功能酶标仪检测各组Ca2+浓度，用乳酸试剂盒检测精子获能状态。结果表明：SchB可以提高精子活力、顶体完整率、质膜完整率、MMP、平均运动速率、摆动性、T-AOC，显著降低精子畸形率、DNA损伤、Ca2+浓度、乳酸含量（P<0.05），且浓度为10μmol/L时效果最佳。综上，SchB可以抑制精子冷藏过程中的被动获能，提高冷藏后精子质量。     

鉴别牛结节性皮肤病病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为实现牛结节性皮肤病病毒（LSDV）和羊痘病毒属（CaPV）其他成员的鉴别诊断，针对LSDV 010基因保守区域设计特异性引物及Taq Man探针，与文献报道的CaPV 068基因的通用引物及探针组合，通过优化反应体系和条件，建立了一种可同时鉴别检测LSDV和CaPV其他成员的双重荧光定量PCR检测方法。结果显示：本方法可以特异性扩增LSDV和CaPV其他成员，并且与其他牛、羊病毒无交叉反应，特异性好；对pLSDV-010和pCaPV-068质粒标准品的最低检测限均为15 copies/μL，具有较高的灵敏性；组内和组间变异系数均小于1.75%，重复性良好。应用本试验建立的方法与荧光定量PCR方法同时检测542份临床样品，发现CaPV的样品符合率为98.52%,LSDV为99.63%。本试验建立的方法为CaPV鉴别筛查、LSDV精准防控及流行病学调查提供了快捷有效的技术手段。     

L-精氨酸对猪精液低温保存效果的影响

对L-精氨酸在猪精液低温保存中应用的效果进行评价,为猪精液低温保存稀释液配方的改良提供参考。采用手握法采集健康公猪精液,用含不同质量浓度L-精氨酸(0、0.50、1.00、1.50、2.00mg·mL-1)的低温保存稀释液稀释,于4℃下保存,对比7d内各组之间精子的活率、活力、畸形率、质膜和顶体完整性等参数。低温保存后,猪精液的总体质量浓度以1.00mg·mL-1组最好,其除了第1天精子活率与对照组差异不显著(P0.05)外,其他时间检测的5个指标均显著优于对照组(P0.05)。在本试验条件下,稀释液中添加1.00mg·mL-1 L-精氨酸可以明显改善4℃低温条件下猪精液的保存后质量。