特布他林人工抗原的合成及鼠源多克隆抗血清的制备

合成并鉴定特布他林（Terbutaline,TBL）人工抗原,通过动物免疫生产亲和力高、特异性好的鼠源TBL多克隆抗血清。分别通过1,4丁二醚法和EDC法将特布他林偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫抗原BSA-TBL和包被抗原OVA-TBL,并采用紫外分光光度法和SDS-PAGE进行鉴定,通过动物免疫试验获得鼠源多抗血清,并使用ELISA和阻断ELISA的方法对多抗血清进行了鉴定。结果表明半抗原TBL分别和载体蛋白BSA及OVA偶联成功;受免6只小鼠效价均达1×10-4以上,且1号小鼠多抗血清抗TBL的IC50为55.88 ng/mL。本试验成功合成了TBL人工抗原,并生产了高效价、高敏感性的鼠源多克隆抗血清,为TBL单克隆抗体制备及其快速检测试剂的研制奠定了坚实的基础。     

动物肠道锌元素吸收机制研究进展

<正>锌是生命活动中的必需微量元素,参与体内多种生理生化功能,是机体多种酶和功能蛋白的组成成分。锌可以参与机体细胞增殖与分化、基因转录、蛋白翻译表达及细胞生理功能调控等多项生理活动,和机体发育、免疫调节、内分泌、体内营养物质代谢都有密切的关系。Todd最先于1934年通过大鼠的研究发现锌是其生长中必需微量元素,随后锌元素在各个方面     

抗2,4 D单克隆抗体制备及免疫学特性鉴定

制备抗2,4-D高敏感性和高特异性的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。采用EDC法将BSA、OVA和2,4-D偶联制成免疫原和包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定后,用免疫原免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫,用间接ELISA和阻断ELISA选择高效价、高敏感性的小鼠进行细胞融合;应用杂交瘤细胞技术建立分泌抗2,4-D单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用体内诱生法制备腹水,并对其效价、敏感性、亚型和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果表明,融合后筛选出3株特异性高的杂交瘤细胞1F11、2A12、2G12,单抗亚型均为IgG1型,效价为1∶2 560～1∶5 120,对2,4-D的IC50分别为0.801、1.332、1.564μg/L,亲和常数(Ka)分别为2.174×1011、3.21×1010和4.36×1010 L/mg,与其他竞争物的交叉反应率均小于0.03%。说明成功获得高敏感性、高亲和力和高特异性的2,4-D mAb,为2,4-二氯苯氧乙酸残留免疫学快速检测方法的建立奠定基础。     

磺胺间甲氧嘧啶单克隆抗体的制备

磺胺间甲氧嘧啶(Sulfamonomethoxine,SMM)与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备完全抗原(BSA-SMM),并以BSA-SMM免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与NSO细胞融合,建立分泌SMM单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过对杂交瘤细胞培养上清液的检测、鉴定,筛选出12株高亲和力的杂交瘤细胞株,其中4B9、1H10、2E9的腹水ELISA效价为1×10-7、5.1×10-6和1×10-7。该单克隆抗体可用于饲料和动物源性食品中磺胺间甲氧嘧啶残留检测的免疫学快速检测方法的建立。     

猪肠道碱性氨基酸转运载体(CAT1)mRNA表达的组织特异性和发育性变化

本研究旨在探讨不同品种猪肠道碱性氨基酸转运载体（CAT1）mRNA表达的组织特异性和发育规律。试验选取1、7、26、30、60、90和150日龄长白和蓝塘公猪各5头（同一品种同一日龄且体重接近）,共70头,测体重后屠宰,采集十二指肠、空肠、回肠和结肠组织样品。以18S基因为内标,用实时荧光定量RT-PCR法（SYBR Green Ⅰ试剂盒）检测CAT mRNA在60日龄长白猪十二指肠、空肠、回肠和结肠表达的组织特异性,以及在长白和蓝塘猪不同日龄其十二指肠、空肠、回肠表达的发育性变化。结果显示：60日龄长白猪CAT1 mRNA的表达丰度从十二指肠到回肠呈逐渐升高的趋势,到结肠开始下降,回肠极显著高于其他3个肠段（P〈0．01）,十二指肠最低;十二指肠和空肠CAT mRNA的表达在1～26d（即哺乳期）都呈上升的趋势,随后都开始有所下降;蓝塘猪十二指肠CAT1 mRNA的表达丰度在150d时显著低于其他各个阶段（P〈0．05）,而长白猪90和150d都显著低于其他各阶段（P〈0．05）;空肠CAT1 mRNA的表达在26～150d各阶段都差异不显著,而26d显著高于1和7d（P〈0．05）;1～60d长白和蓝塘猪回肠CAT1 mRNA的表达都呈逐渐上升的趋势,60d后都显著下降（P〈0．05）。两品种猪不同日龄时十二指肠和空肠CAT1 mRNA的表达量都没有显著差异（P〉0．05）;长白猪回肠CAT mRNA表达在26d时显著高于蓝塘猪（P〈0．05）;在90和150d时,长白猪都显著低于蓝塘猪（P〈0．05）,其他各阶段没有显著差异。结果说明,CAT mRNA在不同肠段及不同发育阶段的表达存在明显的差异,这可能与肠腔中氨基酸的浓度和氨基酸的需要水平及相关激素水平有关。     

不同粒型小麦籽粒发育过程中细胞分裂素含量的变化

为了解小麦籽粒发育过程中籽粒内细胞分裂素变化动态,给小麦品种选育和化学调控提供理论依据,对不同粒型小麦籽粒形成、灌浆过程中籽粒内细胞分裂素的变化动态及其与灌浆的关系进行了研究。结果表明,不同粒型小麦品种籽粒发育过程中细胞分裂素含量具有相似的变化趋势。在籽粒形成期,籽粒中ZR、iPA含量迅速增加,在开花期后的18～24d达到峰值,其后逐渐下降。籽粒中ZR、iPA含量峰值出现的早晚与籽粒灌浆强度增加的持续时间呈正相关。     

玉铃花种子休眠原因及其内源激素含量变化

以玉铃花种子为试材,从种皮透水性、种子不同部位的浸提液萌发抑制测定等方面探讨了种子休眠原因,并用低温层积处理打破种子休眠,测定层积过程中4种内源激素含量变化,研究4种内源激素对种子萌发的影响。结果表明:玉铃花种皮存在一定的透水性障碍和机械束缚;玉铃花种皮及胚乳(胚)中均含有抑制种子萌发的物质,且抑制强度为种皮胚乳(胚),低温层积可有效打破种子休眠;随着层积时间延长,GA含量明显上升,ABA含量急剧下降,IAA/ABA、ZR/ABA及GA/ABA的比值升高可促进种子萌发。     

植酸酶鼠源多克隆抗血清的制备

 【目的】制备灵敏性高、特异性强的植酸酶多克隆抗体。【方法】将初步纯化的麸皮植酸酶蛋白经凝胶电泳鉴定纯度后,按50 μg蛋白/只?次免疫Balb/C小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后一次免疫60 d后,摘眼球取血,制备抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定敏感性和特异性。【结果】凝胶电泳的麸皮植酸酶只有一个条带;血清植酸酶抗体效价达1×104;半数抑制浓度达148.87 ng?mL-1。此抗血清对市售的普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩的微生物植酸酶的半数抑制浓度分别达到165.59 、163.80和166.51 ng?mL-1,交叉反应率分别为89.85%、90.88%和89.41%。100℃煮沸5 min后的麸皮、市售普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩酶半数抑制浓度分别为2 871.34、5 208.85、7 914.12和5 804.24 ng?mL-1,交叉反应率分别为5.18%、2.86%、1.88%及2.56%。【结论】制备出了具有高效价、高灵敏度和特异性的鼠源植酸酶多克隆抗体,为植酸酶单克隆抗体制备及植酸酶ELISA检测试剂盒研制奠定了基础。     

甲氧苄氨嘧啶人工抗原的合成及鉴定

用重氮化方法将甲氧苄氨嘧啶(TMP)偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成了免疫抗原BSA-TMP和包被抗原OVA-TMP,并用紫外扫描、SDS-PAGE和动物免疫试验进行了鉴定。结果表明,半抗原TMP和载体蛋白偶联成功。人工抗原BSA-TMP的成功合成,为TMP单克隆抗体制备及其快速检测试剂的研制奠定了基础。     

林可霉素人工抗原的合成与鉴定

拟合成并鉴定林可霉素( Lincomycin,LIN)人工抗原,通过动物免疫生产亲和力高、特异性好的鼠源LIN多克隆抗血清.采用高碘酸钠法将林可霉素与牛血清白蛋白(BSA)及鸡卵清蛋白(OVA)分别偶联,合成免疫原LIN-BSA和包被原LIN-OVA,并采用紫外分光光度法(UV)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.结果表明,半抗原LIN和载体蛋白偶联成功.动物免疫试验(免疫BALB/c纯系小鼠)结果显示,3只小鼠效价均达1∶3 000,且2号小鼠多抗血清抗LIN的半数抑制质量浓度IC50为3.85 μg/L,与莫能菌素的交叉反应率为6.19％,与其他药物无交叉反应.表明成功获得高效价、特异性好、亲和力高的鼠源抗LIN多抗血清.