表达猪圆环2型的多拷贝P28-Cap重组猪痘病毒的构建及表达量分析

为探究猪痘病毒作为载体表达猪圆环病毒2型（PCV2）-Cap蛋白,插入外源基因P28-ORF2的拷贝数与PCV2-Cap蛋白表达量的关系。本试验以猪痘病毒为载体,通过双酶切连接及无缝克隆方法构建重组质粒,并纯化到了8株含不同拷贝数（1~8拷贝） P28-ORF2的重组猪痘病毒,基于荧光斑大小、电镜观察病毒粒子及Western blotting结果进行判断。纯化到的8株重组病毒的荧光斑直径为317.41~384.96 μm,大小无明显差异。重组猪痘病毒粒子形态与亲本病毒一致。Western blotting结果为插入1拷贝P28-ORF2的重组蛋白表达量最低;随着P28-ORF2拷贝数的增加,PCV2-Cap表达量也随之增加;至插入4拷贝P28-ORF2时,PCV2-Cap表达量达到峰值;随后减少。8株重组猪痘病毒荧光斑大小无明显差异,表明猪痘病毒基因组中插入不同拷贝数P28-ORF2对重组病毒在PK15细胞内的增殖无影响。重组猪痘病毒粒子的形态未发生变化说明多拷贝外源基因的插入并未对猪痘病毒的结构造成影响。本研究结果表明,猪痘病毒为载体表达外源蛋白时,单启动子启动多拷贝外源序列能明显提高外源蛋白的表达量,插入4拷贝的外源序列为较合适的拷贝数。     

鸽瘟的流行动态及其有效防治

鸽瘟是由鸽副黏病毒引发鸽的一种急性、热性、高接触性传染病。该病一年四季均可发生,但多以10月至次年5月多发,呈地方性流行。鸽副黏病毒对不同品种、不同年龄的鸽均有感染性,鸽群常突然发病,并迅速蔓延,主要临床特点是肠炎、下痢和神经症状,尤以嗜神经速发型多见,发病和死亡率高,对养鸽业造成巨大威胁。本文从鸽副黏病毒的病原学特征、流行病学、流行概况、诊断与防制等几个方面对其进行了综述。     

表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组猪痘病毒的构建及鉴定

为探索猪痘病毒（swinepox virus,SWPV）作为猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）疫苗载体的可行性,本试验以痘苗病毒启动子P11启动绿色荧光蛋白筛选标记,猪痘病毒TK基因为外源基因的插入位点,P28、P7.5启动子启动PCV2 ORF2基因,以猪痘病毒JX20G株为亲本病毒,采用同源重组技术分别构建了两株表达PCV2衣壳蛋白的重组猪痘病毒rSWPV11-28C和rSWPV11-7.5C。结果显示,重组猪痘病毒rSWPV11-28C和rSWPV11-7.5C均成功表达了PCV2衣壳蛋白,表达的蛋白能与PCV2单克隆抗体6E12发生特异性反应;痘苗病毒启动子P28的启动效果明显优于P7.5,P28适合用于启动目的基因;利用重组猪痘病毒制备的PCV2灭活疫苗免疫小鼠后,rSWPV11-28C疫苗组的PCV2抗体水平与某PCV2商品疫苗相当,该重组病毒的成功构建为PCV2相关疾病及其他疫病在猪群中的防控提供了新的方向。     

谈统考与我校普化教学

为了促进西北地区高等农林院校教学质量的提高，1992年由西北区教学协作组决定对西北区所属高等农林院校的普通化学实行统考，至今已经实施六年了。由于历史和地理的原因，我校从1995年才开始介入，对普通化学连续三年进行了统考，通过这种统考形式，我们从中找到了差距，吸取了教训【，同时也加速了教学改革，并在改革中发展提高，使我校的普通化学教学呈现出可喜的变化。1参加统考时我校普通化学教学的状况分析1．且自1992年以来普通化学的师资力量一直是化学教研室乃至整个基础部最薄弱的环节，到1995年决定参加统考时，只有一名讲师、一…     

鸽源禽毛滴虫的体外药敏试验

利用体外培养的禽毛滴虫对8种市面上常用药物进行了体外抗禽毛滴虫药敏试验.在发育繁殖稳定的禽毛滴虫的培养管中,分别加入不同种类及其不同浓度的受试药物,37℃作用2和6 h后,计算各管活虫数;并与不加药物的培养管中的活虫数比较,计算活虫率,以此为指标评价不同药物的杀虫效果.结果表明,二甲硝唑、替硝唑具有显著的杀毛滴虫作用,制霉菌素、环丙沙星、复方磺胺甲（口恶）唑仅有部分抑制作用而不能将滴虫完全杀灭,泰乐菌素、复方甘草、盐酸小檗碱杀虫作用不明显.试验结果为临床选用抗禽毛滴虫药物提供了依据.     

广东省鸽毛滴虫感染情况的调查

随着养鸽业的迅速发展,鸽病也随之严重。鸽毛滴虫病是鸽最常见的一种侵害消化道上段的原虫病,引起干酪样病变。根据国外资料和国内的调查显示,约有80%的笼养鸽带虫,成鸽症状不明显,幼鸽常因首次吃成鸽嗉囊中的鸽乳而被感染,症状表现突出,甚至死亡。近年来,此病已成为危害     

猪痘病毒TK、ORF121、ORF143基因缺失毒株的构建及其生物学特性的测定

为筛选猪痘病毒（SWPV）复制非必需区并测定其缺失株的生物学特性,本研究根据同源重组原理分别针对SWPV的TK（ORF063）、ORF121和ORF143基因设计引物。应用重叠延伸PCR技术拼接同源重组左右臂及EGFP筛选标记表达盒,将拼接片段分别转染到感染SWPV的PK15细胞。利用荧光显微镜观察标记含EGFP的单个蚀斑,筛选获取重组毒株。应用PCR及Western blotting对重组毒株进行鉴定。分别测定各毒株感染PK15细胞的蚀斑大小和皮下接种保育猪致病性。PCR结果表明,目的基因成功整合到相应位点,成功获得重组毒株rSWPV-TK、rSWPV-121和rSWPV-143;Western blotting结果显示,连续传代的重组毒株在PK15细胞上稳定表达外源蛋白。重组毒株在PK15细胞上形成的痘斑均小于亲本毒株,其中ORF121缺失株差异极显著（P<0.01）。各毒株均可导致保育猪痘斑形成,其中ORF121缺失株引起病变时间短,产生痘斑小,毒力较亲本下降。综上所述,本研究筛选到2个SWPV基因组中可供外源蛋白插入的复制非必需区ORF121和ORF143,为构建SWPV基因工程载体奠定了基础。     

蒜瓣浸出液抗柔嫩艾美耳球虫效果研究

为了考察大蒜浸出液在抗鸡球虫临床上的应用。试验设Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组,第Ⅰ组:卵囊分别投入50%、20%、10%的蒜瓣浸出液、2.5%重铬酸钾液中,恒温培养24、48、72 h后计算卵囊孢子化率。第Ⅱ、Ⅲ组:分别以50%蒜瓣浸出液抑杀的未孢子化、孢子化卵囊,恒温培养48 h洗净感染1×105个/只卵囊;第Ⅳ组:感染1×105个/只孢子化卵囊,以20%的蒜瓣浸出液作为驱虫中药替代饮水;第Ⅴ组:感染1×105个/只孢子化卵囊后不给药;第Ⅵ组:不感染不给药。结果表明,50%、20%浓度蒜瓣浸出液于24、48、72 h后卵囊孢子化率与对照组差异均显著(P<0.05);以第Ⅱ组雏鸡的平均增重及相对增重率最高,组间差异不显著,与感染对照组(Ⅴ)差异显著;第Ⅲ组平均OPG数仅次于感染对照组(Ⅴ),远高于Ⅱ、Ⅳ组差异显著;第Ⅱ、Ⅳ组卵囊比值在25%~50%区间,卵囊值均为10;第Ⅲ组卵囊比值在75%~100%区间,卵囊值为40;第Ⅲ、Ⅴ组部分鸡只出现血便;第Ⅲ组病变值(11.7)仅次于第Ⅴ组(23.3),第Ⅲ、Ⅳ组间差异显著;在第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ3组中,ACI以第Ⅱ组(173.95)为最高,第Ⅳ组次之,2组均判为中等效果。第Ⅲ组ACI为117.55,小于120判为无效。蒜瓣浸出液对体外抑杀未孢子化卵囊感染、体内阻断球虫发育效果较好。     

折光仪在甘草浸膏产量预测中的应用

采用折光仪测定甘草浸提液折光率预测其产量,并通过实验确定测试最佳条件。结果表明此方法准确度高,重现性好,操作简便快速,可以满足实际生产过程中甘草浸膏产量的预测工作。