核酸水平检测犬副流感病毒方法的建立

根据GenBank中与犬副流感(CPIV)同源性较近的SV5病毒N基因保守序列,利用DNAStar软件设计了一对特异性引物,能扩增265bp大小的片段,并以此建立了检测CPIV的RT-PCR方法,实验证明该对引物特异扩增CPIV;不扩增犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒和狂犬病病毒犬的四种病原的核酸。检测临床病料20份,其中2分为CPIV阳性。此法敏感性较高。是检测犬急性传染性呼吸道疾病(CIRD)中CPIV的有效的方法。     

犬瘟热病毒RT-nested PCR检测方法的建立与应用

根据犬瘟热病毒（CDV）弱毒株Onderstepoort的核衣壳蛋白（NP）基因序列设计了套式引物，建立了RT-nested PCR检测方法。特异性试验表明，该法可以特异扩增出CDV NP基因片段，但从RNA病毒狂犬病病毒（RV）、犬副流感病毒（CPIV）、犬冠状病毒（CCV），DNA病毒犬细小病毒（CPV）、犬腺病毒（CAV）及正常Vero细胞中均不能扩增出条带。敏感性试验表明，RT-PCR可以扩增10^-6稀释度的病毒RNA，而建立的RT-nested PCR可以扩增到10。稀释度的病毒RNA，后者的敏感性明显高于前者。用RT-nested PCR法检测了2006年我国东北地区临床表现犬瘟热症状的病例19例，检出率达90％，明显高于RT-PCR的检出率（45％）。部分病例扩增片段的测序结果表明，CDVNP基因出现个别碱基变异。研究结果表明，建立的犬瘟热病毒RT-nested PCR方法敏感、特异，适用于动物犬瘟热的快速诊断。     

尿液嘌呤衍生物法估测瘤胃微生物蛋白产量的研究进展

一种非伤害性方法-尿液嘌呤衍生物(PD)作为标记物估测瘤胃微生物蛋白产量近年来得到较快发展.本文就这种方法的原理依据,发展及应用进行了综述,分析了这种方法存在的一些问题,展望了将来的研究和发展方向.     

水貂犬瘟热活疫苗与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗制备及其联合免疫效果研究

制备了水貂犬瘟热活疫苗(以下简称犬瘟活疫苗)与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(以下简称肠炎灭活苗)各3批,通过半成品及成品检验结果显示,生产的2种疫苗合格且生产工艺稳定。通过采用肠炎灭活苗稀释犬瘟活疫苗,实现2种疫苗联合(简称联合疫苗)后,体外接种Vero细胞,采用专用稀释液稀释的犬瘟活疫苗作对照,在25℃存放条件下,5 h内两者的犬瘟热病毒含量无明显差异,表明该方法对犬瘟热病毒的存活无明显影响。将联合疫苗免疫水貂10只,犬瘟活疫苗、肠炎灭活苗分别免疫10只水貂作为单苗对照组,免疫后21 d采血,测定3组的抗体水平,联合疫苗组的犬瘟热病毒中和抗体和细小病毒HI抗体分别与对应单苗的抗体水平无明显差异,表明联合疫苗具有与单苗相当的免疫效力。该研究为进一步研发水貂犬瘟活疫苗与肠炎灭活苗联苗奠定了基础。     

水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗(CDV3-CL株,悬浮培养)临床安全性和免疫效力评价

为评价水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗(CDV₃-CL株,悬浮培养)冻干制剂在临床应用中的安全性和免疫效果,分别在吉林、辽宁两省选择饲养规模相似的3个毛皮兽场进行疫苗安全性(10头份)和免疫效力实验(1头份)研究,接种后观察动物的临床症状,检测抗体水平并随机选择部分水貂进行攻毒试验。结果显示,超剂量接种水貂未见有明显的临床症状,对水貂的生产性能无明显影响;水貂免疫疫苗后21 d即可获得达到免疫保护的抗体水平;免疫180 d仍能维持较高水平的抗体,且能够保护动物抵抗强毒攻击。试验表明,水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗(CDV₃-CL株,悬浮培养)冻干制剂具有较好的临床保护效果。     

水貂犬瘟热CDV_3疫苗株基因组序列测定及H基因遗传稳定性分析

对水貂犬瘟热CDV3疫苗株基因组进行全序列测定与分析,以阐明该疫苗株的来源亲本毒株,基因特征及H基因遗传稳定性。将CDV3疫苗株基因组cDNA分9个重叠片段进行RT-PCR并克隆入pMD 18-T载体中,测定全长cDNA序列。并与CDV野毒参考株和疫苗株N、F和H基因氨基酸序列比对分析其基因变异情况。通过对CDV3疫苗株6个不同生产批次(Vero细胞培养代次)H基因序列测定以分析毒株的分子遗传稳定性。基因序列分析结果表明:CDV3疫苗株基因组全长15 690 bp,与CDV野毒株基因组同源性较低(93.0%~95.3%)。H基因核苷酸和氨基酸序列与Lederle疫苗株(EF418783)同源性最高,分别为99.6%和98.7%。而6个不同培养代次CDV3疫苗株H基因氨基酸序列无任何差异。由此证实CDV3疫苗株的亲本毒株与Lederle疫苗株有着最密切关系,不同培养代次的CDV3疫苗株H基因具有较高的遗传稳定性。     

水貂α-干扰素基因的克隆与序列分析

采用RT-PCR方法从体外诱导的水貂外周血淋巴细胞中扩增出水貂的α-干扰素基因(MiIFN-α)。测序结果显示,水貂的IFN-α基因序列全长为564个核苷酸,共编码187个氨基酸,与GenBank上已发表的雪貂的IFN-α核苷酸序列同源性为97.5%,氨基酸同源性为92%。     

一例貉子犬瘟热的诊断

2006年8月20日,河北沧州市肃宁县送来3只冷冻貉子,我们对其进行了剖检检查、显微镜观察、细菌检测和分子生物学检测,并根据临床发病流行特点诊断为犬瘟热,给养殖户提供合理的治疗方案,取得了一定效果,避免了巨大的经济损失。现将诊治报告如下。     

尿液嘌呤衍生物法估测瘤胃微生物蛋白产量的研究进展

一种非伤害性方法-尿液嘌呤衍生物（PD）作为标记物估测瘤胃微生物蛋白产量近年来得到较快发展。本文就这种方法的原理依据，发展及应用进行了综述，分析了这种方法存在的一些问题，展望了将来的研究和发展方向。     

犬腺病毒间接免疫荧光检测方法的建立

用犬腺病毒制作的抗原玻片,通过确定最佳一抗和荧光抗体浓度,特异性试验和敏感性试验,建立了犬腺病毒间接免疫荧光方法,可用于狐狸脑炎的诊断.