利用电穿孔法对狂犬病病毒SRV9 Ψ区缺失株病毒的拯救及鉴定

探讨电穿孔转染法对SRV9Ψ区缺失株重组病毒的拯救及鉴定。利用电穿孔细胞转染法,将纯化的Ψ区缺失株pcDNA-NPMG-L全长质粒和pcDNA-N、pcDNA-P、pcDNA-M、pcDNA-G和pcDNA-L辅助表达质粒共转染至BHK-21细胞中,并进行盲传,借助RT-PCR、间接免疫荧光试验、Western-blot及透射电子显微镜对重组病毒进行鉴定。结果显示,重组病毒能够产生绿色荧光,透射电子显微镜观察可见典型的弹状病毒,对重组毒株与亲本毒株G蛋白进行Western-blot验证,可获得相应目的条带。结果表明,通过电穿孔细胞转染法,能成功拯救出重组病毒SRV9Ψ区缺失株,为病毒的拯救提供新的转染方法,并能有效提高转染效率,为研发新型狂犬病疫苗提供参考。     

DNA疫苗制备工艺研究

以禽流感DNA疫苗pCAOH5转化大肠杆菌JM109后,利用发酵罐进行发酵培养。将菌体悬浮裂解中和后,经澄清和浓缩处理,利用阴离子交换色谱对其进行纯化。结果表明实验室规模的技术路线完全能够为质粒DNA的工业化制备奠定技术基础。     

抗IBDV VP2单克隆抗体制备及其免疫学鉴定

采用不连续蔗糖密度梯度离心法纯化的鸡传染性法氏囊病病毒弱毒Gt株,并与Tj强毒株共同免疫BALB/c小鼠.利用淋巴细胞杂交瘤技术,取其脾细胞与SP2/0 骨髓瘤细胞进行融合, 经过3次筛选克隆, 获得8株具有分泌抗IBDV抗体的杂交瘤细胞系,并对8株单抗进行了分子生物学及免疫学方面的鉴定.间接ELISA显示获得的8株单抗只与IBDV有特异性的反应,Western-blotting表明,部分单抗能够特异地与Sf9细胞表达的VP2蛋白反应;中和试验表明8株单抗均具有中和活性,而且有3株中和效价在26以上.研究推测,8株单抗中有2株针对的表位为构象依赖性,其余6株单抗所针对的为线性中和性表位.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒新疆株的分离与鉴定

为了解猪繁殖与呼吸道综合征在新疆的流行现状,以及病毒毒株的分子生物学特征,对疑似该病病料进行地方毒株的分离,并对其进行鉴定。采集新疆乌鲁木齐市七道湾某猪场疑似PRRS病死的猪只肺脏及淋巴结等组织病料,将其处理后接种到Marc-145细胞上,并盲传3代;对分离株进行毒力测定(TCID50),应用RT-PCR方法对出现CPE的细胞培养物进行分子检测。结果显示,分离到的新疆病毒株可发生细胞病变,在Marc-145细胞上的TCID50为10-5·mL-1。RT-PCR检测结果用琼脂糖凝胶电泳鉴定基因序列,将测序结果与GenBank已发表的PRRSV毒株基因序列进行对比分析。研究证明所分离到的病毒为PRRSV,命名为XJ-Q。     

绵羊巴氏杆菌病的诊断与防治

2005年12月,在哈密地区巴里坤县岔哈泉至伊吾小淖毛湖片区放牧羊群中发生以口腔流水、呼吸困难、急性死亡为主要症状的一种羊病,有的未见明显症状就突然死亡。经临床症状、病理变化和实验室诊断,确诊为巴氏杆菌病。随后采取了相应的防制措施,控制了病情的发展和蔓延。1流行情况     

自然感染的新疆美利奴羊中绵羊慢病毒的分离鉴定

本文从自然感染绵羊慢病毒的绵羊的外周白细胞及组织中分离病毒，在接种后２代均出现细胞病变效应，将病毒培养液浓缩１００倍作为抗原进行琼扩检测呈阳性反应，病毒培养液经免疫电镜检测，观察到了病毒颗粒。病毒的半数感染量约为１０－５／ｍｌ，将分离到的３株ＯＰＰＶ分别命名为ＮＸＪ－５５，ＮＸＪ－７３，ＮＸＪ－０４８１。     

犬胆石症病例

某公安警犬,雄性,4岁。1988年1月6日晨发现该犬舍内有呕吐物,食、饮欲废绝,精神沉郁。1月7日中午入院。下午4时,病犬呻吟,站立不稳,突然倒地死亡。该犬4月龄时有患过细小病毒性肠炎,治愈后腹泻与使秘相交替的病史。临床检查病犬营养中下,弓腰提腹     

一例犬胸壁炎性纤维肉瘤的诊断

为了探究一例犬胸壁肿物的性质,并对其进行诊断与鉴别诊断。应用血常规、直接数字化X射线摄影系统(DR)、病理剖检及病理组织学手段对该肿物进行检测分析。血常规检测结果显示,该患犬白细胞总数及嗜中性细胞总数较正常值升高。DR胸片显示该犬胸壁右侧近腋下处有一椭圆形肿物,与周围组织界限明显。眼观该肿物大小为7.5 cm×6 cm×4.5 cm,包膜可见破溃,切面呈鱼白色,质地较硬。镜下瘤细胞异性较大,以梭形细胞增生为主,间杂着圆形至椭圆形的纤维母细胞,病理性核分裂象明显,有相当数量的炎性细胞浸润。经病理学诊断结合临床检查分析将该肿物确诊为炎性纤维肉瘤。本研究为兽医临床上纤维肉瘤的诊断提供资料参考。     

新疆美利双羊对绵羊慢病毒的抗体应答的转换

用琼扩（ＡＧＩＤ）试验每月１次检查绵羊慢病毒（ＯｃＬＶ）北疆株（ＮＸＪｓｔｒａｉｎ）血清学阳性羊的抗体应答的转换。２头受试公羊和８头母羊分别连续检查６个月和１３～１５个月。１０头受试羊中有７头的对病毒核心蛋白（ｐ２６）的抗体（外线）与对病毒包膜糖蛋白（ｇｐ１３５）的抗体（内线）以及与同时对ｐ２６和ｇｐ１３５二者的抗体（双线）发生转换。３０％～５０％的受试羊在一次性琼扩试验检查时只出现外线,３头血清学可疑羊在２～３月后全部血清学转阳。作者等还对抗体应答转换的原因和琼扩试剂的合格性进行了讨论。     

RT-PCR检测CPIV方法的建立与应用

【目的】建立CPIV的RT-PCR检测方法。【方法】从临床上疑似犬副流感(CPI)的犬鼻腔分泌物中提取CPIV总RNA。根据Genebank中收录的CPIV(序列号AY581307)中NP基因保守序列,设计一对特异性引物,扩增出667 bp片段,以此建立CPIV的RT-PCR检测方法。【结果】特异性试验表明该引物不能扩增犬其它常见的传染病病毒基因。敏感性试验表明该引物能检测到10~(-6)的CPIV总RNA量。重复性试验表明该引物具有良好的稳定性和重复性。对临床采集的32份样品进行RT-PCR检测时,阳性率为53.12%。【结论】实验建立了CPI的RT-PCR检测方法,可适合于临床CPIV的早期快速诊断和小规模的分子流行病学调查。