新疆绵羊进行性肺炎的初步血清学调查

对来自7个地区的784头绵羊血清样品进行对绵羊进行性肺炎(OPP)病毒的琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID test,琼扩),共检出阳性1头、弱阳性10头,阳性率为1.4％。在763头新疆羊中,只检出1头阳性,其中来自伊犁、塔城、博尔塔拉、昌吉、乌鲁木齐的733头新疆羊的血清样品中,没有1头阳性反应羊。来自于田羊场的18头边区莱斯特羊和3头林肯羊的血清样品中,分别检出8头和2头阳性羊,阳性率分别为44.4％和33.6％。本文还对疾病的来源和检疫问题进行了讨论。     

CDV-N重组狂犬病病毒的毒力及其免疫原性测定

为了探究CDV-N重组狂犬病病毒的毒力及对小鼠的免疫效果,将CDV-N重组狂犬病病毒于BSR细胞上扩毒培养、浓缩后测定其FFD₅₀及LD₅₀;将浓缩后的重组病毒液与复合佐剂按一定比例混匀,按不同免疫剂量、不同免疫方式分组免疫接种小鼠,利用ELISA试剂盒对狂犬病、犬瘟热的特异性抗体进行定性/定量检测。结果显示,重组病毒浓缩后的FFD₅₀值为7.85logFFD₅₀/0.1 mL,LD₅₀值为7.67logLD₅₀/0.03mL;免疫接种后第14天抗体阳性率达100%,小鼠血清中的特异性抗体IgG水平随着免疫剂量的递增而递增。试验结果可为CDV-N重组狂犬病病毒制备口服弱毒疫苗的进一步研究提供试验数据。     

大肠杆菌SerB基因的克隆及其在黄色短杆菌中的表达

磷酸丝氨酸转氨酶(Phosphoserine aminotransferase,SerB)是L-丝氨酸生物合成中的关键酶,应用PCR技术从大肠杆菌JM109(E.Coli JM109)中扩增出磷酸丝氨酸转氨酶基因,将其与表达载体pEC 7连接.通过电转化方法,将重组质粒转入黄色短杆菌(Brevibacterium flavum C-11,BfC-11)中,经酶活检测和摇瓶发酵培养,含有重组表达质粒的BfC-11B的磷酸丝氨酸转氨酶的活力和L-丝氨酸产率均比原宿主菌BfC-11有所提高,为构建L-丝氨酸高产基因工程菌的研究奠定了基础.     

PRRSV新疆分离株的ORF5序列分析与同源性比较

采用RT-PCR技术,分别对PRRSV新疆分离株XJ-a,XJ-b,XJ-c的ORF5片段的ORF5基因进行扩增,获得长度为603 bp的特异性目片段.ORF5片段序列分析表明,新疆3个分离株的ORF5基因与欧洲型PRRSV毒株序列核苷酸的同源性为56.1%～56.4%,与标准美洲型PRRSV毒株序列的核苷酸同源性达到86.6%～87.2%,与国内部分省市流行株的同源性在96.0%～99.2%.PRRSV新疆分离株属于北美洲型PRRSV的变异毒株,属同一亚型,毒株间也存在一定的差异,具有高度致病性的生物学特征.     

奶牛子宫内膜炎治疗学研究进展

近几年来国内外治疗奶牛子宫内膜炎的主要方法有7种.化学药物治疗法具有疗效好、成本低的特点,但是对细菌容易产生耐药性和药物易在牛奶和肉中残留.中药治疗法具有低残留、低毒和对细菌不易产生耐药性的优点.中西医结合治疗法既能发挥中药的调节治疗作用,又可发挥西药较强的抗菌消炎能力.微生物学治疗方法采用子宫内接种微生物可以调节子宫内环境,抑制相关微生物的生长,但是要预防微生物引起再次感染.用免疫学治疗法和激素治疗法防治该病是比较新的方法.由于该病病情复杂,所以首先要辩证论治,然后制定出合理的治疗方案,才能够获得理想的治疗效果.     

犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其表达产物抗原性鉴定

参考GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列,用Oligo6．0软件设计一对特异性引物,从患犬瘟热的犬全血样品中提取总RNA,经RT—PCR扩增得到1572bp的基因片段,将其插入pMD18-T克隆载体中构建了pMD18-CDVN重组质粒,将其转入到大肠杆菌DH5a中,进行鉴定、测序。将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-2连接构建了pGEX-4T-2-CDVN重组质粒,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,进行鉴定、测序、IPTG诱导表达。序列分析表明克隆的CDVN蛋白基因从起始密码子ATG开始到终止密码子TAA结束全长为1572个核苷酸,与GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列相比同源率达到93．9％～99．1％。Western-blotting分析显示表达产物为84kDa的融合蛋白,可被犬瘟热抗血清所识别,具有良好的抗原性。     

应用Gibson Assembly方法构建狂犬病病毒SRV9株重组感染性cDNA克隆

应用Gibson Assembly连接法精确快速构建狂犬病病毒SRV9株重组感染性cDNA克隆,为狂犬病病毒感染性cDNA克隆的构建提供新的方法。应用Gibson Assembly连接法在同一反应体系内,将多个片段和经限制性内切酶线性化的载体,按设计的顺序进行连接,实现多个片段的一步组装。设计带有20bp~30bp重叠序列的PCR引物,扩增得到带有重叠序列的狂犬病病毒5个结构蛋白基因和增强型荧光蛋白基因。扩增的片段和线性化的载体经胶回收纯化后,与Gibson连接液混合后,50℃反应60min,连接产物转化Stbl3感受态细胞,提取重组质粒,经PCR、酶切和测序鉴定,缺失了病毒伪基因Ψ区和糖蛋白基因的跨膜区并且将增强型荧光蛋白基因插入糖蛋白基因终止密码子前,构建了全长17 600bp的重组质粒,完成了重组全长感染性cDNA克隆的构建。     

小鼠发情周期不同时期超数排卵效果的研究

实验分析了108只昆明白小鼠发情周期与超数排卯的关系，结果表明在发情周期不同时期进行超数排卵，效果有差异，以发情初期和间情后期超数排卵效果最好，见栓率高达84．20％，3．5d取胚，平均胚胎数达30．57枚，而且胚胎的质量也最好，多数是桑椹胚和囊胚，占胚胎总数的78．73％。