PCV-2陕西株ORF2基因的克隆、分析及原核表达

【目的】克隆猪圆环病毒2型陕西分离株(PCV-2SX株)ORF2基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的PCV-2ORF2基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV-2SX株ORF2全长基因,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。然后,将ORF2基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。【结果】扩增到了702bp的PCV-2ORF2全长基因。序列分析结果表明,PCV-2SX株ORF2基因与广西分离株(EF675237,ChinaGX)和巴西分离株(DQ861802,am21)的核苷酸序列同源性均达98.0%,氨基酸序列同源性均达98.3%,与其他毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在89.9%～97.9%和88.5%～98.0%。SDS-PAGE可检测到分子质量约为48ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。Western-blotting分析表明,重组蛋白可被PCV-2阳性血清所识别。【结论】成功克隆了PCV-2SX株ORF2基因,并进行了原核表达。     

外源调节物质对涝害烟草生长发育和品质的影响

以龙岩烟区云烟87烟草品种为材料,通过大田试验研究不同外源调节剂二乙基二硫代氨基甲酸钠(sodium diethyldithiocarbamatre,简称DDTC)、吲哚乙酸(indole-3-acetic acid,简称IAA)和抗坏血酸(ascorbic acid,简称As A)对大田生长后期中度涝害胁迫条件下烟草生长及烘烤后外观品质的影响。结果表明,中度涝害条件下,通过叶面增施外源调节物质在整体上能够增强涝害胁迫植株根系的恢复能力,主要体现在主根、侧根长度和根系质量的增加等方面,并能提高烤烟烘烤调制后的外观质量。其中DDTC缓解效果最明显。     

单链抗体及其在肿瘤诊断和治疗中应用研究进展

单链抗体(ScFv)是将抗体重链可变区和轻链可变区通过一段连接肽连接而成的重组蛋白,也是目前报道最多的基因工程抗体。ScFv具有分子质量小,免疫原性低,无Fc端,不易与具有Fc受体的靶细胞结合,对肿瘤组织的穿透力强,可以与其他效应分子连接成抗肿瘤融合蛋白等特点,是保持抗体亲和性和特异性的最小功能性抗体片段,广泛应用于医学和生物技术研究领域。文章介绍了ScFv的特点、基因来源、构建、表达及其在肿瘤的诊断和治疗中的应用研究进展。     

链球菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌和大肠杆菌多重PCR检测方法的建立及应用

根据NCBI上已收录的链球菌ef-tu基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、沙门菌hut基因和大肠杆菌23SrRNA基因的序列,设计并合成4对特异性引物,通过优化多重PCR的反应条件,建立了能够同时检测4种细菌混合感染的多重PCR诊断方法。特异性分析结果表明,应用该方法可以从链球菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌和大肠杆菌以及4种细菌的混合物中扩增出4条大小分别为197、278、495和652bp的特异性条带,其他对照组的检测结果均为阴性;敏感性分析表明,该方法对4种病原菌基因组DNA的检出量分别为链球菌25.6pg、金黄色葡萄球菌33.2pg、沙门菌35.7pg、大肠杆菌52.1pg;人工模拟感染样本检测表明,该方法能从混合感染的病料中特异地检测出4种病原菌。本试验建立的多重PCR方法具有特异性强,敏感度高,稳定性好的特点,可以有效的检测链球菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌和大肠杆菌的混合感染。     

细菌性和霉菌性流产的诊断——胎盘突检查有助于确定流产病因

细菌性和霉菌性流产的诊断——胎盘突检查有助于确定流产病因安志兴摘译童德文校胎盘突组织病理学检查有助于流产病因的确诊。对２２例胎盘突的检查以确定流产原因，其中有１１例发现明显的病灶（５０％），且从中分离出溶血性巴氏杆菌、化脓性放线菌、单细胞李氏杆菌、地...     

Omp25蛋白的真核表达及其对巨噬细胞的作用

本试验旨在构建表达猪布鲁菌(Brucella suis)外膜蛋白Omp25蛋白的真核重组表达质粒,并探讨Omp25蛋白对猪肺泡巨噬细胞生长活性及细胞因子分泌的影响。以猪布鲁菌基因组DNA为模板,设计带有6×His标签的引物克隆Omp25基因,扩增产物克隆入pCI-neo真核表达载体,双酶切及测序鉴定正确后转染猪肺泡巨噬细胞3D4/21,检测其对巨噬细胞生长活性和分泌细胞因子的影响。RT-PCR和Western blotting检测结果证实Omp25蛋白获得正确表达。显微镜观察细胞形态表明,Omp25蛋白对猪肺泡巨噬细胞的形态无明显影响。MTT结果表明,Omp25蛋白对猪肺泡巨噬细胞的生长活性有轻度但不显著的抑制作用。ELISA检测TNF-α和IL-12蛋白表达水平表明,Omp25蛋白可以显著抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-12。本试验成功构建了表达猪布鲁菌外膜蛋白Omp25蛋白的真核重组表达质粒,该蛋白对猪肺泡巨噬细胞的细胞形态没有明显影响,对其生长活性有轻度但不显著的抑制作用,可以显著抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-12。     

加强动物医学本科教育教学,提高本科人才培养质量

过去10年,我国高等教育规模持续扩大,教学改革不断深化,但我国高等教育的人才培养质量存在许多问题。本文针对西北农林科技大学动物医学本科教育教学及管理中的问题,在组织全院教职工深入开展以提高本科教育质量为主题的学习、讨论活动,积极为学院的发展献计献策的基础上,总结提出了10个需要解决的主要问题、5条交流经验和4个合理化建议,为动物医学本科教育教学水平、人才培养质量的提高和可持续发展奠定基础。     

甘肃棘豆化学成分研究Ⅱ.石油醚萃取部位成分分析

甘肃棘豆粉乙醇热回流,回收溶剂后,用1 mol/l HCl酸化,抽滤,滤渣用石油醚萃取,回收石油醚,得到石油醚萃取部位.取该部位硅胶层析柱,先用石油醚,石油醚:氯仿(v/v)50:1、30:1、20:1、15:1、10:1、8:1、5:1、2:1、1:4,氯仿洗脱,每20 m1收集一份.再用氯仿:乙酸乙酯(v/v)10:1、1:1,乙酸乙酯洗脱,每40 ml收集一份,共收集585份,TLC检测,合并相同部分.石油醚萃取部位作GC-MS,显示有93种化合物,确认了18种化合物的结构,其中酯13种,烷烃3种,羧酸2种.     

广西油茶现代种业现状与发展对策

阐述广西油茶资源和油茶现代种业发展的现状,全面分析广西油茶现代种业发展存在的主要问题,提出抓好种业四大工程建设,建立种苗生产稳固体系;根据产品的需求,推进定向育苗;加大资金投入,完善基础设施;强化技术服务,提高良种意识等发展对策。