近期干细胞研究专利

专利号主题申请者作者日期 专利类型WO985 896 3将人干细胞移植入第一和第二种动物胚胎 ,第一胚胎注入抗原 ,而第二胚胎注入源于第一胚胎的细胞 ,以大量制备人单克隆纯体。Wengler Q S Wengler Q S 1998.12 .30 A1U S5 85 1832 富集多能神经干细胞的哺乳动物神经细胞的体外培养 ,以生产分化的神经细胞。Neurospheres L td(Calgary,Alber-ta,Canada)Baetge E E,Ham-m ang JP,Reynolds B,et al1998.12 .2 2 AU S5 8495 5 3用位于重组酶靶位点两侧的永久化基因载体转化神经嵴干细胞 ,以生产永久化细胞系 ,该细胞可用于移植、制备单…     

细胞外环境中分化抑制物对动物胚胎干细胞克隆率的影响

介绍了饲养层、条件培养基、分化抑制因子对哺乳动物胚胎干细胞分离与克隆的影响，并探讨了白血病抑制因子影响胚胎干细胞克隆的机理。     

奶牛不排卵状况的研究综述

卵泡生长可分为三个阶段：卵泡出现；卵泡的选择优势化与闭锁分离；卵泡排卵。不排卵的情况可分为：①生长卵泡不能生长至“分离期”。原因可能是极度的营养缺乏。②卵泡可生长到“分离期”，但没有达到排卵体积。这方面研究得较多，认为这类牛比正常牛有更强的E2对GnRH／LH的负反馈，在营养不良或吮乳时可引起这类不排卵状况。③卵泡生长的最终体积大于排卵卵泡，这类牛的特征是下丘脑对E2的正反馈作用不敏感；高产奶牛常见。对于第一种情况，关键在于预防，提高育成期的饲管水平。后两种常见的不排卵状况是由于下丘脑对E2反应的敏感性改变；常用增加血液循环中P4的浓度改变GnRH／LH释放的脉冲以协助卵泡最后阶段的生长，或重新建立下丘脑对E2的正反馈来治疗。     

动物胚胎干细胞在动物科学中的应用

自Ｅｖａｎｓ等从延迟着床胚胎中分离出小鼠胚胎干细胞 (ＥＳ)以来 ,包括小鼠在内的各种动物ＥＳ细胞的分离受到国内外科学家的关注[1] 。ＥＳ细胞在克隆动物 ,生产转基因动物 ,创建人类遗传疾病动物模型 ,研究细胞分化 ,细胞与细胞的相互关系以及用人类ＥＳ细胞定向分化制造用于器官移植的组织器官等领域具有广阔的应用前景。本文对动物ＥＳ细胞克隆及其遗传操作技术在动物遗传育种、胚胎学及发育生物学领域的应用前景作一评述和展望。1　生产克隆动物1 1　利用ＥＳ细胞生产克隆动物的优势　近年来的研究表明 ,动物早期胚胎细胞、动物胚胎…     

牵牛子浸出物对于各种动物的下泻试验

牵牛子为旋花科植物牵牛的干燥种子,别名“黑丑”“白丑”,中药中最常用的泻药。据文献记载其致泻成分为牵牛子脂(pharbitin),易溶于乙醇。张颂(1)(1959)在小白鼠和家兎上作过下泻试验,但在家畜方面尚无试验报告。我们用牵牛子的乙醇浸出物在犬、猪和山羊等动物上,作了下泻试验。     

羊水标本性状对人源羊水干细胞原代分离培养的影响

目的 探讨羊水标本性状对羊水干细胞原代分离培养的影响。方法 取人羊水标本进行原代培养,分离羊水干细胞,观测原代细胞的贴壁数量及贴壁时间,探讨怀孕时间、羊水中血液污染程度、羊水体积及离心后团块大小等因素对原代分离培养的影响。结果 试验结果表明,不同怀孕期羊水细胞的贴壁时间有明显差异（p<0.05）,孕晚期贴壁时间较长;羊水中血液污染程度越重,贴壁时间越长;羊水体积对原代细胞的贴壁数量、细胞贴壁时间有明显影响;离心后团块大小与原代细胞的贴壁数量、细胞贴壁时间没有明显关系。结论 羊水干细胞原代培养时,怀孕时间、血液污染程度、羊水体积等因素在一定程度上影响原代细胞的贴壁数量及细胞贴壁时间。     

原始生殖细胞的人类胚胎干细胞克隆

取材于妊娠终止胚胎生殖腺或生殖嵴及其周围组织,用ＤＭＥＭ＋ＮＣＳ培养液体外培养,分离由人ＰＧＣｓ转化成的类ＥＳ细胞,并将其与同源胚胎成纤维细胞一起用胰蛋白酶＋ＥＤＴＡ的无钙镁ＰＢＳ液消化传代。在原代培养１２ｈ观察到胞体较大、边缘不整、贴壁分裂增殖的ＰＧＣｓ样细胞,４８ｈ后观察到２６处紧密排列呈鸟巢状的类ＥＳ细胞集落及集落团。第６ｄ传代成功,第１６ｄ传至第４代。结果表明,体外培养附植后胚胎能够建成人的类ＥＳ细胞系。     

胚胎干细胞体外分化研究进展

胚胎干细胞是来源于胚胎的、内细胞团的、具有多向分化潜能的细胞。随着胚胎干细胞,特别是分化机制研究的不断深入,胚胎干细胞分化为各种类型细胞的研究也取得了较大进展,从而为细胞移植、细胞治疗和组织工程等提供了一个新的途径。主要综述了小鼠和人胚胎干细胞向内、中、外三个胚层细胞类型分化的技术,以期为胚胎干细胞定向诱导分化的研究提供一些参考。     

奶牛干细胞多能性基因Nanog和Lin28克隆分析及其逆转录病毒表达载体的构建与包装

以50~60日龄的Holstein奶牛胎儿原始生殖嵴组织为材料,通过RT-PCR的方法克隆奶牛Nanog与Lin28基因开放性阅读框(ORF)全序列。序列全长分别为903 bp和618 bp。所克隆的奶牛Nanog与Lin28基因序列与GenBank中已经发表的参考序列进行比对同源性均为100%。将扩增的基因片段经过酶切后亚克隆到反转录病毒载体pMSCVneo的多克隆位点,经过酶切、PCR和测序鉴定正确后,应用lipofectamine2000介导转染PT67包装细胞,经过14 d G418连续抗性筛选,挑选抗性集落扩大培养。收集病毒上清经过RT-PCR与透射电镜检测,并用NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果表明,病毒上清中含有逆转录病毒颗粒,Nanog与Lin28基因在筛选后的包装细胞PT67细胞中均有转录,病毒上清感染滴度值分别达到7.5×107cfu/mL和9.19×107cfu/mL。结果表明,本试验已经成功克隆出奶牛Nanog与Lin28基因开放性阅读框全序列,并建立高效、稳定产生包含有pMSCV-Nanog与pMSCV-Lin28质粒的感染性病毒颗粒的包装细胞株,为进一步产生奶牛诱导性多能干细胞(Induced pluripotentstem cells,iPSCs)奠定基础。     

仔猪胰腺细胞体外培养体系的建立

为了研究体外培养仔猪胰腺细胞的适宜条件,试验选取1日龄的仔猪胰腺组织置于冰上清洗、修剪,对消化酶、离心方式、培养皿铺被方式、培养液及添加不同促生长因子等多种因素进行筛选和优化。结果表明:0.25%胰酶消化所获得的细胞强于0.1%胶原酶消化获得的细胞,细胞清亮,易于生长;采用500 r/min离心5 min、多次离心所获得的细胞较Percoll不连续密度梯度离心和5%BSA等密度梯度离心所获得的细胞贴壁率高,生长能力强,易于培养传代;采用0.1%明胶或20μg/mL的层黏连蛋白铺被培养皿均比无铺被的培养皿获得更多的贴壁细胞;以RPMI 1640、M199、F12、L-DMEM多种培养液培养仔猪胰腺细胞,表现出多种细胞形态和生长趋势;在基础培养液中添加上皮生长因子、角质化生长因子、β-巯基乙醇和白血病细胞抑制因子、转铁蛋白与亚硒酸盐混合试剂等促干细胞增殖因子可促进不同形态细胞的增殖。说明按此方式培养可获得大量、多种细胞形态的仔猪胰腺祖/干细胞。