安徽省规模禽场高致病性禽流感血清学横断面研究与风险因素分析

为掌握安徽省禽群的禽流感免疫抗体水平以及引起免疫不合格的主要风险因素,在2018年春季集中免疫前,对安徽省7个市开展了H5和H7亚型禽流感血清学检测和问卷调查。按照分层随机抽样方法,在7个市选择种禽场、蛋禽场和肉禽场,共140个养禽场,在每个养殖场内随机抽取35份血清样品,进行HI抗体检测,并根据检测结果,计算群体水平的真实免疫合格率/阳性率;将H5或H7亚型禽流感抗体群体合格率低于70%的养禽场定义为免疫不合格场,进行单因素风险分析。结果显示:安徽省7个市H5(Re-8株)和H7N9(Re-1株)的场群真实抗体合格率/阳性率分别为67.7%(95%CI:60.0%～75.4%)和39.8%(95%CI:31.7%～47.9%),62个养禽场的H5或H7亚型抗体未达标(70%);存栏量越小(P=0.046)、免疫次数越少(P=0.016),H5或H7亚型免疫抗体不合格的可能性越高(P 0.05);存栏量小于4 000羽、免疫后时间≤21 d或≥91 d、家禽日龄≤26或≥2 200、免疫次数≤1、规模化饲养鹅,以及不使用"H5+H7"二价灭活疫苗(OR=2.66,95%CI:1.34～5.35)、周边3 km内有野禽栖息地(OR=2.78,95%CI:1.10～7.65)的养禽场的H5或H7亚型免疫抗体不合格风险相对较高。结果表明:2018年春季安徽省7个市H5、H7亚型禽流感免疫抗体保护率下降幅度明显,需要及时开展春季集中免疫;养禽场规模、类型以及家禽种类、是否免疫疫苗、免疫次数、养禽场周边是否有野禽栖息地等,均与群体的禽流感免疫抗体合格率显著相关,因此在制定强制免疫计划时,应视情况进行分类指导,实时补免或增加免疫次数。此外,养禽场选址时应尽量避开野禽栖息地。本研究为决策部门制定禽流感免疫方案提供了技术支撑。     

七类常见抗菌药耐药机制及耐药基因国内流行现状

为了解动物源细菌的抗菌耐药情况,加强耐药性的监测与控制,针对常见的七大类抗菌药物,阐述了它们的耐药机制以及耐药基因的国内流行现状。有研究显示:动物源细菌对各类抗菌药均有不同程度的耐药,且耐药基因种类繁多、分布广泛;流行率和检测率较高的耐药基因多数能在质粒、整合子、转座子等移动元件上被检出,并以水平传播的方式扩散;同一质粒上检测出数种耐药基因,这些质粒是细菌产生多重耐药现象的重要原因。本文对监管部门出台相应控制方案提供了理论依据。     

内毒素血症山羊内皮衍生因子(ET/NO)、脂质介质(TXA_2/PGI_2)的动态变化

以内毒素诱发山羊微循环障碍为模型,同步测定发病山羊血浆内皮素（ＥＴ） 、一氧化氮（ＮＯ） 、血栓素（ＴＸＡ２） 、前列环素（ＰＧＩ２） 的动态变化。结果表明,注射内毒素后３ｈ、６ｈ 、１２ｈ 、２４ｈ 后山羊血浆ＥＴ、ＮＯ、ＴＸＢ２ 、６ｋｅｔｏＰＧＦ１ ∝的含量,与对照组及发病前比较均显著升高（ Ｐ＜ ０ ．０１） 。ＥＴ 含量变化在发病后６ｈ 达峰值,于１２ｈ、２４ｈ 时点呈现回落。ＮＯ 产物含量在发病后１２ｈ 达峰值。发病山羊血浆ＴＸＢ２ 水平逐渐增高,而６ｋｅｔｏＰＧＦ１ ∝水平逐渐下降,两者比值失衡。提示,内毒素诱导山羊微循环障碍的发病过程中,ＮＯ、ＥＴ、ＴＸＡ２ 、ＰＧＩ２ 可能是参与休克发生发展的重要休克体液因子。     

安徽三黄鸡β-防御素Gal-6cDNA基因片段的克隆与序列分析

根据基因库中鸡β-防御素Gal-6cDNA基因序列设计2对引物,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从安徽三黄鸡白细胞RNA中扩增了β-防御素Gal-6cDNA基因片段。得到了大小为250bp片段。将扩增产物纯化并克隆到PGEM-T-Easy载体上,转化感受态细胞DH-5α,经筛选获得重组质粒并测序,用P3/P4引物从重组质粒中扩增出成熟肽,大小约150个bp。测序后Blast分析表明,安徽三黄鸡序列与基因库上已发表的序列相差一个碱基,Gal-6多肽共有67个氨基酸组成,分别是20个氨基酸残基的信号肽、5个氨基酸的原片段、42个氨基酸的成熟肽。     

ETT2结构基因epaPQR对禽致病性大肠杆菌生物学特性及致病性的影响

大肠杆菌Ⅲ型分泌系统2（Escherichia coli type III secretion system 2,ETT2）参与禽致病性大肠杆菌（avian pathogenic Escherichia coli,APEC）的致病作用。本研究旨在探究ETT2结构基因epaPQR对禽致病性大肠杆菌的生物学特性及致病作用的影响,为进一步阐明ETT2的致病机制提供依据。基于CRISPR-Cas9基因编辑技术,构建epaPQR基因缺失株和回复株,通过生长曲线测定、运动性和生物被膜形成能力等试验,分析epaPQR基因对APEC生物学特性的影响;通过血清杀菌与组织载菌量等试验分析epaPQR基因对APEC致病性的影响。结果表明,成功构建ETT2结构基因epaPQR基因缺失株和回复株,epaPQR基因缺失后,其生长能力和生物被膜形成能力并没有显著改变（P>0.05）;但epaPQR基因缺失后,其运动能力显著降低（P<0.05）,在透射电镜下观察到缺失株鞭毛数量明显减少,通过荧光定量PCR发现,鞭毛T3SS结构基因及鞭毛输出蛋白基因的转录水平均显著下调（P<0.05）。epaPQR基因缺失后其抗血清杀菌能力显著增强（P<0.05）,缺失株AE81ΔepaPQR在雏鸡体内不同器官的定殖能力显著降低。结果说明,ETT2结构基因epaPQR参与调控APEC的鞭毛形成,影响APEC抗血清杀菌能力以及在体内组织器官的定殖能力,表明epaPQR在APEC致病过程中发挥重要作用,本研究为深入探究ETT2功能和APEC致病机制提供参考。     

1株禽源致病性大肠杆菌分离鉴定与相关特性的初步研究

无菌采取病鸭肝脏,进行病原菌的分离、鉴定、生化试验、毒力基因检测和动物毒力试验。结果:致病菌为大肠杆菌,至少携带有5种毒力基因,并且该菌对小白鼠和鸡有较强的致死性,属于大肠杆菌强毒株,与基因检测的结果相吻合。     

鸡组织中地克珠利和妥曲珠利残留HPLC检测方法的建立

建立了同时检测鸡组织中地克珠利和妥曲珠利残留的高效液相色谱.经乙腈提取,正己烷脱脂,旋转蒸发浓缩后,以0.05mol/L磷酸/三乙胺(pH3.0):乙腈(40:60)作为流动相,反相高效液相色谱-紫外检测法检测,检测波长240 nm.鸡组织中地克珠利和妥曲珠利的回收率分别为92.0%～102.0%和83.4%～89.0%,变异系数为5.9%～12.2%,地克殊利和妥曲珠利的检测限分别为0.012 mg/kg和0.010 mg/kg,在0.05～1.0 mg/L质量浓度范围内呈良好的线性相关.该法样品处理简单,可同时检测地克珠利和妥曲珠利的残留,且准确度和精密度均符合残留分析的要求.     

杀菌性/通透性增加蛋白的生物学功能及其应用

杀菌性/通透性增加(BPI)蛋白是哺乳动物中性粒细胞中存在的一种碱性蛋白,它能与革兰氏阴性菌脂多糖结合,增加外膜对抗菌药的通透性,具有中和内毒素和杀灭细菌的生物学作用,在革兰氏阴性菌感染的治疗方面有良好的发展前景。文章主要从分子生物学和病理学角度出发,对 BPI 蛋白的生物学杀菌活性和作用机理进行了综述,并展望了其应用前景。     

恩诺沙星在鸡肉组织中残留的ELISA检测方法研究

分别用N-羟基琥珀酰亚胺法和氯甲酸异丁酯法把恩诺沙星(ENR)与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原,免疫新西兰大白兔得到ENR的多克隆抗体,建立了ENR间接竞争ELISA方法。结果表明:抗ENR血清效价达达1∶212以上,得到标准曲线的线性回归方程为Y=-0.2341X+0.1193(R2=0.9878),中值(IC50)为36 ng/mL,最低检测限(LOD)为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10~1000 ng/mL。批内变异系数为3.18%~7.64%,批间变异系数为9.69%~11.94%,鸡组织中的ENR的回收率为76.5%~89.42%。本试验建立的ELISA方法能够满足恩诺沙星兽药残留检测要求。     

共轭亚油酸对黄羽肉鸡脂肪沉积及部分免疫指标的影响

选用90只1日龄黄羽肉鸡,探讨添加不同水平（0%、1%、3%）共轭亚油酸（CLA）对不同部位脂肪沉积及部分免疫指标的影响。结果显示：日粮中添加CLA对黄羽肉鸡体增重无影响,但显著降低其腹脂沉积（P〈0.05）,使腹部脂肪细胞直径减小（P〈0.05）。日粮中添加3%CLA显著提高胸肌和腿肌中的脂肪含量（P〈0.05）。日粮添加CLA显著降低血清中甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇（P〈0.05）,升高游离脂肪酸（P〈0.05）,而对血清总胆固醇、血清中瘦素和脂联素水平无显著影响。此外,日粮添加CLA还显著提高胸腺指数和法式囊指数（P〈0.05）,而对血清中抗新城疫病毒抗体和脾脏指数无影响。结果提示,CLA对肉鸡腹脂和肌内脂肪的沉积有不同的作用,可改善肉鸡的胴体品质,并影响其免疫功能。