Ⅲ型分泌系统2转录因子YqeI对禽致病性大肠杆菌生物被膜调控机制的研究

生物被膜是导致细菌产生耐药性的主要原因之一,本文通过探究Ⅲ型分泌系统2（ETT2）转录调节因子YqeI对禽致病性大肠杆菌生物被膜形成的影响及其影响机制,为探究ETT2对禽致病性大肠杆菌致病机制的影响提供研究基础。利用Red同源重组的方法构建yqeI基因缺失株,并通过检测野生株与缺失株生物被膜形成能力、结合转录组学测序及荧光定量检测生物被膜基因表达量等,探究转录调节因子YqeI对禽致病性大肠杆菌生物被膜形成能力的影响。结果显示成功构建了yqeI基因缺失株,且yqeI的缺失并不影响生长曲线,但生物被膜形成能力显著下降,且相关生物被膜基因转录量显著下调。禽致病性大肠杆菌ETT2转录调节因子YqeI显著影响了禽致病性大肠杆菌生物被膜形成能力,为从ETT2及yqeI的角度发掘潜在的调控网络提供依据。     

七类常见抗菌药耐药机制及耐药基因国内流行现状

为了解动物源细菌的抗菌耐药情况,加强耐药性的监测与控制,针对常见的七大类抗菌药物,阐述了它们的耐药机制以及耐药基因的国内流行现状。有研究显示:动物源细菌对各类抗菌药均有不同程度的耐药,且耐药基因种类繁多、分布广泛;流行率和检测率较高的耐药基因多数能在质粒、整合子、转座子等移动元件上被检出,并以水平传播的方式扩散;同一质粒上检测出数种耐药基因,这些质粒是细菌产生多重耐药现象的重要原因。本文对监管部门出台相应控制方案提供了理论依据。     

安徽省规模禽场高致病性禽流感血清学横断面研究与风险因素分析

为掌握安徽省禽群的禽流感免疫抗体水平以及引起免疫不合格的主要风险因素,在2018年春季集中免疫前,对安徽省7个市开展了H5和H7亚型禽流感血清学检测和问卷调查。按照分层随机抽样方法,在7个市选择种禽场、蛋禽场和肉禽场,共140个养禽场,在每个养殖场内随机抽取35份血清样品,进行HI抗体检测,并根据检测结果,计算群体水平的真实免疫合格率/阳性率;将H5或H7亚型禽流感抗体群体合格率低于70%的养禽场定义为免疫不合格场,进行单因素风险分析。结果显示:安徽省7个市H5(Re-8株)和H7N9(Re-1株)的场群真实抗体合格率/阳性率分别为67.7%(95%CI:60.0%～75.4%)和39.8%(95%CI:31.7%～47.9%),62个养禽场的H5或H7亚型抗体未达标(70%);存栏量越小(P=0.046)、免疫次数越少(P=0.016),H5或H7亚型免疫抗体不合格的可能性越高(P 0.05);存栏量小于4 000羽、免疫后时间≤21 d或≥91 d、家禽日龄≤26或≥2 200、免疫次数≤1、规模化饲养鹅,以及不使用"H5+H7"二价灭活疫苗(OR=2.66,95%CI:1.34～5.35)、周边3 km内有野禽栖息地(OR=2.78,95%CI:1.10～7.65)的养禽场的H5或H7亚型免疫抗体不合格风险相对较高。结果表明:2018年春季安徽省7个市H5、H7亚型禽流感免疫抗体保护率下降幅度明显,需要及时开展春季集中免疫;养禽场规模、类型以及家禽种类、是否免疫疫苗、免疫次数、养禽场周边是否有野禽栖息地等,均与群体的禽流感免疫抗体合格率显著相关,因此在制定强制免疫计划时,应视情况进行分类指导,实时补免或增加免疫次数。此外,养禽场选址时应尽量避开野禽栖息地。本研究为决策部门制定禽流感免疫方案提供了技术支撑。     

鸡β-防御素Gallinacin-8基因片段的克隆与序列分析

本试验从鸡的肝脏中提取总RNA,根据GenBank公布的鸡β-防御素Gallinacin-8(简称gal-8)基因序列设计2对引物,运用RT-PCR技术扩增出大小为20lbp的鸡β-防御素gal-8的基因片段.通过序列分析得知其由66个氨基酸组成,包括20个氨基酸残基的信号肽、5个氨基酸的原片肽及41个氨基酸的成熟肽.BLAST分析表明与GenBank中已公布的序列相比较缺失2个碱基,其同源性达到98%.将该基因克隆进pGEM-T Easy载体中,并转化大肠杆茵感受态DH5α,经筛选和测序鉴定获得了阳性重组质粒.从重组质粒中扩增出的成熟肽,大小约123 bp.试验为进一步构建重组核蛋白及表达具有广谱抗微生物活性的防御素提供了实验基础.     

地方农业院校内涵式发展的策略分析简

高等教育内涵式发展是贯彻《国家中长期教育改革和发展规划纲要（2010—2020年）》的客观要求,是高校尤其是地方农业院校的必然选择,其中特色发展是内涵式发展的核心。地方农业院校要想增强竞争力就必须树立特色理念、培养特色人才、构建特色队伍、建设特色学科、强化特色科研、培育特色文化。注重发展的特色性和行业性,才能增强地方农业院校发展的竞争力。     

鸡组织中地克珠利和妥曲珠利残留HPLC检测方法的建立

建立了同时检测鸡组织中地克珠利和妥曲珠利残留的高效液相色谱.经乙腈提取,正己烷脱脂,旋转蒸发浓缩后,以0.05mol/L磷酸/三乙胺(pH3.0):乙腈(40:60)作为流动相,反相高效液相色谱-紫外检测法检测,检测波长240 nm.鸡组织中地克珠利和妥曲珠利的回收率分别为92.0%～102.0%和83.4%～89.0%,变异系数为5.9%～12.2%,地克殊利和妥曲珠利的检测限分别为0.012 mg/kg和0.010 mg/kg,在0.05～1.0 mg/L质量浓度范围内呈良好的线性相关.该法样品处理简单,可同时检测地克珠利和妥曲珠利的残留,且准确度和精密度均符合残留分析的要求.     

氧氟沙星免疫亲和色谱柱的研制

本试验将氧氟沙星与载体蛋白偶联成人工抗原,用合成的免疫原免疫家兔,制备出高效价抗OFL血清。经纯化后研制出针对OFL特异性吸附的免疫亲和色谱柱,并对色谱柱进行了评价,偶联率为93%,动态柱容量为2204ng/mL,分别添加5mL200ng/mL、300ng/mL和400ng/mL氧氟沙星标准工作液,5mL甲醇洗脱,高效毛细管电泳检测,连续测定6次,测得其回收率为94%、92.67%、95.5%,变异系数为5.32%、3.17%、3.84%。     

人工诱发鸡新城疫的攻毒条件比较研究

由于我国广大农村养鸡散户的比重很大，对环境的保护不够，饲养环境为病毒严重污染，给新城疫的防制增加了不少困难，散发情况普遍存在。加之近年来超强毒株和野毒株等问题的存在，导致接种过疫苗的鸡群表现非典型新城疫，如何防制新城疫已成为当前的重要课题。     

鸡、猪BPI氨基端的基因克隆和鉴定

为了克隆杀菌/通透性增加蛋白(BP I)N端cDNA,构建重组体pM D 18-T-BP I,并进行序列鉴定,应用RT-PCR技术,参照G enB ank报道的预测序列,从鸡多形核白细胞(PM N)mRNA中扩增出杀菌/通透性增加蛋白(BP I)氨基端95个氨基酸的基因片段,并与pM D 18-T连接,构建BP I氨基端的基因重组体,进行酶切鉴定和序列测定;从猪PM N的总mRNA中扩增出BP I氨基端48个氨基酸的基因片段,进行测序鉴定。获得鸡BP I N端长度为285 bp的基因片段。序列分析证实该片段中有3个点突变,但均不在活性中心;获得猪BP IN端长度为146 bp的基因片段。成功克隆出BP I N端基因,经序列测定,确认为BP I基因,为进一步表达该基因奠定了基础。     

庆大霉素诱发鸡肠源性大肠杆菌易位的研究

实验选择庆大霉素作为诱发因子,制备含pUC118质粒DNA的大肠杆菌作为易位示踪菌,将45只20日龄肉仔鸡随机分成3组,庆大霉素诱发组、大肠杆菌感染对照组和空白对照组.比较庆大霉素诱发组不同时间和不同组织的大肠杆菌易位率,测定分泌型免疫球蛋白A(SIgA)的含量,并与易位率进行相关性分析.结果表明4×104U/kg的庆大霉素可引起鸡肠源性大肠杆菌易位,48h易位率达80%,SIgA水平与E.coli易位率呈负强相关关系,可作为肠道细菌易位的敏感指标.肝脏的易位率最高.免疫器官脾脏、法氏囊、胸腺易位率较低可能与庆大霉素直接毒性较弱及鸡全身性炎症反应滞后有关.