ELISA技术在畜产品安全检测中的应用

酶联免疫吸附试验 (Enzyme-L inkedImmunosorbent Assay,EL SA)主要是将抗原(或抗体 )吸附于固相载体 ,在载体上进行免疫酶染色 ,最后底物显色用肉眼或分光光度计判定结果的一种检测方法。随着生活水平的不断提高 ,人们越来越关注食品中各种有害物质对健康的影响。对食品中各种有害物质的监测显得越来越重要。畜产品作为食品的重要组成部分 ,其安全检测也不容忽视。检测畜产品中有害物质的方法很多 ,大多数需要昂贵的仪器设备 ,且操作繁琐 ,成本较高。酶联免疫吸附法因其具有操作简便、快速准确等优点 ,成为畜产品中药物残留、毒素、农药、微生物检测中最重要的检测技术之一 ,得到人们的青睐 ,展示了很好的应用前景     

鸡BPI氨基端的基因克隆和鉴定

应用RT-PCR技术,参照GenBank报道的预测序列,从鸡多形核白细胞(PMN)mRNA中扩增出杀菌/通透性增加蛋白(BPI) 氨基端95个氨基酸的基因片段,并与pMD18-T连接,构建BPI氨基端的基因重组体,进行酶切鉴定和序列测定.结果表明,获得了BPI N端长度为284 bp的基因片段,序列分析证实该片段中有3个点突变,但均不在活性中心.     

鸡新城疫首次免疫采用饮水法的可行性研究

采用饮水法给予不同剂量的新城疫活疫苗对雏鸡进行免疫,探讨饮水免疫法在雏鸡首免中的可行性。结果表明,雏鸡母源抗体在9日龄达峰值,饮水法效果较滴鼻、点眼法差。     

一株孔雀源大肠杆菌分离鉴定与致病特性初步研究

无菌采取病死孔雀肝脏,进行病原菌的分离、鉴定、生化试验、毒力基因检测、动物毒力试验。结果表明：致病菌为大肠杆菌,至少携带有papC、iucD、tsh、irp2、iss5种毒力基因,具有高致病性,并且该菌对小白鼠和鸡有较强的致死性。     

冷温血停搏液联合灌注对犬心肌超微结构的影响

为客观地比较血停搏液不同灌注对心肌保护作用,２８只低温体外循环犬,按停搏液灌注方式随机分为４组：Ａ组为冷晶组,Ｂ组为冷血组,Ｃ组为温血组,Ｄ组为冷温血组。采用电子透射显微镜观察实验犬心肌缺血再灌注期心肌细胞的超微结构变化。结果显示,冷温血停搏液联合灌注组在心肌缺血期,再灌注６０ｍｉｎ两时点,与冷晶组,冷血组和温血组各对应点相比,心肌细胞的线粒体损伤最轻,心肌破坏较小。     

毛细管电泳技术及其在兽药残留分析中的应用

随着人们生活水平的提高和养殖业的发展,兽药残留对食品安全的危害日益受到人们的关注.中国作为畜禽产品重要出口国,将在相当长的一段时间内必须面对兽药残留所形成的贸易壁垒.因此,必须加强兽药残留检测技术的研究.文章就毛细管电泳技术及其在兽药残留分析中的应用做一综述.     

高效毛细管电泳同时测定4种氟喹诺酮类抗菌药

建立同时测定4种氟喹诺酮类抗菌物(左氧氟沙星、培氟沙星、沙拉沙星和洛美沙星)的高效毛细管电泳(HPCE)法。考察了缓冲液离子浓度和pH、分离电压、运行温度等电泳参数,确立了最佳的电泳条件:缓冲液为10 mmol/L磷酸二氢钾-20 mmol/L硼砂(pH9.0,内含35mmol/L SDS),紫外检测波长278 nm,分离电压28 kV,运行温度25℃。结果表明,4种药物在8min内得到完全分离,分离度R为1.2以上。方法精密度(RSD)为0.22%~0.26%(迁移时间)和1.36%~2.39%(峰面积),回收率99.60%以上。该法快速、简便、准确。     

禽致病性大肠杆菌Hcp2b对雏鸡气管黏膜细胞因子-细胞因子受体相互作用通路的影响

T6SS （type VI secretion system）是革兰阴性菌中常见的一种分泌系统,其效应蛋白Hcp2b作用机制迄今仍未明晰。本研究以禽致病性大肠杆菌（avian pathogenic Escherichia coli,APEC） Hcp2b蛋白为研究主体,旨在探究Hcp2b蛋白在APEC感染鸡气管黏膜过程中发挥的作用及机制。采用Red重组方法以质粒pKD3为模板构建hcp2b缺失株,pSTV-28质粒连接hcp2b目的片段构建重组载体,导入感受态Δhcp2b菌株构建回复株,并对Δhcp2b菌株的生长曲线进行测定。7日龄雏鸡气管感染hcp2b缺失株及野生株,感染后12、24 h收集鸡气管黏膜细胞进行转录组学测序及生物信息学分析。结果表明,hcp2b缺失株及回复株构建成功,hcp2b基因缺失对菌株的生长性能无影响。hcp2b基因缺失株感染气管黏膜后,mRNA的表达谱发生变化,感染后12 h,有144个基因表达量发生变化（上调差异基因87个,下调57个）;感染后24 h,有135个基因表达量发生变化（上调差异基因79个,下调56个）。生物信息学分析发现差异基因富集在Cytokine-cytokine receptor interaction、Protein processing in endoplasmic reticulum等信号通路。hcp2b基因缺失未影响APEC的生长特性,hcp2b基因缺失后影响雏鸡气管黏膜Cytokine-cytokine receptor interaction通路基因mRNA转录水平的变化,IL-1β、IL-12b的表达均上调。该结果为APEC的致病机制研究提供了理论依据。     

牛杀菌／通透性增加蛋白氮端基因克隆和序列分析

目的克隆杀菌/通透性增加蛋白(BPI)cDNA,构建重组体pGEM-T-easy-BPI,进行序列鉴定。方法应用RT-PCR技术,参照Genbank报道的序列,从牛嗜中性粒细胞mRNA中扩增出杀菌/通透性增加蛋白238个氨基酸,并与pGEM-T-easy连接,构建基因重组体,进行序列测定.结果获得长度为713bp的活性基因。序列分析证实该片段中有1个点突变,但氨基酸序列相同。结论:成功克隆出BPI基因,经序列测定,确认为牛BPI基因,为进一步表达该基因奠定了基础。     

利血平增敏法检测环丙沙星药物残留的研究

为了解环丙沙星对金黄色葡萄球菌（金葡菌）的抗菌活性及利血平对其抗菌活性的影响,采用对倍稀释浓度琼脂平板法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)值,同法测定利血平对环丙沙星对金葡菌MIC值的影响。结果表明利血平增强了环丙沙星的抗菌活性,增大了环丙沙星抑制金葡菌的抑菌圈直径,提高了环丙沙星在组织中检测的灵敏度。我们研究发现利血平加入后中心浓度由0.5 μl/ml变为0.0625 μl/ml,最低检测限由0.125 μg/ml降低到0.015625 μg/ml。