石刁柏Ty1-copia反转座子逆转录酶序列克隆及异质性分析

对石刁柏(Asparagus officinalis)品种UC309及TD818的两个反转座子逆转录酶序列进行了PCR扩增并对其在基因组中的异质性进行了分析。结果表明,s101366和s107518两个转座子序列均属于Ty1-copia反转座子,是Ty1-copia反转座酶的部分保守区序列,其长度分别为636和653 bp。对随机获得的两个反转座子测序表明两个反转座子存在一定的异质性,其突变主要是由于发生了碱基置换,其中碱基转换分别占到80.4%和80.0%,T圮C和G圮A转换的比例差异不显著。通过对两个石刁柏品种(TD818和UC309)中获得的序列聚类分析发现,s101366和s107518均未表现出性别间、品种间及近缘种间的保守性,甚至表现出了种内异质性大于种间的异质性特征。这说明了两个反转座子处于高度变异的状态,是产生染色体不稳定的重要因素之一。     

牛生长激素基因工程茵的构建及其诱导表达

为获得牛生长激素（BST）蛋白,构建了工程菌并进行了诱导表达．先设计2对引物,从pUCm—T-BST克隆中扩增出BST成熟蛋白编码序列,双酶切后分别插入表达载体（pET30a和pET29a）,转化E．coli DH5a并进行阳性克隆鉴定;再将重组质粒分别转化到E．coli BL21（DE3）和RosettaTM（DE3）pLysS中,构建BST原核工程菌;最后进行诱导表达．结果表明,重组表达载体pET30a—BST和pET29a—BST中均插入了正确的目的基因;经IPTG诱导后,以BL21（DE3）为宿主的工程菌无目的蛋白表达,而pET30a—BST／Rosetta^TM和pET29a．BST／Rosetta^TM分别可见分子量约29．5,26．5kD的融合蛋白表达,约占菌体蛋白的26％,35％．说明稀有密码子限制BST基因在E．coli中的表达。选择适宜的宿主菌可克服此障碍．     

猪BMP4基因原核表达及优化

构建猪BMP4基因pET32a-BMP4原核表达质粒,在E.coli中表达并分离纯化目的蛋白。采用PCR技术以pMD18-T-BMP4重组质粒为模板扩增获得BMP4基因编码成熟肽片段,并插入到原核表达载体pET32a中,构建原核表达重组质粒pET32a-BMP4。将阳性重组质粒转化到表达宿主菌中,在不同的温度、IPTG浓度和时间下进行诱导表达,SDS-PAGE分析鉴定。构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,表达宿主菌经IPTG诱导表达分子量约为31 ku的融合蛋白,表达产物占菌体总蛋白的30%以上。成功构建了pET32a-BMP4原核表达质粒,并经纯化得到BMP4目的蛋白,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定基础。