NGF对牛体外受精和孤雌激活早期胚胎发育的影响

在牛胚胎培养液中分别添加5、10、15、20μg/L神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）,观察其对牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响。结果显示：培养液中添加10μg/L NGF,可显著提高牛卵母细胞体外受精囊胚率（35.0%vs 50.0%,0.010.05）。结果表明,10μg/L NGF可促进牛体外受精和孤雌激活早期的胚胎发育。     

水牛体细胞连续核移植的效果

为探讨水牛体细胞连续核移植的效果,以水牛胎儿成纤维细胞为核供体,进行了水牛体细胞连续核移植。结果显示,连续核移植的融合率显著高于原代核移植(87.9%vs76.2%,P<0.05),但两者之间的分裂率和囊胚率没有显著差异(P>0.05);这说明水牛体细胞核移植胚胎可被再次克隆而不降低其发育能力,水牛体细胞连续核移植是可行的。     

葡萄糖在牛体外受精及胚胎发育中的影响

在牛精子获能液中添加不同浓度的葡萄糖,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育进行研究,通过观察顶体反应、超激活、活率和早期胚胎发育率,筛选出获能液中最适葡萄糖浓度及其有利于牛早期胚胎发育的最佳浓度.结果表明:葡萄糖是精子获能和维持超激活运动的主要能源物质,其代谢过程中产生的活性氧在牛精子体外获能、受精过程中起重要作用,高浓度(超过9.15 mM)葡萄糖有利于获能的完成;但是对早期胚胎发育不利,对早期胚胎发育来说其最适添加量为6.10 mM,此时的囊胚率最高.     

牛细胞核移植研究简报

本研究探讨了用体外受精胚胎作供体、体外成熟卵母细胞作受体进行核移植的可能性，比较了两种不同核移植方法的效果。本研究结果在我国首次获得牛核移植的成功。从屠宰场回收的黄牛卵巢中抽取未成熟的卵母细胞，采用以前报道的方法（Ｓｈｉｅｔａｌ，Ｔｈｅｎ－ｏｙｅｎｏｌｏｙ，１９９１，３５；２７１）进行体外成熟（ＩＶＭ）和体外受精（ＩＶＦ），获得ＩＶＭ如母细胞和ＩＶＦ胚胎。体外受精用精液为奶牛精液。在ＩＶＭ２３～２４ｈ＄母细胞去核后用作受体卵，体外发育到８～３２细胞期的ＩＶＦ胚胎用作核供体．去核后的卵母细胞分两组：！．在Ｗ２６ｈ（或３０ｈ）用８０Ｖ／ｍｍ４０μｓ电激活两次，然后注入供体胚胎卵裂球，ＩＶＭ３２ｈ（或３６ｈ）进行电融合；Ⅱ．注卵裂球前不激活，在ＩＶＭ３１ｈ进行电融合。两组融合条件相同（８０Ｖ／ｍｍ４０μｓ×２，间隔１ｓ），融合液为０．３Ｍ甘露醇＋０．０５ｍＭＣａＣｌ２＋０．１ｍＭＭｇＳＯ４＋１０ｍＭ组氨酸。融合印在颗粒细胞单层培养滴内共培养，体外培养２４ｈ后观察卵裂结果。经体外培养５～８ｄ后发育到桑椹和囊胚的核移植胚胎移植到同期发情的受体奶牛子直角内。２个月后直检妊娠情况。本研究结果如下：Ⅰ组操作后存活率（９０．     

家畜脂肪干细胞研究进展

脂肪组织中含有大量的间充质干细胞,目前对于间充质干细胞的研究主要是关注其基本的生物学特性和临床应用方面。脂肪干细胞因具有与骨髓间充质干细胞相似的生物学特性,且有易获取、安全、可迅速扩增等特点,已成为现有干细胞生物工程研究的最理想来源。利用脂肪干细胞建立大动物模型,以研究人类疾病、异体器官移植、动物疾病治疗和组织修复等方面,已成为脂肪干细胞的一个研究趋势。本文将对家畜脂肪干细胞的分离培养、表面抗原鉴定、分化能力、应用前景及存在问题做一综述。     

水牛胎牛、青年牛和成年牛腔前卵泡的分离及培养

本研究采用梳刮的机械法分离水牛胎牛、青年牛和成年牛腔前卵泡,并分别进行培养。每个胎牛、青年牛和成年牛的卵巢分别获得943.43±143.13、249.50±40.11和128.50±19.99个腔前卵泡,从胎牛卵巢获得的腔前卵泡,其数量明显多于青年牛和成年牛(P<0.01)。培养72h后青年牛和成年牛的腔前卵泡存活率分别为52.67%、52.03%,而胎牛仅有34.69%的腔前卵泡能够存活,其数量明显低于青年牛和成年牛(P<0.05)。结果表明,青年牛卵巢分离得到的腔前卵泡数量较多,且培养成活率高,是进行水牛腔前卵泡分离培养等研究的理想试验材料。     

水牛 STAT5a 和 STAT5b 基因启动子克隆及其活性分析

为了解转录激活与信号转导因子5(STAT5)在水牛乳腺发育及泌乳生理中的功能,对水牛STAT5a和STAT5b基因的5′调控区启动子序列进行了克隆,并比较其活性.根据GenBank已公布的牛STAT5a和STAT5b基因序列设计特异性引物,以广西本地水牛乳腺组织基因组DNA为模板,通过PCR法分别扩增不同长度STAT5a和STAT5b基因启动子片段并进行生物信息学分析.结果表明:克隆得到的水牛STAT5a基因启动子片段(P1和P2)大小是500bp,700bp,STAT5b基因启动子片段(P3,P4和P5)大小是500bp,800bp,1 500bp.在线分析结果显示,仅P2片段中存在高甲基化位点,且富含SP1,AP2等转录因子结合位点.将构建的不同长度启动子片段分别连入pGL3-Basic载体,分别转染水牛乳腺上皮细胞,检测荧光素酶表达水平.与未转染组相比,P1~P5质粒转染组的荧光素酶比值均显著提高(p0.05);添加5mg/mL质量浓度催乳素(PRL)处理乳腺上皮细胞,P3质粒转染组的荧光素酶比值显著高于其他各组(p0.05).以上结果表明,水牛STAT5a和STAT5b基因启动子活性均受到PRL调节,两者表达水平在水牛乳腺上皮细胞中不同,且STAT5b基因表达受PRL调控更为明显.     

神经生长因子NGF及其受体TrkA在雌性水牛生殖器官的表达定位

为研究神经生长因子NGF及其受体TrkA在广西雌性水牛生殖器官中表达定位情况,运用免疫组织化学ABC法对处于发情周期不同阶段(卵泡期、黄体期)成年水牛的卵巢、子宫、输卵管NGF、TrkA分别进行染色定位.结果表明:NGF/TrkA阳性细胞在卵巢主要见于卵泡内膜细胞、颗粒细胞及黄体细胞;在子宫主要见于子宫内膜上皮细胞、腺...     

兔精液冷冻保存的研究

本试验采用不同的稀释液对兔精液进行冷冻保存,并比较了在稀释液中添加不同防冻剂以及平衡时间对兔精液冷冻保存效果的影响.结果表明:稀释液Ⅱ稀释的精液,解冻后,精子活率明显高于稀释液Ⅰ稀释的(P＜0.01),其复苏率显著高于后者(P＜0.05).以稀释液Ⅱ为基础液,添加不同浓度(27.3%,15%,12%,9%)的DMSO对兔精液冷冻保存,结果解冻后精子活率以15%及12%两组较好,其中添加15%的优于12%的,但差异不显著(P＞0.05).选择不同种类的防冻剂(7%甘油与15%DMSO)比较时,发现7%甘油组解冻后精子活率明显低于15%DMSO组,二者差异极显著(P＜0.01),其复苏率显著低于后者(P＜0.05).以15%DMSO作为防冻剂,采用不同的平衡时间在5 ℃平衡,结果发现平衡30 min和60 min的解冻后精子活率较好,但差异不显著(P＞0.05),而90 min和120 min的冷冻效果较差.     

供体细胞低温冷藏处理对水牛体细胞核移植效果的影响

自1997年《自然》杂志报道克隆羊“多莉”以来,多种哺乳动物的体细胞核移植相继取得了成功。然而,体细胞核移植的技术环节繁多,各种各样的因素影响着核移植的效果,核移植的效率仍然很低(牛,<5%)[1]。核移植效率的提高有赖于各个技术环节的完善,供体细胞的准备与处理是核移植中的一个关键环节,它直接影响到核移植的效果。低温冷藏供体细胞可以减少染色体变异的可能性,亦有利于重构胚的发育。研究探讨了水牛胎儿成纤维细胞经低温冷藏处理后对核移植效果的影响。1材料与方法1.1试剂及培养液的配制研究所用的试剂除TCM-199购自G ibco公司外,其…