水牛SERPINE2基因的克隆、生物信息学及组织表达分析

本试验对水牛SERPINE2基因进行生物信息学分析，探索其在水牛不同组织器官中的表达规律，旨在为研究SERPINE2在水牛生殖过程中的具体调控机制提供理论支持。利用PCR技术克隆水牛SERPINE2基因CDS区的全长序列，在线生物信息学分析程序对SERPINE2进行分析，实时荧光定量PCR技术检测SERPINE2 mRNA在水牛不同组织的表达水平。结果表明：SERPINE2基因CDS区长度为1 191 bp，编码397个氨基酸，通过分析相似性结果，发现水牛和牛、绵羊、山羊的相似性为99.6%；系统进化树结果显示，遗传距离最近的是水牛和牛，绵羊次之。在组成SERPINE2蛋白的氨基酸中，缬氨酸含量较高，占氨基酸总数的9.6%。SERPINE2蛋白是一种不稳定的亲水蛋白，SERPINE2有一个信号肽，没有跨膜结构域。SERPINE2蛋白的二级结构中，α-螺旋结构的占比最高，为41.56%。多个器官检测出SERPINE2 mRNA的表达，其中在卵巢的表达量显著高于其他器官，说明SERPINE2基因可能与卵巢生长发育有重大联系。     

CRISPR/Cas9系统敲除miRNA-182和miRNA-155的初步研究

CRISPR/cas9基因编辑系统可高效的实现目标基因靶向敲除,是当前基因功能研究的强有力工具。然而目前该系统主要针对编码蛋白质基因的靶向编辑,靶向非编码基因,尤其是miRNAs的基因少有报道。由于miRNA序列的简短性和多样性,从基因功能缺失的水平上研究其功能、成熟过程等还有一定的困难。我们基于CRISPR/cas9基因编辑系统,特异有效的敲除了HEK293T细胞中的miRNA-155和miRNA-182的种子区或发夹序列区,同时发现cas9与gRNA不同配比的转染剂量显著影响目标miRNA的敲除效率,其中cas9:gRNA的转染剂量在1:4时敲除效率最高。我们的研究阐明了CIRSPR/cas9系统在靶向敲除miRNAs基因的可行性,为研究miRNA在特定细胞中的生理学功能提供技术基础。