广西沼泽型母水牛发情淡季生殖激素的变化规律研究

[目的]研究发情淡季母水牛生殖激素的变化规律及各激素之间的相互关系。[方法]采用酶联免疫分析方法(ELISA)测定了发情淡季广西沼泽母水牛血样中促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、抑制素(INH)、雌二醇(E2)和孕酮(P4)的浓度变化,并结合B超技术检测了母水牛卵泡在发情周期中的变化。[结果]广西沼泽型母水牛血样中E2和P4浓度呈波动式变化。其中,E2分别在排卵后第13天d下降到基础水平。FSH在排卵后的第10天出现峰值;LH在排卵前2天出现峰值;INH在排卵后第4天出现峰值。各种激素之间存在相关性。FSH、LH和INH三者两两之间存在极显著相关性,INH与E2、P4存在显著相关性,E2与P4存在极显著相关性。[结论]该研究可为指导适时配种、提高广西本地沼泽型母水牛的繁殖力提供理论参考。     

影响猪体细胞核移植效果的因素

克隆技术的研究已经取得了丰硕的成果,但猪体细胞核移植还受到众多因素的制约,克隆效率仍然较低,文章针对猪体细胞核移植的各项技术环节及影响因素进行探讨与分析,以期加快猪体细胞核移植技术的研究,提高猪体细胞核移植效率,进一步促进猪体细胞核移植技术的发展和运用。     

影响意大利水牛精液品质的相关因素分析

本研究旨在通过对意大利水牛精液品质分析、睾丸周径测量、精浆中的氧化应激水平检测和精子活力相关基因表达情况来探究影响精液质量的相关因素。试验检测了6头意大利水牛精液的活力、畸形率、采精量,并在测量其阴囊周径后进行相关性分析;检测了意大利水牛精浆中氧化应激水平指标（丙二醛（MDA）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px））并进行了相关性分析;分析了意大利水牛精子β-微管蛋白-2c（TUBB2C）、外周致密纤维2（ODF2）、筑丝蛋白2（TEKT2）、筑丝蛋白4（TEKT4）基因的表达定量及相关性。结果显示,意大利水牛阴囊周径与精液产量、活力、畸形率之间相关系数分别为0.423（P>0.05）、0.750（P<0.01）、-0.827（P<0.01）,即阴囊周径与精子活力呈显著正相关关系、与畸形率呈显著负相关关系;意大利水牛精子活力与MDA、T-SOD、GSH-Px指标之间相关系数分别为-0.522（P<0.05）、0.333（P>0.05）、0.474（P<0.05）,即精子活力与MDA含量之间存在显著负相关关系,与GSH-Px活性之间存在显著正相关关系,与T-SOD活性相关性不显著;意大利水牛精子活力与TUBB2C、ODF2、TEKT2、TEKT4基因指标之间相关系数分别为0.930（P<0.01）、0.726（P<0.01）、0.924（P<0.01）、0.839（P<0.01）,即精子活力与以上基因表达量存在显著正相关关系。本研究结果为了解影响意大利水牛精液质量的因素提供参考,也为意大利种公水牛的筛选提供理论依据。     

影响猪卵母细胞体外成熟的一些物理性因素

对猪的研究是生物新技术中新的热点和经济增长点，猪的体外成熟是体外受精、性别控制、克隆及转基因等许多新技术成功与否的前提和关键，有许多物理方面的因素影响到猪的体外成熟。     

表儿茶素对小鼠卵母细胞mtDNA拷贝数和胚胎体外发育能力的影响

本研究旨在探究表儿茶素(epicatechin,EC)对小鼠体外成熟培养卵母细胞线粒体DNA(mtDNA)拷贝数及其随后孤雌激活胚胎发育能力的影响。小鼠卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在添加不同浓度EC(0、5、10、15、20μmol/L)的成熟液中体外成熟培养16h后,采用实时荧光定量PCR的方法检测卵母细胞mtDNA拷贝数;同时,通过对卵母细胞进行孤雌激活处理,探讨其后续胚胎的体外发育能力。实时荧光定量PCR分析结果显示,添加EC各处理组的卵母细胞mtDNA拷贝数均有所增加,其中,10、15μmol/L组的mtDNA拷贝数均显著高于0μmol/L对照组(P0.05);但10μmol/L组mtDNA拷贝数更接近自然排卵周期合子的mtDNA含量(P0.05)。体外培养观察结果发现,成熟液中添加10μmol/L EC能提高卵母细胞第一极体排出率,与对照组相比差异不显著(P0.05),但能显著提高卵母细胞孤雌激活后胚胎的囊胚发育率(P0.05)。综上表明,小鼠卵母细胞体外成熟液中添加10μmol/L EC可提高卵母细胞的mtDNA拷贝数,有利于促进卵母细胞后续的发育能力。     

兔精液冷冻保存的初步研究

以家兔为试验动物,从精液解冻后的精子活率和复苏率2个指标,分别对3种稀释液(1:T ris0.25 m o l/L 蔗糖0.1 m o l/L 柠檬酸钠83 mm o l/L 卵黄10% 二甲基亚砜(DM SO)15%;2:配方1 葡萄糖0.47 mm o l/L;3:T ris 0.29 m o l/L 葡萄糖0.71 mm o l/L 柠檬酸钠67 mm o l/L 卵黄20% 甘油4%)、两种抗冻剂(甘油4%、DM SO 15%)、4°C下平衡时间(30、60、120、180 m in)三个方面进行了比较试验。公兔采精用假阴道法,采精后立即检查精子活率,达0.60以上的供试验用。结果表明:(1)3种稀释液中,用稀释液2稀释的精液,精子解冻后活率和复苏率显著高于稀释液1和稀释液3(精子活率:0.153 vs 0.103、0.109;复苏率:0.205 vs 0.137、0.147,P<0.01),而稀释液1和稀释液3之间差异不显著(P>0.05);(2)在稀释液2中,分别用4%甘油和15%DM SO作防冻剂,两者的精子解冻后活率之间(0.193 vs 0.261,P<0.01),复苏率之间(0.250 vs 0.340,P<0.01)差异极显著;(3)在4°C下平衡30、60、120、180 m in,结果发现,在30~60 m in之间,解冻后精子活率之间(0.261 vs 0.249),复苏率之间(0.340 vs 0.325)差异均不显著(P>0.05),但是随着平衡时间(120~180 m in)的增加,精子活率明显降低,精子几乎死亡。结论:采用稀释液2的配方,在4°C下平衡30~60 m in,可获得较好的兔精液冷冻保存效果。     

不同来源的供体细胞对水牛体细胞核移植效果的影响

采用电融合方法,探讨不同来源的供体细胞对水牛核移植效果的影响。体外成熟培养22～24h的水牛卵母细胞,在含有5μg/mL细胞松弛素B的操作液中进行去核,然后将经0.1μg/mLAphidicolin(APD)+0.5%FBS培养2～9d的水牛不同来源的供体细胞,注射到去核的卵母细胞卵周隙中,电融合形成重构胚。重构胚经5μmol/L离子霉素激活处理5min,并在2mmol/L的6-DMAP中培养3h后,在含有颗粒细胞单层细胞的微滴中培养7～9d,观察其卵裂和胚胎发育情况。结果发现,来自水牛胎儿耳部或腹部组织块的成纤维细胞用作供体细胞,其重组胚的融合率及体外发育能力差异不显著(P>0.05),且细胞培养方法(组织块法或酶消化法)对其核移植效果没有影响;来自编号011010的胎儿耳皮成纤维细胞重组胚的囊胚发育率显著高于来自编号030323和030410细胞(31.45%vs10.96%和14.49%,P<0.05),但它们的融合率、卵裂率无显著差异(P>0.05)。以上结果表明:经不同培养方法培养的细胞或来自身体不同部位的组织的成纤维细胞均可作为核移植研究的供体细胞,但是水牛体细胞核移植效果受供体的个体差异的影响。     

荧光染色及紫外照射(UV)对黄牛孤雌和克隆胚胎早期发育的影响

探讨荧光染色及紫外照射对牛孤雌和克隆胚胎体外发育的影响。结果发现，1／4倍UV照射20、30、40S的卵母细胞孤雌激活后囊胚发育率都极显著低于UV照射0S和10s组；以1、1／4、1／8、1／32倍的UV强度照射黄牛卵母细胞20S，其中1／4倍UV照射组的分裂率与1／8、1／32倍UV照射组无显著差异，但囊胚率间差异显著。以1倍UV强度照射组的分裂率与囊胚率均显著低于1／8、1／32倍UV强度照射组；观察培养24h后原核形成情况，发现1倍UV强度照射组原核形成也显著滞后于其它处理组；比较1、1／8倍UV强度照射引导去核胞质构建的重组胚体外早期发育情况，发现1倍UV强度照射引导去核胞质重组胚的卵裂率及囊胚率极显著低于1／8倍UV照射强度引导去核胞质组。以上结果表明：1／4倍UV强度照射黄牛卵母细胞时间大于20s，显著降低其孤雌激活后的卵裂和体外发育潜力；1、1／4倍UV照射强度可阻滞原核形成，降低UV照射强度可提高胚胎孤雌发育率；1／8倍UV照射强度可用于引导去核操作。     

EGF对牛卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响

在卵母细胞体外成熟液(含FSH)中分别添加10,30,50ng/ml表皮生长因子(EGF),24h后检查成熟率,并进行孤雌激活。结果表明:添加10ng/ml、30ng/mlEGF组牛卵母细胞成熟率较对照组(未添加EGF)无显著差异(79.8%vs71.5%vs70.4%,p>0.05),但EGF添加至50ng/ml时牛卵母细胞第一极体排出率显著提高,达85.4%(P<0.01);在实验1的基础上,比较培养液中添加10ng/ml、30ng/ml、50ng/mlEGF对牛孤雌激活胚胎体外发育的影响,结果发现在培养液中添加EGF并不能显著提高牛卵母细胞体外孤雌发育囊胚率(P>0.05),但可显著提高其囊胚孵化率(P<0.01)。