新型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank中已发表的1型鸭病毒性肝炎(duck hepatitis virus type 1,DHV-1)和新型鸭病毒性肝炎(new type duck hepatitis virus,N-DHV)全基因序列,在非同源区域设计一对新型鸭病毒性肝炎特异性引物P1/P2,对鸭病毒性肝炎病毒、鸭瘟病毒、鹅细小病毒细胞毒、流感病毒等鸭常见病病原进行RT-PCR扩增.结果表明引物特异性良好,引物P1/P2仅能特异性扩增出N-DHV的638bp基因片段;敏感性试验结果表明:N-DHV RNA最低检出量为21 pg.同时对临床样品的检测中发现DHV-1和N-DHV存在混合感染的情况.该方法的建立为鸭病毒性肝炎病毒尤其是新型鸭病毒性肝炎病毒的鉴定及快速诊断提供了可靠的依据.     

新兴猪IL-18成熟蛋白基因的克隆与序列分析

根据GenBank上登录的猪白细胞介素18(pIL-18)基因序列，设计了1对特异引物。利用RT-PCR对从3周龄新兴仔猪脾细胞中提取的总RNA进行了扩增，获得了约500bp的片段。将该片段克隆、鉴定、测序，证实已获得了新兴猪IL-18成熟蛋白基因片段，其大小为474bp，编码157个氨基酸，与GenBank上登录的猪IL-18成熟蛋白基因序列完全一致。     

猪IL-18基因的原核表达及重组蛋白的纯化

以pcDNA3．1-pIL-18为模板，采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18（IL-18）的成熟蛋白基因，通过KpnⅠ＋SacⅠ双酶切及连接反应，构建了pET32c—pIL—18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实，重组质粒中的基因片段连接正确。之后，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），于37℃、1．0mmol／L IPTG条件下诱导表达。菌体裂解产物经SDS—PAGE分析，在分子质量约为33ku处出现了预期的目的蛋白。用8mol／L脲对表达产物变性，经Ni^2＋NTA柱纯化，透析复性，得到了纯化的IL-18蛋白。Western—blot分析证实，纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性。上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础。     

鸡白介素18基因原核表达质粒构建

根据已发表的江西土鸡白介素 -1 8(Ch IL-1 8) c DNA编码基因序列设计引物 ,用PCR技术从 p MDCh IL-1 8质粒扩增出编码鸡IL-1 8成熟蛋白基因 ,重组于 p BV2 2 0表达载体上 ,将重组质粒转化大肠杆菌 JM1 0 9(DE3 ) ,转化子经温度诱导的表达产物 ,SDS-PAGE电泳鉴定约 2万 ,N端开头 1 5个氨基酸序列测定分析 ,证明获得了鸡 IL-1 8成熟蛋白 ,为今后深入研究鸡 IL -1 8的生物学特性及其临床应用打下了基础     

一株鸭副粘病毒的分离与鉴定

2009年3月,广东省某番鸭场暴发疑似副粘病毒（AP—MV）病。临床症状主要表现为：咳嗽、呼吸困难,并引发产蛋明显下降症状。解剖显著病变主要在肠道,在十二指肠、卵黄蒂附近有枣核状溃疡和出血,盲肠之间的回肠淋巴结有枣核状隆起出血,小肠粘膜有弥漫性出血,有典型的卵黄性腹膜炎症状,腺胃与肌胃交界处偶有出血带,呼吸道气管内粘液增多或者轻微出血,初步诊断为鸭副粘病毒病。     

猪白细胞介素-18基因表达及重组蛋白的纯化

以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18。将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。SDS-PAGE及W estern-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33 ku,与预期大小相符。将包涵体提取物用8 mol/L脲变性,经N i-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。     

野猪在家猪品种改良中的作用

野猪是野生动物资源的重要成员,对于维持生物多样性、维持生态平衡具有重要作用。品种保护必须与开发利用结合才能更好的得以实施,实现产业化保护式的开发利用模式,在保种的同时进行研发利用。在保护中探求利用的途径,在利用同时探索保护的最佳方法,合理的利用野生动物,会对扩大野生动物种质资源以及保护产生积极的影响。     

猪轮状病毒病的流行病学及防控进展

猪轮状病毒病是猪感染轮状病毒引发的急性肠道传染性疾病,在猪生产养殖中较为普遍流行,特别是规模化养殖场中易发。感染后的猪只临床表现为不同程度的腹泻、呕吐、食欲不振、精神不佳,随着病情的发展,还会出现严重的脱水,然后衰竭死亡。该病严重威胁着猪只的健康生长,对养猪业造成较大的经济损失。本文介绍了猪轮状病毒病的流行病学、临床症状及防治措施,以期为该病的预防与治疗提供参考。     

种番鸭副黏病毒的生物学特性研究

从广东某番鸭种鸭场全场有明显呼吸道症状和产蛋下降,而无其他典型鸭副黏病毒病症状的种番鸭群中分离到1株副黏病毒(命名为DP0690)。经过鉴定,该分离株具有血凝性,可被新城疫病毒(NDV)标准阳性血清所抑制,不能被禽流感病毒(AIVH5与H9亚型)阳性血清和减蛋综合征病毒(EDSV)标准阳性血清抑制;RT-PCR检测为NDV阳性;对F基因进行部分测序和分析表明F基因的裂解位点序列为112R-R-Q-R-R-F117;动物回归实验表明:该分离毒株对5日龄SPF雏鸡和雏番鸭能100%致死;对开产母鸭能复制出相同的病例,表明该病毒属强毒力毒株。     

几种芸香科植物花粉形态观察

应用扫描电子显微镜对佛手、代代、柚、柑橘和金橘等芸香科植物花粉进行形态观察。发现这几种植物的花粉在形态、大小、外壁纹饰、网孔等方面均有差异,其中3个佛手品种的花粉具网状纹饰,白衣秀士佛手和青衣童子佛手的网脊连续,而赤金王子佛手的网脊不连续,其他4种芸香科花粉具穴状纹饰,代代和柚的花粉比柑橘和金橘的花粉大,而代代和金橘的花粉表面孔穴密度比柚和柑橘的花粉表面孔穴密度大。这些花粉表面微观形态的差异将为上述品种鉴定提供依据。