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为分析miR-15a在肉鸡不同组织中的表达情况,并探究过表达miR-15a对体外培养鸡软骨细胞的影响。本研究首先通过倒置显微镜观察、PCR、凝胶电泳和甲苯胺蓝染色对体外分离培养的软骨细胞进行鉴定。通过实时荧光定量PCR检测miR-15a在肢体内外翻畸形(valgus-varus deformity, VVD)组和健康组肉鸡中(各3只)各组织的表达量。之后通过CCK8和EDU方法分析软骨细胞过表达miR-15a后细胞增殖情况。软骨细胞转染miR-15a mimics后,通过qPCR检测软骨细胞的标志基因Collagen-2、Aggrecan、Collagen-10,成熟分化基因Runx2、Sox9、VEGF、MMP9,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β3以及凋亡基因Fas、FasL、Bcl-2的表达量。并构建FKBP5 3'UTR的野生型载体和突变型载体,通过双荧光素酶检测报告检测miR-15a与FKBP5的靶向关系。结果表明,本研究所用的胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法成功分离得到状态良好的软骨细胞。荧光定量结果显示,miR-15a在各组织中均有表达,与健康组相比,miR-15a在VVD组的肝(P < 0.01)、脾(P < 0.05)、胸腺(P < 0.01)中的表达量显著升高,在心和胸肌组织中的表达量显著降低(P < 0.01)。CCK8与EDU分析结果显示,与NC组相比,过表达miR-15a组软骨细胞增殖速度显著降低(P < 0.01),增殖细胞数量显著减少(P < 0.01)。qPCR结果显示,与mimics NC组相比,miR-15a mimics组的软骨细胞标志基因Aggrecan、成熟分化基因Sox9、Runx2表达量显著降低(P < 0.05),Fas基因表达量极显著上升(P < 0.01),FasL基因和抗凋亡基因Bcl-2极显著下降(P < 0.01)。成功构建了FKBP5 3'UTR野生型和突变型载体,双荧光素酶检测报告结果显示预测的靶基因FKBP5与miR-15a没有靶向关系。本研究成功分离并鉴定了鸡软骨细胞,过表达miR-15a抑制鸡软骨细胞增殖、成熟和分化并促进细胞凋亡。 相似文献
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田建民 《畜牧兽医科技信息》2007,(2):77
1疾病特点鸡支原体病是鸡和火鸡的一种慢性呼吸道传染病,其特征是病鸡喘气、咳嗽、窦部肿胀、流鼻涕、呼吸罗音,病情发展缓慢,病程较长,在鸡群中长期蔓延,给养鸡业造成重大损失。2病原鸡败血支原体,革兰氏染色呈弱阳性,用姬姆萨染色着色较好,一般呈现球杆状,大小约0.25~0.5μm 相似文献
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孵化率的高低,直接决定该批雏鸡的健康发育及其以后的生产性能,孵化率高,说明其上代无论体质、营养状况,还是生产性能等方面都占有优势;孵化率的高低,在一定程度上也决定着饲养户的经济效益,因此,提高孵化率应从以下几方面着手。 相似文献
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中草药中富含多种天然的营养及药物成分,在为肉牛提供营养成分促进生长及防治疾病等方面均具有一定的作用.本文总结了中草药在肉牛养殖中的应用作用,以期为肉牛养殖户提供参考. 相似文献
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1花生粕花生粕是粗蛋白质含量高于豆粕的饼粕,适口性好,因此一般认为它是代替豆粕的好饼粕,甚至有的养殖户专门买花生粕喂猪,有的还用花生米磨糊煮粥给乳猪补料。花生粕的赖氨酸和蛋氨酸含量都很低,精氨酸含量又高,因此用它喂生长猪或肉仔猪都增重不快。用花生粕代替豆粕后肉仔鸡生长停滞,体小翅长,养殖户戏称为‘穿大褂’。赖氨酸和蛋氨酸是畜禽生长最重要的两种必需氨基酸,如果用花生粕来代替豆粕,就必需添加这两种氨基酸而且要添加到应有的数量。用花生粕代替豆粕时赖氨酸的添加量是不能减少的。花生粕也含有抗营养因子,也要加热处理。花… 相似文献
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