深度测序发现贵阳发生的辣椒病毒病由多种病毒复合侵染所致

2016年9月贵州省贵阳市发生严重的辣椒病毒病,症状复杂,主要表现为植株矮化,叶片黄化、花叶、皱缩、畸形以及枯死斑,果实有坏死斑等,根据症状难以判断病毒种类。本文采用小RNA深度测序技术对田间自然发病的2株辣椒标样进行了毒源鉴定,发现样品1由蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus2,BBWV2)、辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和辣椒内源RNA病毒(Bell pepper endornavirus,BPEV)4种病原复合侵染;样品2中除鉴定到上述4种病毒外,还检测到马铃薯Y病毒(Potato virusY,PVY)。进一步通过反转录PCR(RT-PCR)对深度测序结果进行了验证,证明其准确可靠。其中4个辣椒标样中均有的辣椒内源RNA病毒(BPEV)为贵州省首次报道。多种病毒复合侵染是辣椒产量和品质的重要限制因素之一,是辣椒生产的主要威胁。     

黄淮麦区18个小麦品种抗白粉病基因的推导

 根据15个已知毒性基因的小麦白粉菌株与黄淮麦区种植的18个麦品种相互作用产生的侵染型资料，按生物间遗传学方法推导了这些品种具有的抗白粉基因。结果表明，徐州21、豫麦13和百农3217不含任何抗性基因；豫麦15具有Pm2+Pm1基因；花培28具有Pm2基因；豫麦17和郑州831具有Pm2+6基因；豫麦9号具有Pm8基因；西安9号、豫麦16、陕农7859、豫麦2号、西安8号、冀5481、豫麦10号、皖7107、豫麦7号和百泉3039等10个品种不含供试的已知抗白粉基因。另外，按内部相关法分析了它们可能具有的抗病基因数目。     

用接合转移方法构建杀虫防病荧光假单胞菌

以经过改造的含有转座子Ｔｎ５的自杀质粒ｐＳＵＰ２０２１为载体，通过接合转移将苏云金杆菌杀虫蛋白基因ｃｒｙ Ｉ Ａ（ｃ）片段插入生防细菌荧光假单胞菌Ｐ３０３菌株染色体组。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析分别证实杀虫基因的导入和杀虫蛋白的表达。室内生物测定结果表明新构建的ＰＴ２１０、ＰＴ２１２等荧光假单胞菌工程菌菌株不仅保持了野生型自然菌株对小麦全蚀病良好的抑菌活性，而且表现出对小菜蛾和玉米暝     

美洲商陆抗病毒蛋白真核表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达

摘要：从美洲商陆（Phytolacca americana）叶片中通过异硫氰酸胍法提取出了总RNA,经RT-PCR扩增出缺失突变型抗病毒蛋白PAP基因,将该基因克隆于分泌型真核表达载体pPIC9K,然后导入毕赤酵母(Pachia pastoris )菌株GS115细胞。在甲醇的诱导下,经过酵母高密度发酵进行PAP的表达,经SDS-PAGE分析。结果表明,在培养基上清液中含有一明显的特异性蛋白条带,大小为34 kD,经Western-blotting分析,该蛋白与法国PAP抗血清有特异性反应,体外活性检测表明该蛋白对病毒的侵染性具有高度的抑制性,表明该基因在毕赤酵母GS115中得到了表达。     

小麦品种(系)与小麦白粉菌的相互作用——Ⅰ.小麦白粉菌毒力频率和毒性基因的研究

1985—1987年在温室条件下,采自河南省不同地区的小麦白粉菌群体,对本省当前推广的小麦品种的毒为频率均大于76.55%;区试品种(系)中的花培28和周80—48的毒力频率分别为6.25%和8.75%,抗性较好.利用联合致病性分析,确定了花培28与百泉792、郑州7920和周80—48是今后适于推广的品种组合.研究初步证明豫东、西、南部的小麦白粉菌群体结构基本相似.毒性基因V_1、V_(3b)、V_(3c)、V_5和V_9的平均频率较高(66.67—82.76%),V_2、V_(2x)、V_4、V_(4(+))和V_8的平均频率低(7.06—13.38%).并讨论了小麦品种的合理布局和抗源利用等问题.     

高品质棉花新品种高产示范试验

高品质棉花新品种高产示范试验结果表明,科棉6号(大铃型)在不同方式栽培条件下,均表现出铃大、衣分高、产量达到高产及超高产的水平,通过套栽方式,该品种表现早发稳长、高产尤为突出,虽然抗病性较差,但通过有效补救措施的落实,恢复生长快,结铃期较长,后期不早衰。在麦后与水浮育苗栽培情况下,晚秋桃较多。旭杂2号(抗病)品种主要表现抗病性强,生长势头弱,产量不稳定。因此,科棉6号(大铃型)适宜进行套栽栽培方式,有利发挥其增产潜力;旭杂2号(抗病)应加强中后期培管,重点增加第1次花铃肥施用量,增施磷、钾肥,普施盖顶肥,确保后期不早衰,达到高产的目的。     

一种制备大量高效价多克隆腹水的改良方法

因可用的抗原量有限而要获得大量多克隆抗血清通常是困难的，所以曾用小啮齿动物生产抗血清，但产量很少，为了解决这些问题，我们设计了一种生产多克隆腹水的改进方法，选用合适品系的小鼠和佐剂，注射１－１００μｇ蛋白后得到高效价血清，接着腹腔注射合适的瘤细胞，即可获得１３－１９ｍｌ／只高效价（１：１０００－１：２０００）的多克隆腹水，试用９种不同抗原均得到相似的结果。     

一种测定水稻白叶枯菌基因组中插入序列IS1112拷贝数的定量PCR方法

建立了以标准质粒为基础的测定水稻白叶枯基因组中插入序列IS1112拷贝数的TaqMan实时荧光定量PCR方法。通过重叠PCR方法扩增了由16S rDNA基因与插入序列IS1112的部分片段组成的重组片段,连接到载体pMD18-T上,构建了标准质粒。利用该标准质粒建立的定量方法测定了我国12种白叶枯菌株基因组中IS1112的拷贝数。     

毕赤酵母Mut+和Muts重组子表达美洲商陆抗病毒蛋白基因的比较

 将N末端信号肽和C末端毒性区域缺失突变的美洲商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral protein,PAP)基因表达载体pPIC9KP酶切线性化后,通过电击转化整合到巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris) GS115菌株细胞中,PCR筛选出表型为利用甲醇快速型(Mut⁺)的重组子。在相同培养条件下比较Mut⁺重组子和利用甲醇缓慢型(Mut^s)重组子在表达缺失突变型PAP方面的异同。结果表明,诱导培养48 h后,Mut⁺重组子表达产物在SDS-PAGE胶上可见清晰目的带,而Mut^s重组子培养72 h才能见到微弱的目的带。抗病毒活性实验表明Mut⁺重组子和Mut^s重组子的表达产物均对TMV病毒侵染有明显的抑制作用,它们的抗病毒活性没有显著的差异。     

商陆抗病毒蛋白基因的克隆、序列分析及在原核中的表达

从美洲商陆（Phytolacca americana）叶片中通过异硫氰酸胍法提取出了完整的总RNA,经RT－PCR扩增出缺失突变型PAP基因,将该基因与克隆载体pGEM(r)-T相连接,从SP6和T7两端同时对其进行序列测定,共测得711个碱基,与国外报道的PAP基因序列相比较,其同源性达99．6％。同时将该基因克隆至原核表达载体pET-5a上,转化大肠杆菌菌株BL21（DE3）－plysS,在0.4mmol/L IPTG的诱导下表达,经SDS－PAGE分析表明,该基因在大肠杆菌中得到了特异性表达,表达蛋白大小为26ku,与预期值相符。Western blotting分析发现该表达蛋白与法国PAP抗血清有特异反应。琼脂双扩散免疫沉淀法鉴定发现表达蛋白与其自己的抗血清及法国的PAP抗血清均能形成免疫沉淀线,且这两条沉淀线在相交处呈融合状态,说明原核表达的该蛋白与法国从商陆叶片中提取出的PAP具有高度的同源性,也说明本试验准确克隆到了PAP基因且在大肠杆菌中得到了表达。