产低温碱性蛋白酶黄海黄杆菌YS-9412-130高产菌株的选育

以黄海黄杆菌YS－9412－130菌株为出发株,经亚硝基胍、硫酸二乙酯、紫外线（UV）与微波（MI）复合诱变和自然选育,获得1株产低温碱性蛋白酶高产稳定的突变株YS－9412－130－SW1－104,其产低温碱性蛋白酶为出发株的16倍。在摇瓶发酵培养条件下,酶活力达2320U／ml(20℃测定）,该诱变株具有Ref^r、Str^r、Amp^r和Met^-、Lys^-标记。突变株与出发菌株在细胞形态上比较,结果表明二者没有显著差异。     

海洋酶法利用海产品下脚料制取活性胶原肽的研究

以富含胶原成分的海产品下脚料为原料,经脱除杂蛋白、脂肪后,用海洋碱性蛋白酶水解,以Feton法检测水解产物的羟自由基清除率,提取具有抗氧化活性的胶原肽。通过温度T(℃),pH值,酶料比([E]∶[S]),料水比([S]∶[W]),时间(min)单因素实验,选取合理水平,做L18(37)正交实验,最终优化得到最佳提取条件为:温度45℃、酶料比1∶150、pH8·0、料水比1∶4、反应30min,所得胶原肽的羟自由基清除率为60·42%。与同浓度Vc、谷胱甘肽(GSH)相比,均具有较高的抗氧化活性,有着良好的开发应用前景。     

海洋微生物酶反应器智能控制系统的研制

生物发酵过程具有严重非线性、高度时变性、高阶多变量和大型不确定的特点,为了实现生物发酵过程的自动化控制,提高生物技术产品的生产水平,使得发酵过程的参数检测、操作监视、自动控制等智能化,分析了影响发酵过程的主要因素以及各变量之间的耦合关系,综合应用传统的PID控制方法、模糊神经网络技术,构建了一种多变量模糊神经控制系统的前馈解耦算法并将其应用在发酵过程的思想,同时采用了冷凝、回收、利用发酵尾气技术,解决了尾气排放、罐体泄漏染菌的问题。模糊神经控制器和解耦部分独立设计,在模糊控制器中引入神经网络,解耦网络采用一层隐层,利用简化的学习算法,根据系统输出误差,在线调整网络权值,从而实现动态解耦而无需辨识被控对象的模型。该方法结构简单且计算量小,经实际应用结果表明这种控制算法具有很好的控制效果。     

海洋低温碱性蛋白酶的遗传毒理学研究

应用NIH纯系小鼠骨髓细胞微核试验和染色体畸变试验,探究海洋低温碱性蛋白酶的遗传毒性作用及对人类的潜在危害。观察并计数嗜多染红细胞（PCE)与正红细胞（NRBC）的比值、微核率;染色体的畸变类型和畸变率,检测海洋低温碱性蛋白酶的诱变作用。结果表明,皮下注射环磷酰胺的小鼠,P／N比值＜1,微核率为22.97‰,染色体畸变率为18.32,与生理盐水（NS）对照组比较差异极显著（P＜0.01),而海洋低温碱性蛋白酶各组小鼠微核率均＜4‰,染色体畸变率为0.19%-0.25%,与NS组比较无显著性差异（P＞0.05）。未见海洋低温碱性蛋白酶各组对小鼠骨髓细胞的遗传毒性。     

海洋微生物溶菌酶体外抗菌抗病毒活性研究

 【目的】初步研究海洋微生物溶菌酶S-12-86（MMLS）体外抑菌与抗病毒活性。【方法】采用最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度法（MBC）测定MMLS对部分模式菌的抑菌和杀菌作用；通过细胞病变抑制实验法（CPE），研究MMLS在猪肾细胞（PK-15）中对伪狂犬病毒（PRV）的抑制作用。【结果】MMLS对革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌及真菌均有抑菌作用，抑菌作用的浓度范围在0.25～4.00 mg•ml-1之间，杀菌作用的浓度范围一般在0.25～8.00 mg•ml-1之间。在电镜下，可见MMLS能够使大部分白色念珠球菌的细胞壁出现严重变形，细胞质出现不均匀，细菌胞质中的空腔增多。MMLS的TC50为100.0 µg•ml-1，抑制伪狂犬病毒的半数有效浓度（EC50）为0.46 µg•ml-1，治疗指数（TI）为217；在病毒感染后的0、2、4、6和8 h添加MMLS，均有抑制伪狂犬病毒的作用。【结论】MMLS具有广谱的抑菌作用和抗伪狂犬病毒作用。     

黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶活性必需基团分析

用化学修饰法结合酶的紫外吸收光谱变化研究黄海黄杆菌YS－9412－130分泌的海洋低温蛋白酶的功能基团性质，结果表明，羟基、咪唑基、ε－氨基及胍基均与酶活性有关，而羟基、巯基与酶活性无关。酶的性质与丝氨酸蛋白酶有很大的相似性。     

产酯酶海洋微生物的筛选、鉴定及系统发育分析

通过以三丁酸甘油酯和α-乙酸萘酯为底物,建立了一种快速、准确的酯酶产生菌的筛选方法,并从样品中分离到 1 株产酯酶活力和稳定性较高的菌株 EB-1,对其进行了形态学、生理生化特征鉴定和 16S rDNA 序列分析.结果表明,该菌株与Bacillus subtilis subsp. subtilis 模式菌株的同源性高达 99.79%;又根据其产黑色素这一特性,最终将其确定为Bacillus subtilis var. niger,其 16S rDNA 序列在 GenBank 的注册号为 EU016526.     

81.3%2,4-滴·嗪草酮·乙草胺乳油防除玉米田杂草效果试验

为验证81.3%2,4-滴·嗪草酮·乙草胺乳油在玉米田的施用效果及其安全性,进行了田间药效试验.试验结果表明:81.3%2,4-滴·嗪草酮·乙草胺乳油对玉米生长发育无明显影响,并能有效防除5种玉米田间杂草;推荐用药量为180～320mL/667m2.     

海洋低温碱性蛋白酶的皮肤变态反应研究

利用酶工程技术制得的海洋低温碱性蛋白酶,主要用于加酶的洗涤剂,在室温下有较高的酶活力。为确保海洋低温碱性蛋白酶使用的安全性,并为其应用提供实验依据,本文以豚鼠为受试动物,进行皮肤致敏反应试验。结果表明,经致接触和激发接触,2,4－二硝基氯苯组（DNCB）皮肤最大平均反应值为3.3,致敏率为100％。海洋低温碱性蛋白酶组皮肤最大平均反应值为0.05,致敏率为5％。提示海洋低温碱性蛋白酶为弱致敏物。