‘砀山酥梨’实时荧光定量PCR内参基因的筛选

对'砀山酥梨'不同组织器官及不同非生物胁迫条件下叶片中可以稳定表达的内参基因进行筛选,为后续荧光定量PCR试验提供参考基因。分别对生长45 d的'砀山酥梨'嫁接苗进行低温、高温和盐胁迫处理,采集不同处理时间的叶片;还分别采集'砀山酥梨'4个果实发育时期的果肉(分别为花后32、65、99、143d)、叶片、成熟果皮、花粉、花柱共26个样品。利用实时荧光定量PCR技术对4个传统内参基因:β微管蛋白基因(TUB)、多聚泛素酶基因(UBQ)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH)和转录延伸因子基因(EF1α),以及通过转录组数据筛选出来的3个新内参基因Cytochrome b561(CyB)、WD-repeat protein(WDP)和mRNA capping enzyme(mRCE),共计7个内参基因在26个样品中的表达差异情况进行测定。结果表明:通过geNorm、NormFinder和Bestkeeper 3个软件对其表达稳定性进行分析,最终筛选出在不同组织及非生物胁迫条件下稳定表达的最优内参基因。UBQ在高温和盐胁迫处理的'砀山酥梨'叶片中表达最稳定,可作为优选内参基因;在低温胁迫处理下,TUB和WDP在'砀山酥梨'叶片中表达较稳定,可作优选内参基因;WDP在'砀山酥梨'不同组织器官中表达最稳定。不同内参基因在同一物种不同组织及胁迫处理条件下表达稳定性具有较大差异,在进行荧光定量PCR试验时,应根据具体的试验材料和方法选择最优内参基因。     

外源褪黑素处理对常温货架期梨果实贮藏品质的影响

【目的】明确褪黑素处理对采后常温货架期梨果实贮藏品质的影响。【方法】以新梨7号果实为试材,设置50、100、150、200、250μmol·L^-15个褪黑素浓度梯度处理,以清水处理为对照,测定了常温货架期果实失重率、硬度、可溶性固形物含量、乙烯释放速率、香气物质种类和含量等指标。【结果】从处理后5、10、15和20 d的测定结果可以看出,与对照相比,褪黑素处理减少了梨果实内水分的消耗,果实的失重率升高的幅度小,果实硬度较高,150μmol·L^-1褪黑素处理失重率和果实硬度与对照差异达显著水平;褪黑素处理能够使新梨7号果实的可溶性固形物含量稳定,处理20 d时,不同浓度褪黑素处理可溶性固形物含量显著高于对照;褪黑素处理新梨7号果实的乙烯释放速率均低于对照,以150μmol·L^-1褪黑素处理最低,较对照减少了87.05%,差异显著;不同浓度褪黑素处理对新梨7号果实香气物质种类和含量存在差异,褪黑素处理能调节果实香气种类和含量。【结论】外源褪黑素处理可延缓新梨7号梨果实失水,保持果实硬度和可溶性固形物含量,减少乙烯释放。适宜浓度褪黑素处理可调节香气物质的种类和含量,保证常温货架期贮藏品质,综合认为,150μmol·L^-1浓度褪黑素处理能够有效延缓梨果实的衰老,处理效果最好。     

12个梨品种S基因型的鉴定

应用PCR扩增技术, 根据目的S基因与GenBank中已知S 基因同源性100%原理鉴定了我国育成的12个梨品种的S基因型, 分别是: ‘红酥脆’为S₄S₃₆ , ‘新梨7号’为S₂₈S_d , ‘金水3号’为S₅S₂₉ , ‘八月酥’为S₃S₁₆ , ‘金水1号’为S₃S₂₉ , ‘龙泉酥’为S₃S₂₂ , ‘雪花’为S₄S₁₆ , ‘雪芳’为S₄S₁₆ ,‘雅青’为S₄S₃₄ , ‘新雅’为S₄S₃₄ , ‘德胜香’为S₃S₂₉ , ‘富源黄’为S₁₆S₃₃。通过对S基因的DNA序列分析, 确认S₁₆、S₃₁为同一S基因。本研究结果丰富了我国梨品种的S基因型信息, 为田间合理配置授粉品种提供了依据。     

桃自交亲和性的分子机制及遗传特性研究

 以油桃（Prunus persicavar.necturina）‘中油5号’及其自交后代为试材,利用花柱S-RNase基因和花粉SFB基因的特异性引物进行PCR扩增,对扩增片段进行回收、克隆、测序和Blast分析,确定了‘中油5号’的自交不亲和基因型为S₁S_2(m)。序列分析结果显示,‘中油5号’桃S₁-RNase和S_2(m)-RNase与多个其他李属S-RNase基因氨基酸和核苷酸序列间都具有极高的相似性,SFB₁和SFB₂基因与多个其他李属SFB基因氨基酸和核苷酸序列间也都具有极高的相似性。进一步对‘中油5号’自交后代个体的S基因型进行检测,发现后代群体中存在3种S基因型,分别为S₁S₁、S₁S_2(m)和S_2(m)S_2(m),且分离比为8︰13︰7,与预期的比例1︰2︰1差异不显著（χ² = 0.214 < χ²_0.05,2 = 5.991）,说明S-RNase基因和SFB基因都遵循两因素的孟德尔遗传规律进行连锁分离。此外,基因型为S₁S₁和S_2(m)S_2(m)的纯合体的存在,表明桃花粉SFB₁和SFB₂基因均不能被自身花柱S-RNase所识别,这是由于SFB₁和SFB₂基因翻译提前终止所造成的,从而使‘中油5号’表现出自交亲和性。     

丰水梨棚架与疏散分层冠层结构特点及产量品质的比较

以丰水梨棚架形与疏散分层形树形为试材,应用WinSCANOPY2005a冠层分析仪比较研究了两种树形的冠层结构特点、产量、品质差异及其相关性,结果表明：棚架形平均叶倾角、冠层开度,冠下直射、散射及总光量子通量密度显著或极显著高于疏散分层形,而叶面积系数极显著低于疏散分层形。棚架形梨果实单果质量、可溶性固形物、可溶性糖、糖酸比显著高于疏散分层形,分别高出23.59%、9.70%、11.25% 和29.08%,而产量、可滴定酸和石细胞含量均显著低于疏散分层形,分别低17.80%、13.45% 和30.43%。棚架形树冠不同部位梨果实品质一致性优于疏层分层形,冠层开度大、冠层总光量子通量密度高、结果枝条粗壮是棚架梨品质优的主要原因,而枝条总体积和叶面积系数小可能是棚架形梨产量偏低的直接原因。冠层特征参数与产量、品质指标存在显著相关性,其中冠层开度与可溶性固形物极显著正相关 (r = 0.9820**),与可滴定酸呈极显著负相关 ( r = - 0.9485**)。冠层分析仪的应用可望成为梨树形研究的新方法。     

不同果袋对砀山酥梨果实品质的影响

选用了18种不同果袋对砀山酥梨果实进行套袋试验,结果表明,套袋后砀山酥梨果实的硬度、可滴定酸含量比对照显著增大;可溶性固形物、可溶性总糖含量以及单果重均显著降低,平均比对照分别降低10.57%,11.74%,27.96%;套袋梨果的石细胞含量比对照降低10%～52.7%;套三层果袋的果实内在品质比套双层果袋和单层果袋果实的内在品质降低更显著;套袋对果实光洁度和果点等外观品质明显改善,三层果袋和双层果袋效果显著优于单层果袋。     

梨分子遗传连锁图构建及重要农艺性状定位

梨分子遗传连锁图谱的构建始于21世纪初,构建高密度的分子遗传图谱将有助于提高梨的分子育种水平。我们就目前国内外梨分子遗传连锁图谱的构建及其在抗病虫、果实性状及树形性状的基因定位和QTL定位,包括其在梨和苹果比较作图研究中的应用等方面进行简要阐述,指出了梨分子遗传图谱构建中存在的图谱密度较低和作图群体偏小等问题。梨育种工作者在今后的梨分子遗传图谱构建工作中,应注意适当扩大作图群体,充分利用蔷薇科基因组数据开发共显性标记,提高图谱标记密度,从而为标记辅助育种和重要农艺性状基因的图位克隆奠定基础。     

疏果对梨果实糖积累及叶片光合特性的影响

 以‘丰水’梨为材料,研究不同疏果程度和疏果时期对果实糖积累及源叶光合特性的影响,结果表明：随着疏果程度增加,果实单果质量、可溶性总糖含量均显著提高,重度疏果、中度疏果与不疏果（对照）相比,单果质量分别增加172.5%和95.9%,可溶性总糖含量分别增加31.8%和20.7%。疏果对可溶性总糖组分的影响主要是增加蔗糖和山梨醇含量;重度疏果、中度疏果与不疏果（对照）相比,蔗糖含量分别增加134.8%和91.5%,山梨醇含量增加53.2%和26.7%,葡萄糖含量减少45.0%和22.7%。不同时期疏果与不同疏果程度相似,表现为疏果早的果形大,蔗糖和山梨醇含量高,花后90 d重度疏果仍能提高果实糖积累水平。花后80 d不疏果的叶片净光合速率最高,而花后110 d则相反,重度疏果的处理最高。花后110 d不疏果果台副梢叶片的叶绿体嗜锇颗粒增多,片层结构模糊,说明不疏果植株叶片在后期光合速率下降与叶绿体结构改变及其衰老有关。     

一种提取梨组织高质量基因组DNA的新方法

高质量DNA的提取是开展分子生物学研究的重要环节。针对梨组织中含有大量多糖、多酚等影响DNA提取质量的次生代谢产物的特点,本研究以梨叶片、果皮和果肉为材料,开发了一种新的基因组DNA提取方法——N-月桂酰肌氨酸钠法,并分别与常用的试剂盒及CTAB法进行比较分析。对三种方法提取DNA的总量、浓度及OD值等进行检测分析,结果表明：相比试剂盒及CTAB法,N-月桂酰肌氨酸钠法不需水浴加热,步骤少,操作简单,提取的DNA纯度、浓度均有较大提高,并且适用于大片段DNA的提取。因此,N-月桂酰肌氨酸钠法是一种可靠的高效获得梨基因组高质量DNA的新方法。