奶牛结核分支杆菌临床分离株耐药性表型检测

结核分支杆菌标准药敏试验是用L-J或Middlebrook7H10培养基进行直接或间接药敏试验,但出现结果需6～8周.BACTECTB-460放射性液体培养基检测法[1]、MTT法[2]、流式细胞仪测定[3]被用来检测结核杆菌的耐药性,但由于设备和试剂限制了方法的推广.     

荒漠植物柠条根瘤菌的抗逆性及其系统发育分析

对分离自宁夏白芨滩国家级自然保护区的62株柠条根瘤菌的耐盐性、耐酸碱性、生长温度范围和抗生素抗性进行了测定,并采用16S rDNA PCR-RFLP和16S rDNA全序列分析方法对其进行了遗传多样性及系统发育分析.结果表明:柠条根瘤菌具有较强的耐受高温和耐盐、耐酸碱能力,抗逆性较强,但仍存在菌株间差异.70.8%的菌...     

C型产气荚膜梭菌外毒素致小鼠肠道损伤的转录组分析

旨在探索产气荚膜梭菌外毒素造成机体炎性损伤及免疫调控紊乱的毒性机制,为产气荚膜梭菌病的致病机理研究提供理论基础。将C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2培养上清腹腔注射BALB/c小鼠,采集小肠样本进行转录组测序,筛选差异表达基因,并对其进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。结果显示,共获得40.99 Gb有效碱基,筛选后共得到795个差异表达基因,其中,229个基因表达上调,566个基因表达下调,对随机选取的10个基因进行q-PCR验证,其相对表达量与转录表达谱一致。GO功能注释主要涉及G蛋白偶联核苷酸受体活性和G蛋白偶联嘌呤核苷酸受体活性等。KEGG通路富集分析发现,主要富集在TNF信号通路、IL-17信号通路、p53信号通路、FOXO信号通路、Toll样受体信号通路、NF-κB信号通路等。产气荚膜梭菌外泌毒素侵入机体,会激活TNF等炎性信号通路,进而造成肠道发生炎性损伤甚至坏死。     

牛肺泡巨噬细胞微小RNA的克隆与鉴定

MicroRNA(miRNA)是一类长19～26个核苷酸的内源性非编码单链小分子RNA,其异常表达将会导致生理的异常和疾病的产生.为了研究miRNAs在牛肺泡巨噬细胞抗菌机制中的作用,构建了牛肺泡巨噬细胞miRNA cDNA文库,从438个克隆中筛选出22个miRNAs,其中有19个miRNAs在牛的miRBase数据库中没有发现,但是有8个miRNAs与人和(或)鼠中的序列完全同源,因此,将它们命名为Bta-miR-141、Bta-miR-187、Bta-miR-191、Bta-miR-448、Bta-miR-589、Bta-miR-873、Bta-miR-463和Bta-miR-562;另外有11个miRNAs在所有miR-Base数据库中都没有发现,有待进一步研究.这些数据为研究miRNAs调控牛肺泡巨噬细胞抗菌机制奠定了基础.     

利用重叠延伸PCR技术进行定点突变研究

[目的]建立一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。[方法]以重组人组织型纤溶酶原激活剂rPA(Reteplase)基因为模板,采用重叠延伸PCR技术对3个位点进行定点突变,将突变基因片段克隆到克隆载体pEASY-Blunt上,并通过测序验证突变结果。[结果]测序结果表明3个位点的突变结果与预期完全一致,即第10位引入单个碱基A、第137位碱基C突变为G以及第686位碱基G突变为A,通过重叠延伸PCR技术一次引入3个突变碱基,100%的实现目的位点的定点突变。[结论]该研究成功实现目的位点的定点突变,为rPA基因的进一步克隆和功能研究奠定了基础。同时也表明重叠延伸PCR技术是一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。     

绵羊肺炎支原体Y98株未知基因Hsp70（DnaK）的克隆

绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）是绵羊传染性胸膜肺炎（Contagious ovine pleuropneumo-nia）的主要致病菌。热休克蛋白Hsp70也叫（DnaK）,具有分子伴侣和免疫的作用。本试验以MO Y98基因组为模板,通过比对15种支原体Hsp70基因的序列并设计简并引物,分别利用同源克隆和染色体步移—Tail-PCR技术克隆到了四段Hsp70（DnaK）基因片断并进行了核苷酸序列测定。利用序列拼接软件对克隆的四段序列进行序列拼接,通过ORF Finder软件分析出了MO Y98的Hsp70的开放式阅读框架,预测分析该基因是由1 815bp组成,编码604个氨基酸。本试验于国内外首次克隆到了MO的Hsp70基因序列,为MO的抗原研究以及Hsp70的功能研究等奠定了基础。     

利用重叠延伸PCR技术进行定点突变研究(英文)

[目的]建立一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。[方法]以重组人组织型纤溶酶原激活剂rPA(Reteplase)基因为模板,采用重叠延伸PCR技术对3个位点进行定点突变,将突变基因片段克隆到克隆载体pEASY-Blunt上,并通过测序验证突变结果。[结果]测序结果表明3个位点的突变结果与预期完全一致,即第10位引入单个碱基A、第137位碱基C突变为G以及第686位碱基G突变为A,通过重叠延伸PCR技术一次引入3个突变碱基,100%的实现目的位点的定点突变。[结论]该研究成功实现目的位点的定点突变,为rPA基因的进一步克隆和功能研究奠定了基础。同时也表明重叠延伸PCR技术是一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。     

奶牛结核分枝杆菌的分离与鉴定

牛结核病(bovine tuberculosis)是由牛分枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病.该病能通过奶制品传染给人和其他动物,危害严重.作者通过借鉴分离培养人临床样品的方法,摸索出从奶牛鼻拭子临床样品分离、培养结核分枝杆菌的方法,现报道如下.     

产报荚膜梭菌β—毒素基因的克隆与核苷酸序列分析

为了给产气荚膜梭菌β－毒素基因工程亚单位苗和细菌毒素多价基因工程苗的研制提供基因材料,用聚合酶锭式反应（ＰＣＲ）技术,从Ｂ型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了９３０ｂｐ的β－毒素基因,用限制性核酸内切栈ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ对ＰＣＲ产物进行双酶切处理。然后通过了Ｔ４ＤＮＡ连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒ＰＥＴ－２８Ｃ（＋）的多克隆位点,转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,经ＢａｍＨ     

幼畜腹泻双价基因工程苗对牛和羊的攻毒保护试验

用幼畜腹泻双价基因工程苗以两种剂量（正常免疫剂量和１／２免疫剂量）分别免疫接种怀孕母牛和怀孕母羊，待其分娩并保证其所产幼畜（犊牛，羔羊）采食初乳后，经口灌服致幼畜腹泻的强毒活菌，结果，正常免疫剂量组，犊牛腹泻发病率为１４．３％，死亡率为零；羔羊腹泻发病率为１５．８％，死亡率为２．７％，１／２免疫剂量组，犊牛腹泻发病率为３０．７％，羔羊腹泻发病率为２４．４％，死亡率为１２．２％，未接种疫苗的对照组，