鸡新城疫-传染性支气管炎(M41株)二联灭活苗的免疫保护期测定

传染性支气管炎能引起鸡的急性、高度接触性的呼吸道、消化道和泌尿生殖道疾病,对我国养鸡业构成严重威胁。而新城疫也是危害我国养鸡业的重要传染病。疫苗免疫是公认的预防这2种疫病的方法。本研究利用自制的3批ND-IB二联灭活疫苗,分别对28日龄易感雏鸡和120日龄开产前母鸡进行免疫,利用HI试验测出试验鸡群的抗体值。结果表明28日龄易感雏鸡在2个月内,开产前母鸡在3个月内均受到有效保护,为本批新 支二联疫苗的实际临床免疫接种提供了依据。      

鸡传染性支气管炎病毒Jin13株的分离与鉴定

为了对近年从郑州郊区鸡群中分离到的1株传染性支气管炎病毒(Jin13株)进行定型鉴定,作者采用气管环(TOC)中和试验、血凝抑制(HI)试验、单抗交叉ELISA、序列分析和免疫试验对其进行了研究。气管环(TOC)中和试验和血凝抑制(HI)试验表明Jin13病毒只与M41阳性血清反应,而与其它ND、EDS76、H9AI、IBD标准阳性血清不发生反应,序列分析证实该分离毒Jin13株是IBV。在交叉气管环(TOC)中和试验和交叉血凝抑制(HI)试验中Jin13株与肾变型Y株不交叉(R≤0.25),而与马萨株血清型的M41株和H52株有明显交叉(0.25≤R≤0.8);单抗交叉ELISA结果显示Jin13株与针对M41株的J1单抗有很好的反应(≥640～1 280),而与针对肾变型Y株的单抗C2几乎不反应(≤40),这进一步证实了Jin13与呼吸型M41株、H52株属同一血清型。与M41株相比较,Jin13株S1氨基酸序列在第126,386,390,461位出现了突变,又在S1基因第1 166位出现一个新Aiu I酶切位点,是M41株的一个变异株。对Jin13株纯化后原代毒进行免疫效力检测证实其免疫原性优于M41株和H52株。Jin13毒株是一株免疫原性良好的IBV地方流行毒株。     

用单抗介导的交叉ELISA对IBV毒株的分型研究

用针对IBV 3种结构蛋白的一组单抗（C1、C2、C3、J1、J2、J3）和6个不同血清型的IBV标准株（Gray株、Connectic株、Holte株、T株、M41株、Arkavas株）进行交叉ELISA试验，显示了6种不同的反应模式；与同一Mass血清型内M41、H52、H120 3毒株进行交叉ELISA反应显示出相同的反应模式；通过地方分离株和标准株与6株单抗的ELISA反应模式比较可将来自河南、山东、江苏、广东、广西、西川等省22个地方株划分为7个不同的抗原群，其中M41抗原群占10株，其仍是我国当前主要的流行型。根据两株中和单抗C2、J1与22个地方株ELISA反应结果，可将地方株分为三大类群，即与J1反应的M41类群，与C2反应的Y类群和J1、C2均不反应的第三类群，C2和J1两株中和单抗可与85％以上毒株发生反应，可为IBV制苗毒株的选择（M41和Y）提供参考依据，此种分型方法较传统的分型方法简便、快速。     

IBDV流行强毒HQ-b株与其细胞适应毒生物学特性比较及VP2、VP5基因序列分析

为了解IBDV流行强毒HQ-b株囊毒与其细胞适应毒间生物学特性差异及2毒株毒力变化与VP2、VP5基因变异的关系,对2毒株的细胞适应性、致病性等进行比较,同时对其VP2、VP5基因序列进行分析。结果表明,HQ-b株囊毒对CEF、CEK、CELi、DF-1和Vero均不适应,而细胞适应毒HQ株仅不能适应Vero细胞、且批内及批间毒价稳定。致病性结果显示HQ-b株对4周龄SPF鸡致死率高达80%,是真正的超强毒,而细胞适应毒致死率已降为0%。对VP2基因高变区研究表明,HQ-b株具备IBDV超强毒株的分子特征,即222A、256I、294I和299S;其细胞适应毒HQ株除222A→P、256I→V、294I→L和299S→N外,在VP2公认的毒力位点253(Q→H)、279(D→N)、284(A→T)位氨基酸也发生改变,导致细胞适应毒具备经典弱毒株的分子特征,即222P、256V、279N、284T、294L和299N。对VP5基因研究表明:流行强毒HQ-b株也具有IBDV超强毒株的分子特征;其细胞适应毒VP5基因有12个位点碱基突变并导致9处氨基酸变异,尤其是ORF区第2个碱基由"T"突变为"C"后,导致细胞适应毒VP5的N端丢失了4个氨基酸,这种突变与现有的疫苗毒完全一致。本研究提供了超强毒HQ-b培育、驯化后致病性和细胞适应性转变的分子机理,也丰富了IBDV分子流行病学的理论。     

传染性支气管炎病毒M_(41)株种子批的建立

[目的]为生产鸡传染性支气管炎疫苗奠定基础。[方法]在研究制备鸡传染性支气管炎疫苗所用毒种的毒力、免疫原性、保存期等的基础上,测定4种来源的传染性支气管炎病毒M41株的50%鸡胚感染量(EID50),选取滴度较高病毒作为毒种,建立传染性支气管炎病毒M41株种子批,并测定其毒力。[结果]含毒尿囊液在冻干前后对鸡胚的毒力不变。毒力试验结果表明该毒的毒力中等,可为雏鸡提供保护。M41株种毒的EID50和免疫原性在7代内无变化。湿毒在-15℃保存半年以内,其毒价基本不变。种子批建立后未受到细菌及其他微生物的污染。[结论]该种子批可以用于生产鸡传染性支气管炎疫苗。     

传染性法氏囊病病毒变异的分子基础

鸡传染性法氏囊病病毒 (IBDV )是传染性法氏囊病 (IBD)的病原体。由于急性感染的高死亡率和亚临床感染严重的免疫抑制 ,IBDV对养禽业经济上有重大的影响[1- 2 ] 。IBDV共有两个血清型 ,即 1型和 2型 ,血清 1型对鸡有致病性 ,血清 2型分离自火鸡 ,对鸡无致病性。Rosenberger(1985 )首次从美国特拉华半岛肉鸡群分离到 4株IBDV变异株 ,1987年 ,荷兰、比利时爆发了与美国株不同的超强病毒 (vvIBDV)。而后 ,英国、法国、西班牙、德国等欧洲国家相继分离到超强毒株。李树根 (1991)等首次在国内分离到血清亚型株 ,李德山 (1991)首次报道…     

IBD囊源油乳苗与商品油乳苗免疫效果比较

<正> 当前国内为防制鸡传染性法氏囊病(IBD)的流行,使用了多种商品疫苗,包括进口苗和给种鸡注射灭能油乳苗,但实践表明,遇有强毒侵袭,仍然发病和死亡。国内外许多文献报道,免疫失败的原因是由于亚型或变异株的出现,而商品疫苗(血清Ⅰ型)对受亚型或变异株感染的病鸡仅能达到10～70%的保护。本试验使用囊源灭活油乳苗,与国内外非囊源商品油乳苗比较观察其对雏鸡和种鸡的免疫效果,并探讨不同油乳苗免疫种鸡后,其后裔母源抗体对流行强毒的抵抗力,以便正确选用疫苗,更有效地控制IBD流行。     

高免卵黄液对法氏囊强毒感染鸡防治试验

应用鸡传染性法氏囊病(IBD)地方流行毒株(郑毒)人工感染30日龄的IBD阴性鸡,于感染前、后不同时间注射IBD高免卵黄液的试验结果表明,随高免卵黄液注射时间的推迟,防治效果随之下降。但即使在感染后72小时全群发病高峰时进行注射,死亡数仍比对照组减少20%。卵黄抗体与种鸡血清抗体关系基本一致。高免卵黄液来源丰富,制备简单,含有针对变异株或亚型的母源抗体,因此推广高免卵黄液被动免疫,对迅速控制流行有很高的实用价值。     

RT-PCR和Digoxigenin标记的核酸探针检测鸡传染性支气管炎病毒试验研究

用２对已发表的引物和１对自行设计的引物对同一ＩＢＶＨ１２０株进行ＲＴ－ＰＣＲ，分别获得了Ｓ１基因上与引物设计相一致的１７２０ｂｐ，２２８ｂｐ，６０２ｂｐ，的扩增片段。用自行设计的引物对７个毒株（Ｈ１２０，Ｈ５２，Ｍ４１，Ｃｏｎｎ，Ｇｒａｙ，Ｔ，Ｈｏｌｔｅ）和５个分离株（宜毒，上毒，云毒，ＨＫ，１１８）的含毒尿囊液或纯化病毒进行ＲＴ－ＰＣＲ。结果除Ｈｏｌｔｅ株，２个分离株（宜毒，云毒）外，其余均被成功地扩增出６０２ｂｐ的片段。将ＩＢＶＨ１２０株０６ｋｂＰＣＲ产物用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记为探针，分别与上述各ＩＢＶ毒株的核酸及其扩增产物进行核酸杂交，均呈现阳性反应，而该探针不与ＩＢＤＶ和ＮＤＶ的ＤＮＡ，ＥＤＳ－７６病毒的ＤＮＡ及正常鸡胚尿囊液抽提物反应。ＲＴ－ＰＣＲ和核酸杂交技术提供了直接从尿囊液中快速检测出病毒，作为诊断ＩＢＶ的新方法。     

鸡产蛋下降综合症（EDS_（－76））Z_（16）毒株的分离和鉴定

从５个爆发产蛋下降综合症的鸡场收集８０个样品中，分离到５株具血凝性的病毒，命名为ＣＡＶ—Ｚ＿（１６）、Ｚ＿２、Ｗ＿４、Ｔ＿１和Ｔ＿３株。病毒大小７０～８０ｎｍ，无囊膜，二十面体对称；对氯仿不敏感，ｐＨ３～５下稳定，５０～６０℃１小时不被完全灭活；在ＤＥＦ细胞上繁殖能被ＩＵＤＲ抑制；经血凝抑制试验、琼扩试验和微量中和试验证实与ＡＶ—１２７株属同一血清型，鉴定为ＥＤＳ＿（－７６）病毒。ＣＡＶ—Ｚ＿（１６）株能在鸭胚上繁殖，致死鸭胚，ＨＡ效价达２￣（１３）～２￣（１７），也能在鸭胚成纤维细胞上繁殖，产生ＣＰＥ，但ＨＡ效价仅有２￣７～２￣（１０）。初次分离ＥＤＳ＿（－７６）病毒选用鸭胚较佳，从生殖道分离成功率较高。