鸡新城疫血凝抑制(HI)抗体研究——β-微量血凝抑制试验的影响因素

近年来国内养鸡业发展甚速,为有效地防制鸡新城疫的发生,一些养鸡场已把HI试验作为监测鸡群免疫状态、检查疫苗使用效果和制定合理免疫程度的依据。由于试管全量法比较麻烦,故不适用于较多样品的测定。自1973年Beard等介绍用微量法测定新城疫HI抗体以来,虽有不少报道对该法作进一步改进,但在操作术式上迄今仍未完     

鸡新城疫血凝抑制(HI)抗体研究——微量法HI试验的影响因素

本试验系统地比较了影响鸡新城疫血凝抑制(HI)试验β-微量法的诸因素。试验表明温度及抗原与血清作用时间对 HA和 HI 的影响最为显著。温度的影响主要发生在加红细胞前,每升高5℃,HA 和 HI 滴度都平均上升0.35(log_2)。作用时间在最初30分神内使 HI 滴度递增显著,随后变缓。在22℃下,作用时间自0分钟延长至150分钟,HI 滴度递增2.3(log_2)。抗原浓度与 HI 滴度成反比。红细胞浓度与 HA 滴度成反比而与 HI 滴度呈正比。不同个体供血者的红细胞对 HA 和 HI 有一定程度影响,但与供者免疫水平无关。稀释液的酸碱度在 pH7.0时红细胞沉降最充分,图形最清晰,5.8以下时红细胞易自凝,7.8以上时易洗脱。以 Lasota系弱毒提取的浓缩抗原作 HI 试验时,判定时间对试验值的影响较小。     

斑点免疫金测定法检测鸡减蛋综合征抗体的研究

用胶体金标记提纯后的免抗鸡ＩｇＧ，建立了一件以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金作为标记物的检测ＥＤＳ－７６病毒抗体的斑点免疫金测定法（ＤＩＧＦＡ）．该法具有简便、灵敏、快速等优点，全过程于３～５分钟内完成，阳性结果在膜上呈现红色斑点；对鸡ＩｓＧ的最小检测量（灵敏度）为６３×１０－９ｇ；与其它病毒阳性血清无交叉反应。ＤＩＧＦＡ检测ＥＤＳ－７６抗体既可定性，也可定量。检测８０份待检血清，在ＨＩ检出的５６份阳性标本中（效价≥４ｌｏｇ２）用ＤＩＧＦＡ检出阳性标本５５份（效价≥６１ｏｇ２）二者阳性符合率为９８．２％．与ＨＩ比较，ＤＩＧＦＡ平均高２．５（ｌｏｇ２）。本技术为ＥＤＳ－７６和其它禽病的快速诊断和免疫监测提供了一个新的方法。     

河南省减蛋综合症(EDS—76)血清学调查

1992年1月至1993年6月,我们在河南省17个地区112个鸡场210群鸡中随机抽检1619份血样,共检出EDS—76血清阳性鸡:448只(27.76),阳性鸡群90个(42.8％),阳性鸡场69个(61.8％)。测检25群鸭173份血样,检出阳性鸭66只(38.2％),阳性鸭群21个(84％)。全省17个地区中12个地区     

不同H9N2亚型禽流感病毒株致病力的比较试验

参照NDV评价毒力的方法对1998—2008年间收集的25株H9N2AIV的致病性进行了比较研究。结果显示,25株H9N2AIV不同毒株间致病性有较大差异,大致分为3类：致病性偏强、致病性中等和致病性较弱。从中选出致病力有差异的8个毒株进行了1日龄雏鸡脑内接种指数（ICPI）、6周龄鸡静脉接种指数（IVPI）以及8周龄SPF鸡人工感染排毒试验,结果证明大部分毒株ICPI和IVPI基本上为0,排毒散毒的高峰期在攻毒后第5天到第6天。在25个毒株中,3#和12#表现出了比较高的致病性,不仅其EID50值最高（分别为10-8.8/0.2mL和10-8.8/0.2mL）、ELD50值最高（分别为10-7.9/0.2mL和10-8.7/0.2mL）,而且鸡胚平均死亡时间也最短（分别为66.5,69h）。3#、12#还出现了1日龄雏鸡脑内接种指数（分别为0.238,0.437）和6周鸡静脉内接种指数（分别为0.34,0.51）。在8周龄SPF鸡人工感染排毒试验中3#和12#毒株的排毒量大,排毒时间也明显长于其他毒株（第2～9天）。以上试验结果表明我国H9N2AIV不同毒株致病性有明显差异,呈多态性,致病性偏强的毒株造成鸡群较高的死亡率。     

鸡群血凝抑制抗体的快速测定

新城疫(ND)流行与低抗体鸡的存在有密切关系。通常鸡群的抗体水平,随日龄增长和免疫次数增多而提高,但在每个日龄阶段中,总有一部分抗体价在1:8以下的低水平鸡群(见表)。这些鸡多半是出壳后未及时免疫的雏鸡,初次免疫一个月后的雏鸡,二次弱毒苗饮水或滴鼻一个月以上的小鸡或青年鸡,饮水二个月以上、肌注或气雾免疫三个月以上的开产鸡或六个月以上的青年鸡等。由于一部分低抗体雏鸡的存在,给     

用单抗介导的交叉ELISA对IBV毒株的分型研究

用针对IBV 3种结构蛋白的一组单抗（C1、C2、C3、J1、J2、J3）和6个不同血清型的IBV标准株（Gray株、Connectic株、Holte株、T株、M41株、Arkavas株）进行交叉ELISA试验，显示了6种不同的反应模式；与同一Mass血清型内M41、H52、H120 3毒株进行交叉ELISA反应显示出相同的反应模式；通过地方分离株和标准株与6株单抗的ELISA反应模式比较可将来自河南、山东、江苏、广东、广西、西川等省22个地方株划分为7个不同的抗原群，其中M41抗原群占10株，其仍是我国当前主要的流行型。根据两株中和单抗C2、J1与22个地方株ELISA反应结果，可将地方株分为三大类群，即与J1反应的M41类群，与C2反应的Y类群和J1、C2均不反应的第三类群，C2和J1两株中和单抗可与85％以上毒株发生反应，可为IBV制苗毒株的选择（M41和Y）提供参考依据，此种分型方法较传统的分型方法简便、快速。     

会讯

河南省畜禽传染病防制研究会于1989年5月16日至18日在郑州市召升了第二次学术年会。代表来自全省34个单位,共59人。研究会会长尹凤阁教授致开幕词,并总结了研究会成立以来的工作。河南省畜牧兽医学会     

RT-PCR和核酸探针在IBV检测中的应用

用ＰＣＲ和核酸探针杂交检测了３种毒株（Ｈ１２０株,Ｍ４１株,ＨＫ株）在鸡胚中的繁殖动态及人工感染鸡和自然感鸡气管粘液及肾组织内的ＩＢＶ．结果表明：在鸡胚中繁殖３种毒株ＩＢＶ（Ｈ１２０,ＨＫ,Ｍ４１）,ＰＣＲ最早检出时间为２０～２４ｈ,克隆探针最早检出时间为２４～３０ｈ;用克隆核酸探针检测人工感染鸡,１２ｈ后能从肾脏中检出病毒。对７只就诊鸡的病变肾脏进行杂交检测和ＰＣＲ扩增,有５只均呈阳性反应。ＩＢＶ分离株ＨＫ株与标准株Ｍ４１株经ＰＣＲ扩增、ＨａｅⅢ和ＨｉｎｄⅢ酶切及ＲＦＬＰ分析,表明其属同一马萨诸塞血清型。ＰＣＲ和核酸杂交技术为生产上提供了直接从尿囊液和感染鸡组织中快速检测ＩＢＶ病毒及诊断ＩＢＶ的新方法,对ＩＢＶ的血清定型也有一定的实用价值。     

鸡传染性支气管炎病毒Jin13株的分离与鉴定

为了对近年从郑州郊区鸡群中分离到的1株传染性支气管炎病毒(Jin13株)进行定型鉴定,作者采用气管环(TOC)中和试验、血凝抑制(HI)试验、单抗交叉ELISA、序列分析和免疫试验对其进行了研究。气管环(TOC)中和试验和血凝抑制(HI)试验表明Jin13病毒只与M41阳性血清反应,而与其它ND、EDS76、H9AI、IBD标准阳性血清不发生反应,序列分析证实该分离毒Jin13株是IBV。在交叉气管环(TOC)中和试验和交叉血凝抑制(HI)试验中Jin13株与肾变型Y株不交叉(R≤0.25),而与马萨株血清型的M41株和H52株有明显交叉(0.25≤R≤0.8);单抗交叉ELISA结果显示Jin13株与针对M41株的J1单抗有很好的反应(≥640～1 280),而与针对肾变型Y株的单抗C2几乎不反应(≤40),这进一步证实了Jin13与呼吸型M41株、H52株属同一血清型。与M41株相比较,Jin13株S1氨基酸序列在第126,386,390,461位出现了突变,又在S1基因第1 166位出现一个新Aiu I酶切位点,是M41株的一个变异株。对Jin13株纯化后原代毒进行免疫效力检测证实其免疫原性优于M41株和H52株。Jin13毒株是一株免疫原性良好的IBV地方流行毒株。