樗蚕蛹精巢细胞系的建立及柞蚕NPV的体外复制

樗蚕蛹（ｐｈｉｌｏｓａｍｉａ ｃｙｎｔｈｉａ）精巢细胞经２年多时间的离体培养，已传至１００代以上，堪称无限细胞系，命名为ＰＣ－０１。原代培养经４个月，开始传代。目前细胞系生长稳定，细胞形态多为圆形，少数为长椭圆形及梭形。细胞呈悬浮生长，也有半贴壁现象。细胞群体倍增时间为７２ｈ，染色体数量变化较大。细胞系对柞蚕ＮＰＶ非常敏感，经同工酶测试该细胞系的酯酶、葡萄糖－６－磷酸脱氢酶活性较好。     

无花果曲霉(Aspergillus ficuum 3.4322)植酸酶基因的克隆及序列分析

以无花果曲霉(Aspergillus ficuum 3.4322)基因组DNA为模板,用PCR方法扩增植酸酶基因(phyA)。将PCR产物克隆到pMD 18-T质粒中,用于DNA测序。DNA序列分析结果表明,基因全长1 509 bp,其中包括一个长105 bp的内含子。编码467个氨基酸,第1-19氨基酸为信号肽序列,成熟的植酸酶由448个氨基酸组成。与黑曲霉(Aspergillus niger)植酸酶(GenBank Accession:M94550)的氨基酸同源性为95.7%,与无花果曲霉(Aspergillus ficuum3.324)植酸酶(GenBank Accession:AY013315)的氨基酸同源性为98.9%,显示了植酸酶基因在不同菌株中的差异。     

柞蚕核型多角体病毒DNA对樗蚕蛹精细胞系的转染试验

柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)与樗蚕蛹精细胞虽非同源,但相互敏感.有关ApNPV-DNA转染樗蚕蛹精细胞试验国内外尚无报道.本文利用脂质体介导和磷酸钙沉淀两种转染方法进行ApNPV-DNA转染樗蚕蛹精巢细胞试验,研究表明,脂质体介导法比磷酸钙沉淀法转染效率高20倍,此项研究对柞蚕杆状病毒载体表达系统的应用具有重要意义.     

柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)对柞蚕卵巢初代培养细胞的侵染与增殖

将精制的柞蚕微孢子虫孢子用0.2mol.L-1KOH处理后,接种感染生长状态良好的柞蚕蛹卵巢初代培养细胞,调查其感染增殖规律。接种1h后,孢子的发芽率为53.8%,培养细胞的初期感染率为30%。接种24h后,可观察到裂殖体的数量急速增加,72h达最高峰。接种96h后可观察到短极丝孢子发芽后形成的空孢壳和二次感染体。接种5d后形成成熟孢子,每个细胞平均产100个孢子。在其生活史中,柞蚕微孢子虫呈双核或四偶核,并表现出孢子二型性,具有典型的Nosema属特征。     

柞蚕蛹虫草水提物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

研究柞蚕蛹虫草水提物（Aqueous extract from cordycep militaris of antheraea pemyi,AEoAPC）对人乳腺癌细胞MCF-7生长抑制与凋亡的作用.将不同浓度的AEoAPC分别作用于人乳腺癌细胞MCF-7 24、48、72 h后,应用倒置相差显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7的形态变化,噻唑蓝比色法测定细胞生长抑制效应,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率.结果表明：AEoAPC能显著抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖,且在一定的浓度范围内呈时间和浓度的依赖性;形态学观察发现,细胞形状不规则、变暗、皱缩;FCM检测结果显示,作用72 h后G0-G1期（DNA合成前期）的细胞分布有所增加,使细胞阻滞于G2期（DNA合成后期）和S期（DNA合成期）;0.8g/L AE0-APC在24、48、72 h凋亡率分别为8.65％、14.20％、26.30％,其凋亡程度与时间呈正相关.说明AEoAPC能明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长,诱导其细胞凋亡.     

独角莲抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖和诱导凋亡的作用研究

为探讨独角莲对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的作用,将不同浓度的独角莲根茎水提物(The aqueous extract from dried powdered rhizomes of Typhonium giganteum Engl.,AEoTGE)处理MCF-7细胞24,48,72h后,应用四甲基偶唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色试验、倒置光学显微镜观察、流式细胞术(Flow cytometry,FCM)及琼脂糖凝胶电泳法检测细胞增殖和凋亡情况.结果表明:AEoTGE能够显著抑制MCF-7细胞增殖,且在一定的浓度范围内呈时间和浓度依赖性,井可诱导其细胞凋亡.30g·L-1AEoTGE处理24,48,72h后,MCF-7细胞凋亡率分别为8.34%、12.1%和12.6%,其凋亡程度与时间呈正相关,S期(DNA合成期)的细 胞在处理72h后分布显著增加.可见,独角莲对MCF-7细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用,其抗肿瘤机制与诱导凋亡有关.     

柞蚕蛹虫草抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导凋亡的作用

为鉴定柞蚕蛹虫草新的医用价值,将不同浓度的柞蚕蛹虫草水提物(AEoAPC)分别作用于体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,于24、48、72 h后采用倒置相差显微镜和透射电子显微镜观察、四甲基偶唑蓝(MTT)比色及流式细胞术(FCM)检测细胞的增殖和凋亡情况。结果表明:细胞培养板中分别加入质量浓度为0.1、0.2、0.5、0.8、1.0、2.0、5.0 g/L的AEoAPC,均能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈现时间剂量依赖性,1.0 g/L AEoAPC处理24、48、72 h后,对SMMC-7721细胞的生长抑制率分别为18.9%、46.4%、77.2%;经AEoAPC处理后大量癌细胞出现染色质边集和凝聚、核碎裂及凋亡小体;1.0 g/LAEoAPC处理24、48、72 h SMMC-7721细胞凋亡率分别为7.65%、11.04%、23.02%,细胞凋亡程度与AEoAPC作用时间呈正相关,有丝分裂第一间距期(G1)的细胞在AEoAPC作用72 h后分布明显增加。研究结果初步显示,AEoAPC对人肝癌SMMC-7721细胞有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

樗蚕蛹精巢传代细胞对某些环境因子适应性的初步研究

采用不同温度、ＰＨ、培养基对樗蚕业 第４０代传代细胞生长的影响进行初步影响。结果表明，细胞生长的适应范围为２０－３０℃，最适温度为２６℃，最适ＰＨ值为６．４，最佳培养基为ＭＧＭ－４４８、ＭＧＭ－４４３。