牦牛VEGFA双荧光素酶载体构建及与miR-200b的靶向验证

为探究微小RNA(miR-200b)与血管内皮生长因子A(VEGFA)基因之间的靶向关系，采用miRanda和Targetscan软件预测牦牛miR-200b与VEGFA可能存在结合位点，构建了VEGFA基因3′UTR区的野生型和突变型双荧光素酶载体。利用与目的miRNA靶种子序列相结合基因的突变序列，构建该靶基因的突变型重组质粒(pGL3-promoter-mut VEGFA)，再进行重组质粒和目的miRNA的miRNA mimic的共转染实验。结果表明，预测到的miR-200b与VEGFA基因的3′UTR区存在结合位点。PCR进行扩增和测序之后，VEGFA基因3′UTR区的野生型、突变型载体构建成功。共转染VEGFA野生型载体和miR-200b mimic的双荧光素酶活性极显著低于对照组(P < 0.05)，VEGFA突变型载体和miR-200b mimic共转染的双荧光素酶活性与对照组无显著差异(P ＞ 0.05)。说明VEGFA基因的3′UTR区能与miR-200b结合并抑制双荧光素酶活性，验证了VEGFA是miR-200b的靶基因。     

Collagen1和Collagen3在牦牛肺纤维化组织中的表达研究

为探讨Collagen1和Collagen3在牦牛肺纤维化组织中的表达，阐明Collagen1和Collagen3在牦牛肺纤维化进程中发挥的作用，采集牦牛正常肺组织和发生纤维化的肺组织，将其分为对照组和试验组，通过HE染色、Masson染色及透射电镜观察肺超微结构的病理变化及纤维化状态；利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹（WB）、免疫组化和免疫荧光染色法检测和定位Collagen1、Collagen3基因和蛋白的表达情况。结果显示，试照组牦牛肺组织结构完整，肺泡隔无增厚，支气管管腔和肺泡腔内均无炎性渗出物；试验组肺组织可见片状坏死，胞核碎裂溶解，重度出血，大范围肺水肿。Collagen1在试验组中的表达量高于对照组，而Collagen3在对照组中的表达量高于试验组。在试验组中，Collagen1和Collagen3蛋白大量增生，在肺泡隔中有大量分布，其余分布位置与肺对照组基本一致，但表达都高于对照组。综上所述，Collagen1和Collagen3在牦牛发生肺纤维化的过程中发挥着重要作用，Collagen1和Collagen3的相对表达量在诊断牦牛纤维化肺炎中具有一...     

3个梨杂交组合F1代的白粉病抗性遗传分析

以‘苹果梨’ב八月红’、‘八月红’ב红香酥’和‘苹果梨’ב红香酥’3个梨杂交组合后代728个单株为研究对象,采用田间自然发病调查法,连续3年调查叶片白粉病的发病情况,并分析白粉病抗性的遗传变异,为梨树白粉病抗病基因定位和筛选奠定基础。结果表明,‘苹果梨’为高感亲本,‘红香酥’较抗病,‘八月红’居中。3个杂交组合后代均表现低亲遗传倾向。在杂交育种中选择抗病亲本可显著提高低低亲率,降低后代感病指数,易于筛选抗病种质。     

梨组织培养研究进展及其在育种中的应用

梨组织培养为梨优良品种的保存与改良、遗传转化体系建立、基因功能研究提供了有效途径。综述了国内外近年来梨组织培养研究现状，重点对外植体类型、基础培养基及其添加物、培养条件等因素对梨组织培养的影响进行概述。提出了现阶段梨组织培养存在的问题及对策，以及在育种中的应用和前景展望，以期为今后的梨组培研究提供参考。     

杜梨砧木组培扩繁技术研究

为繁殖整齐一致的杜梨无性系砧木，以成年杜梨砧木春季茎段和种子为外植体，开展不同消毒剂和消毒时间的消毒效果以及最佳继代增殖和生根培养基的筛选研究。结果表明：以杜梨砧木种子为外植体时，0.1%HgCl2消毒10 min效果较好，外植体成活率可达66.67%；以新梢为外植体时，5%NaClO消毒10 min效果较好，外植体成活率可达77.78%，以此获得杜梨株系21个。对其中获得的2个株系进行了最佳继代增殖培养基的筛选，其中株系7-4在MS+0.2 mg/L ZT+0.3～1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L GA的培养基上增殖效果最好，增殖系数在3.9以上；株系11-2在MS+0.2 mg/L ZT+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L GA的培养基上生长表现最好，但增殖系数仅为1.88。对株系7-4进行了生根培养，在1/2MS+2.0 mg/L IBA的生根培养基上采用一步生根法，生根率为85.00%，平均每株可生根3.82条，移栽成活率在90%以上。上述研究为杜梨无性...     

棉花查尔酮异构酶基因家族的鉴定及表达分析

为研究陆地棉查尔酮异构酶CHI（chalcone isomerase）在彩色棉纤维发育及响应胁迫中的作用，对陆地棉基因组中GhCHI基因家族进行鉴定，开展蛋白理化性质、结构域、启动子顺式作用元件、蛋白质高级结构、系统进化分析，利用转录组数据和实时荧光定量PCR分析其表达特征。结果显示，从陆地棉基因组中鉴定获得12个GhCHI基因家族成员，可分为2个亚家族，具有典型的查尔酮超家族结构域，编码201~452个氨基酸，主要为亲水性蛋白，二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主。GhCHI基因启动子顺式作用元件类型主要包含光反应元件、激素响应元件及参与类黄酮生物合成调控的元件等。表达分析结果显示GhCHI1、GhCHI2、GhCHI3、GhCHI4与纤维发育密切相关，尤其在彩色棉纤维发育后期的色素沉积着色时期表达水平较高；这4个基因在叶、花托、雌蕊中也具有较高的表达水平；GhCHI1、GhCHI2、GhCHI3在热胁迫、盐胁迫和干旱胁迫下均受到显著的诱导表达。GhCHI1―GhCHI4蛋白互作分析结果显示，它们可能和参与类黄酮合成的2-氧代戊二酸3-双加氧酶和类黄酮3''-单加氧酶等蛋白质存在相互作用。结果表明，GhCHI1、GhCHI2、GhCHI3和GhCHI4基因在彩色棉的纤维发育和胁迫应答中发挥重要作用。     

不同青贮替代小麦秸秆对东乡贡羊生长性能、营养物质表观消化率及血清生化指标的影响

试验旨在研究不同青贮替代小麦秸秆对东乡贡羊生长性能、营养物质表观消化率及血清生化指标的影响。选择30只东乡贡羊随机分为3组，每组10个重复，每个重复1只羊。A组（对照组）羊饲喂小麦秸秆+精料，B组羊饲喂50%小麦秸秆+50%玉米青贮+精料，C组羊饲喂50%小麦秸秆+50%甜高粱青贮+精料。试验期82 d。结果显示，A组、C组东乡贡羊的末重、平均日增重显著高于B组（P<0.05）。A组东乡贡羊的平均日精料采食量显著高于B组（P<0.05）。B组总饲喂成本、每千克增重饲喂成本显著高于C组（P<0.05）。B组羊的粗蛋白质、粗脂肪表观消化率极显著高于A组（P<0.01）,C组羊的粗蛋白质、粗脂肪表观消化率显著高于A组（P<0.05）;B组羊的酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维表观消化率显著高于C组（P<0.05）。试验初期，C组羊中间细胞比率显著低于其他组（P<0.05）,A组羊的血红蛋白含量显著低于其他组（P<0.05）,B组羊的血小板总数显著低于其他组（P<0.05）,B组羊血清葡萄糖含量极显著高于其他组（P<0.01）。试验末期，各组...     

云南大理烟区土壤有效磷时空变化及分区施磷策略

【目的】研究云南大理烟区土壤有效磷的时空变异特征及分区，为优质烟草生产中磷素管理和面源污染控制提供科学依据。【方法】试验在云南大理开展，该区年均烤烟种植面积3.23万hm2左右，分别于1999、2012、2018和2022年选取5个典型植烟片区的代表性烟田256、633、1244和2332块，测定土壤有效磷含量，利用地统计学及GIS技术分析近40年5个时间段(1982、1999、2012、2018和2022年)大理5个植烟县域土壤有效磷时空变异特征，依据土壤有效磷含量现状进行合理施磷分区。【结果】烟区土壤有效磷含量呈逐渐升高趋势，1982—2022年有效磷含量由8.09 mg/kg升高到43.92 mg/kg，升高了4.42倍。1982年有效磷含量均处“低”等级(<20 mg/kg),1999—2022年以“中等”为主(20～40 mg/kg)，面积占比50%以上。近40年土壤有效磷块金效应由<25%上升至41.45%，表明地形等自然因素影响减弱，施肥等人为因素影响增强。根据当前有效磷含量，高磷区和极高磷区面积占比34.21%，主要分布于弥渡北部、祥云西部及宾川西南和东北。...