糖化酶单抗的研制及其抗原识别位点的分析

为建立掺糖造假蜂蜜中残留糖化酶的检测方法,用从黑曲霉中提取的糖化酶作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了12株稳定分泌针对糖化酶抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚型鉴定结果显示,10株为IgG1,2株为IgG2b,轻链均为κ轻链。Western blotting分析结果表明,12株抗体均可特异性结合糖化酶。其中6株单抗(McAb-2H4F9、6H9D8、8F2F11、8F2E9、1A8G6、1C4D5)细胞株采用体内诱生法制备的腹水效价均1∶1×10⁴以上。采用抗体叠加试验对这6株抗糖化酶单抗的抗原识别位点进行检测,反应增殖结果表明,6株单抗分别针对4类不同抗原位点,McAb-6H9D8和McAb-8F2F11针对第Ⅰ种抗原决定簇;McAb-1A8G6和McAb-1C4D5针对第Ⅱ种抗原决定簇;McAb-8F2E9针对第Ⅲ种抗原决定簇;McAb-2H4F9针对第Ⅳ种抗原决定簇。制备的抗体针对不同的抗原表位,为双抗夹心ELISA方法的建立提供前提。     

原子荧光光谱法测定鹅组织样品中的砷、汞

建立了双道原子氢化物发生原子荧光法,并检测鹅组织样品中的砷(As)和汞(Hg),研究了KBOH4浓度、KOH浓度、酸介质等条件对荧光信号强度的影响,在优化实验条件下,方法对As和Hg的检测限分别为:0.0048μg／L,0.0072μg／L,精密度(RSD)分别为:As=1.91％,Hg=1.63％。结果表明该法快速、灵敏、准确,可用于动物组织样品中的砷、汞等的检测。     

上市肉鸡组织样品中铅、镉、铜、铬含量的测定

从江苏省某市采集上市肉鸡组织样品 ,采用微波消解 石墨炉 原子吸收分光光度法 ,测定主要组织 (心脏、肝脏、肌胃、胸肌、肾脏、腿肌、骨骼 )中铅、镉、铜、铬等重金属元素的含量。检验结果 :组织中Pb的含量以心脏最高 (1 3478± 0 531 2 )mg/kg ,肝脏次之 (1 1 2 6 3±0 534 0 )mg/kg ,骨骼最低 (0 1 0 1 8± 0 0 0 6 6)mg/kg ,样品含Pb超标率按上述组织顺序分别为 :1 0 0 %、 96 87%、 96 87%、 87 50 %、1 0 0 %、 81 2 5 %和 0 ;组织中Cd的含量以肾脏最高 (0 0 63 0± 0 0 2 0 2 )mg/kg,骨骼次之 (0 0 55 9± 0 0 2 0 5)mg/kg ,样品含Cd超标率分别为 :6 2 5 %、 0、 3 1 3 %、 0、 0、 0和 0 ;组织中Cu的含量以心脏最高 (8 492 7± 1 90 1 2 )mg/kg,肝脏次之 (8 462 8± 1 666 4)mg/kg ,腿肌最低 (0 8373± 0 741 4 )mg/kg ,样品含Cu超标率分别为 :1 2 50 %、 1 5 63 %、 9 38%、 3 1 3 %、 0、 0和 0 ;组织中Cr的含量以肾脏最高(1 642 5± 1 0 1 0 0 )mg/kg ,肝脏次之 (1 642 5± 0 61 97)mg/kg ,样品含Cr超标率分别为 :50 0 0 %、 62 70 %、 9 38%、 3 1 3 %、 0、 0和 0。检测数据表明 ,鸡主要组织样品中Pb含量严重超标 ;肝脏、肾脏中Cr超标较严重 ,Cd和Cu也有不同程度?     

抗头孢氨苄单克隆抗体的制备与初步应用

为制备抗头孢氨苄（cephalexin,CEX）的单克隆抗体并建立鲜奶中CEX残留检测的ELISA方法,本试验采用戊二醛两步法分别将CEX与牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）偶联,用合成的CEX-BSA作为免疫原免疫BALB/c雌鼠;5次免疫后,应用杂交瘤细胞融合技术建立并筛选出两株（2G4、5B3）分泌抗CEX单克隆抗体（monoclonal antibodies,McAb）的杂交瘤细胞株,将2G4细胞株注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水,并对腹水进行纯化及鉴定。结果显示,2G4腹水效价大于1∶1.28×10⁵,其抗体亚型为IgG2b（κ）,亲和力常数K=1.51×10⁹ L/mol;交叉试验结果显示,该单克隆抗体除了与头孢拉定有52.55%的交叉反应率外,与头孢噻呋、头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻吩、青霉素、链霉素、四环素均无明显交叉反应;建立了测定鲜奶样品中CEX的ELISA方法,线性范围为20~1 000 ng/mL,线性方程y=0.4674x-0.5359（R²=0.9909）,检测下限为19.68 ng/mL,平均回收率为91.31%,平均变异系数低于15%,低于中国及欧盟规定的头孢氨苄最高残留限量,具有一定的应用前景。     

高效液相色谱—紫外法对13种磺胺类药物的同步检测

本研究旨在建立同步测定多种磺胺类药物残留的高效液相色谱—紫外法。通过对磺胺嘧啶(SD)、磺胺醋酰(SA)、磺胺喹噁啉(SQ)、磺胺氯丙嗪(SUL)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺对甲氧嘧啶(SMD)、磺胺二甲氧嘧啶(SDM')、磺胺异噁唑(SIZ)、磺胺噻唑(ST)、磺胺噻唑钠(ST-Na)、酞磺胺噻唑(PST)、磺胺甲噁唑(SMZ)、琥珀酰磺胺噻唑(SST)等13种磺胺类药物进行紫外波长扫描分析,选择色谱检测的波长为270 nm。由于磺胺类药物的酸碱度不同及结构差异,在经过多种组合比较后,选择乙腈和乙酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,建立的条件可将这些药物分开,13种药物可以分离得到10个色谱峰,ST-Na、PST和ST 3种成分重叠,SDM'和SMZ重叠。用乙腈—氯仿作样品提取并抽提,杂质干扰较少,回收率80%以上,分析用时相对较短。     

镉暴露家兔睾丸和肝脏中小分子金属结合蛋白的分离与比较

 【目的】通过对镉暴露家兔睾丸和肝脏中小分子金属结合蛋白分离与比较,揭示动物睾丸组织镉高敏感性的机制。【方法】6月龄雄性青紫兰家兔经皮下染镉,9 d后将兔子杀死,制备睾丸和肝脏匀浆超离上清液,用Sephadex G-75凝胶层析法进行蛋白分离,经双波长（280 nm和254 nm）测定紫外吸收和原子吸收分光光度法测定Cd、Zn元素含量两种方法确定洗脱液小分子量金属结合蛋白峰管;通过试验比较它们的紫外扫描特性、热稳定性、镉锌元素比值和氨基酸组成。【结果】肝脏分离蛋白分子量为6.0～10.0 kD,有254 nm特征紫外吸收峰,OD250nm/OD280nm的值为13.13,有较好的热稳定性,不被无水乙醇抽提,每摩尔物质中Cd与Zn的摩尔比为4.7﹕2,半胱氨酸相对比例为32.89%、不含芳香族氨基酸、氨基酸组成与MT的理论值非常接近。睾丸分离蛋白无254 nm特征紫外吸收峰,Cd结合能力低,半胱氨酸相对含量只有2.36%,氨基酸组成与MT的理论组成相差较大。【结论】雄性动物睾丸对镉暴露敏感性高的原因是睾丸中不能被诱导产生能够拮抗重金属镉毒性作用的特殊蛋白质——金属硫蛋白。     

青蒿琥酯对鸡胚和雏鸡的毒性作用研究

采用9日龄鸡胚尿囊腔注射不同浓度的青蒿琥酯注射液和3日龄雏鸡经口一次给药的方法,以体重数据变化、肝体比、肝脏镜下组织病理学观察为评判指标,观察青蒿琥酯的急性毒性。结果表明:青蒿琥酯的LD50为2.17 mg/kg,可信限为2.01～2.38 mg/kg。雏鸡毒性试验表明,40 mg/kg剂量对雏鸡有明显的生长抑制作用,20 mg/kg剂量及10 mg/kg剂量对雏鸡生长抑制较40 mg/kg剂量轻,溶剂对雏鸡生长无毒副作用。40 mg/kg剂量组肝脏病变严重,20 mg/kg剂量组及10 mg/kg剂量组病变较轻,溶剂组无任何病变。     

玉米赤霉烯酮对猪睾丸间质细胞DNA损伤作用的彗星试验(英文)

[目的]观察玉米赤霉烯酮(ZEN)对猪睾丸间质细胞(Leydig cell)的DNA损伤效应。[方法]以体外培养的猪Leydigcell为材料,用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)测定ZEN对离体培养的猪睾丸间质细胞的半数致死浓度,选用0(对照组)、1、5、10和20μmol/L浓度的ZEN体外作用于猪Leydigcell,通过彗星试验观察了ZEN对猪Leydig cell DNA的损伤效应。[结果]ZEN浓度为0、1、5、10和20μmol/L时,所造成的细胞拖尾率分别为16.67%、34.00%、40.67%、52.00%和64.67%,各染毒组细胞拖尾率与对照组比较,差异均有极显著统计学意义(P<0.01),且存在明显的剂量-效应关系;各剂量组对应的拖尾细胞尾长(Taillength)分别为57.60±4.78、57.75±6.25、78.97±5.83、100.50±6.94和146.83±12.31μm,尾部DNA含量(Tail DNA %)分别为21.29±2.25%、22.24±2.43%、31.21±6.27%、37.45±4.33%和60.68±9.83%,与对照组比较,5μmol/L及以上ZEN浓度染毒组的Tail length和Tail DNA %均有显著性差异(P<0.05),且随ZEN浓度增加呈上升趋势。[结论]ZEN对猪Leydig cell存在遗传毒性,可以损伤Leydig cell的DNA,且有明显的剂量-效应关系。