填饲期内肥肝鹅A-FABP与MSTN基因 同步表达规律与相关性

【目的】研究与脂肪沉积有关基因在不同填饲阶段鹅组织中的表达规律及其相关性,对实施肝用型鹅新品种（系）标记辅助选择具有重要意义。重点探讨脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（adipocyte fatty acid-binding protein,A-FABP）基因与肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因在不同填饲日龄鹅组织中的表达规律及两基因的表达相关性。【方法】选取200只体重相近的12周龄健康青农灰鹅进行填饲。分别采集不同填饲时间里鹅肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸肌、腿肌和腹脂样品,提取总RNA后,利用实时荧光定量PCR技术测定A-FABP与MSTN基因的表达量,并研究不同组织中这两个基因的表达相关性。对填饲期内肝脏重量进行研究,结合乙醚浸提法和气相色谱法测定肝脏中脂肪和总不饱和脂肪酸、总饱和脂肪酸的含量,并研究其与A-FABP与MSTN基因表达量的关系。【结果】①A-FABP基因在肝用型鹅的肝脏、腹脂、腿肌、胸肌、脾脏、肺脏和肾脏中均有表达。肝脏、腹脂、腿肌和胸肌中A-FABP基因表达量变化呈现先升高后下降的趋势,分别在填饲24、12、18和24 d达到最大值（15.90±0.04、12.72±0.12、8.88±0.06、6.33±0.13）。MSTN基因在肝用型鹅的腿肌、胸肌、肾脏、肺脏、腹脂、肝脏和脾脏中均进行了表达,MSTN基因在腿肌和胸肌中的表达呈现先升高后下降的趋势,而在肝脏、腹脂、肺脏、肾脏中MSTN基因表达量变化不显著（P＜0.01）。②鹅肝脏组织中A-FABP基因表达量与肝重、肝内脂肪、总不饱和脂肪酸及总饱和脂肪酸含量呈正相关,相关系数分别为0.576、0.510、0.463、0.501,差异均极显著（P＜0.01）;MSTN基因表达量与肝重、肝内脂肪、不饱和脂肪酸及总饱和脂肪酸含量相关性不显著（P＞0.05）。【结论】A-FABP与MSTN基因在肝用型鹅组织中的表达多呈负相关,且各自在不同填饲阶段、不同组织中的表达规律具有一定差异性,肝脏中A-FABP基因对肥肝性状的调控起一定作用。     

五龙鹅豁眼性状遗传变异的RAPD分析

利用RAPD分子标记技术对五龙鹅的豁眼组和无豁眼组群体进行了种质鉴定和遗传分析,从130个10碱基随机引物中筛选出19个多态性高的引物,分别扩增出192条和168条DNA带,多态位点比率达84.90%和67.26%,平均每个引物扩增多态性带10.1条和8.8条,Shannon多样性指数为0.4610和0.3641,Nei's指数为0.3103和0.2462,豁眼组和无豁眼组群体间的平均遗传距离为0.1979和0.1603,群体内个体间的平均遗传相似度分别为0.8021和0.8397,选择引物扩增的特异性标记,可用来区分五龙鹅的豁眼组和无豁眼组群体.用SPSS软件对群体内个体间遗传相似度的方差分析结果表明,在无豁眼组群体内存在显著差异(P<0.05),而在豁眼组群体内则差异不显著,表明豁眼组的种质较纯.两组五龙鹅之间相似度为0.7901,遗传距离为0.2099,这与形态学分析的结果相一致.     

饲粮叶酸添加水平对初产种鹅繁殖性能、蛋品质及血清生殖激素和抗氧化指标的影响

本试验旨在研究饲粮叶酸添加水平对初产种鹅繁殖性能、蛋品质及血清生殖激素和抗氧化指标的影响,以确定初产种鹅对叶酸的需要量.选择健康、体重相近的34周龄五龙鹅产种种鹅180只,随机分成6个组,每组6个重复,每个重复5只鹅(1公4母).各组(Ⅰ～Ⅵ组)种鹅分别饲喂叶酸添加水平为0、0.25、0.50、0.75、1.00和1....     

铁和枯草芽孢杆菌联合添加对产蛋期种鹅肠道形态和肠道菌群的影响

本试验旨在研究饲粮中铁和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,BS)联合添加对产蛋期种鹅肠道组织形态和肠道菌群的影响。试验采用3×2双因子随机试验设计,铁添加水平分别为40、60和80 mg/kg,BS添加水平分别为2.5×10⁹、5.0×10⁹CFU/kg。120只46周龄五龙鹅随机分为6个处理,每个处理4个重复,每个重复5只鹅。预试期1周,正试期10周。结果表明：BS添加增加种鹅十二指肠绒毛高度(P<0.05)。铁和BS添加对隐窝深度和绒毛高度/隐窝深度有交互作用(P<0.05),60 mg/kg铁+5.0×109CFU/kgBS组的十二指肠隐窝深度最低,绒毛高度/隐窝深度最高。16S rRNA测序结果显示,铁和BS添加对盲肠微生物Chao1指数有交互作用(P<0.05),40 mg/kg铁+5.0×109CFU/kgBS组Chao1指数最高。铁和BS添加对脱硫弧菌属(Desulfovibrio)和粪杆菌属(Faecalibacterium)的相对丰度有交互作用(P<0.05)。LEfSe分析结果显示,...     

维生素A对0～12周龄青农灰鹅抗氧化性能的影响

选用1日龄青农灰鹅200只,随机分为5个处理,每处理4个重复,每重复10只。在玉米-豆粕型日粮基础上分别添加0（处理Ⅰ）、1 500（处理Ⅱ）、3 000（处理Ⅲ）、6 000（处理Ⅳ）和12 000IU/kg（处理Ⅴ）的维生素A,试验期12周。分别测定了第4、12周龄青农灰鹅血清和肝脏中GSH-Px、T-SOD、CAT活性、抑制羟自由基（.OH）能力、抗超氧阴离子自由基（O2-.）活性、MDA含量和T-AOC。结果显示,基础日粮中添加维生素A能够显著提高4周龄青农灰鹅血清和肝脏SOD活力、T-AOC、抗超氧阴离子自由基（O2-.）活性和抑制羟自由基（.OH）能力,降低MDA含量（P〈0.05或P〈0.01）;显著提高血清GSH-Px、CAT活力（P〈0.05）。12周龄显著提高血清和肝脏GSH-Px、SOD活力、抗超氧阴离子自由基（O2-.）活性和抑制羟自由基（.OH）能力（P〈0.05或P〈0.01）,降低MDA含量（P〈0.05或P〈0.01）;显著提高血清CAT和T-AOC活力（P〈0.05）。结果表明,日粮中添加维生素A可显著提高青农灰鹅血清和肝脏的抗氧化性能,增强抗氧化酶活性,降低自由基的产生。综合各项指标,本试验条件下,0～4、5～12周龄日粮维生素A添加水平均以6 000IU/kg为宜。     

不同锌添加水平饲粮中添加枯草芽孢杆菌对肉鹅生长性能、屠宰性能、肉品质和养分利用率的影响

本试验旨在研究不同锌添加水平饲粮中添加枯草芽孢杆菌对肉鹅生长性能、屠宰性能、肉品质和养分利用率的影响,旨在确定添加枯草芽孢杆菌条件下的饲粮锌适宜添加水平。选择体况相近的5周龄五龙鹅360只,随机分为6组,每组6个重复,每个重复10只鹅。对照组在基础饲粮中添加80 mg/kg锌,不添加枯草芽孢杆菌;Ⅰ～Ⅴ组为试验组,在基础饲粮中分别添加0、20、40、60、80 mg/kg锌,枯草芽孢杆菌添加水平均为250 mg/kg。试验期11周。结果表明:1)Ⅲ组肉鹅的体重和平均日增重显著高于Ⅰ、Ⅴ组(P0.05),Ⅳ组肉鹅的料重比显著低于Ⅰ、Ⅴ组(P0.05)。饲粮中锌添加水平为47.5 mg/kg时平均日增重最大,饲粮中锌添加水平为15.0 mg/kg时料重比最低。2)Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组肉鹅的屠宰率显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P0.05)。3)Ⅱ、Ⅲ组肉鹅的肌肉失水率显著低于Ⅳ、Ⅴ组(P0.05)。4)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肉鹅的粗蛋白质利用率显著高于Ⅰ组(P0.05);Ⅳ组肉鹅的粗脂肪利用率极显著高于Ⅱ组(P0.01),显著高于Ⅴ组(P0.05);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肉鹅的粗纤维利用率显著高于Ⅰ、Ⅴ组(P 0.05);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组肉鹅的锌利用率显著低于Ⅳ、Ⅴ组(P0.05)。5)Ⅱ、Ⅲ组肉鹅的排泄氮显著低于Ⅰ组(P0.05),Ⅳ、Ⅴ组肉鹅的氮利用率显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(P0.05)。6)通过配对t检验分析,与对照组相比,Ⅴ组肉鹅的体重、屠宰率、胸肌率、腹脂率、肌肉红度值以及粗蛋白质、中性洗涤纤维、氮利用率均显著增加(P0.05)。由此可见,饲粮中添加枯草芽孢杆菌和锌均能够提高生长性能、屠宰性能及粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、锌利用率,减少锌和氮排放量。在饲粮中添加250 mg/kg枯草芽孢杆菌条件下,锌适宜添加水平为15.0～47.5 mg/kg。     

发酵葡萄籽粕对5～12周龄五龙鹅消化生理、免疫器官指数和抗氧化指标的影响

本试验旨在研究饲粮中不同水平发酵葡萄籽粕对5~12周龄五龙鹅消化生理、免疫器官指数和血清抗氧化指标的影响,以确定发酵葡萄籽粕使用效果和适宜添加水平。选用5周龄五龙鹅288只,随机分为6个组,每个组6个重复,每个重复8只鹅(公母各占1/2)。对照组(Ⅰ组)饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加2%(Ⅱ组)、4%(Ⅲ组)、6%(Ⅳ组)、8%(Ⅴ组)、10%(Ⅵ组)的发酵葡萄籽粕。试验期8周。结果表明:1)与对照组相比,Ⅴ组十二指肠和空肠中淀粉酶、胰蛋白酶、胰脂肪酶及胰腺中淀粉酶、胰蛋白酶活性极显著提高(P0.01),Ⅳ组胰腺中胰脂肪酶活性极显著提高(P0.01),Ⅴ组胃蛋白酶活性显著提高(P0.05)。2)与对照组相比,Ⅳ组肠道中大肠杆菌数量显著降低(P0.05),Ⅴ组肠道中乳酸杆菌数量显著提高(P0.05),Ⅳ、Ⅴ组之间差异不显著(P0.05)。3)与对照组相比,Ⅳ组肠绒毛高度显著提高(P0.05),Ⅳ组肌层厚度显著提高(P0.05),Ⅴ组隐窝深度极显著降低(P0.01)。4)各组免疫器官指数差异不显著(P0.05)。与对照组相比,Ⅴ组血清总抗氧化能力极显著提高(P0.01);Ⅳ组血清丙二醛含量极显著降低(P0.01),Ⅴ组血清总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性极显著提高(P0.01)。由此可见,发酵葡萄籽粕能显著提高5~12周龄五龙鹅消化酶活性,优化肠道组织结构,提高鹅的抗氧化能力,对免疫器官指数没有影响。建议饲粮中发酵葡萄籽粕适宜添加水平为6%~8%。     

不同锰水平饲粮添加枯草芽孢杆菌对12～16周龄五龙鹅生长性能、屠宰性能、抗氧化能力及血清生化指标的影响

本试验旨在研究不同锰水平饲粮添加枯草芽孢杆菌对12~16周龄五龙鹅生长性能、屠宰性能、抗氧化能力及血清生化指标的影响,旨在探索一种低锰饲粮配制的方法。试验选用12周龄五龙鹅360只,随机分为6个组,每组6个重复,每个重复10只鹅(公母各占1/2)。Ⅰ组为适宜锰添加组(锰添加水平为105 mg/kg,未添加枯草芽孢杆菌),Ⅱ~Ⅵ组为枯草芽孢杆菌添加组(枯草芽孢杆菌添加水平均为250 g/t),锰添加水平分别为0、35、70、105、170 mg/kg。试验期5周。结果表明:1)Ⅳ、Ⅴ组体重、平均日增重显著高于Ⅰ组(P0.05),Ⅳ组料重比显著低于Ⅰ组(P0.05)。2)Ⅳ组屠宰率、半净膛率、全净膛率和腿肌率均显著高于Ⅰ组(P0.05),Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组腹脂率显著低于Ⅰ组(P0.05)。3)Ⅳ组血清总抗氧化能力显著高于Ⅰ组(P0.05),Ⅳ组血清丙二醛含量显著低于Ⅰ组(P0.05),Ⅳ、Ⅴ组血清谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于Ⅰ组(P0.05)。4)各组血清碱性磷酸酶活性及甘油三酯、总胆固醇含量差异不显著(P0.05)。由此可见,饲粮中添加枯草芽孢杆菌能够显著提高12~16周龄五龙鹅的生长性能、屠宰性能及抗氧化能力,显著提高锰利用率,从而降低饲粮中锰添加水平。在饲粮中添加250 g/t枯草芽孢杆菌条件下,锰适宜添加水平为70 mg/kg。     

低铜饲粮添加枯草芽孢杆菌对5～16周龄五龙鹅肠道发育、微生物菌群结构及血清酶活性的影响

本试验旨在研究低铜饲粮添加枯草芽孢杆菌对5~16周龄五龙鹅肠道发育、微生物菌群结构及血清酶活性的影响。试验选用29日龄五龙鹅360只,随机分为6组,每组6个重复,每个重复10只(公母各占1/2)。Ⅰ组为最适铜添加组(铜添加水平为16 mg/kg,未添加枯草芽孢杆菌);Ⅱ~Ⅵ组为枯草芽孢杆菌添加组,铜添加水平分别为0、4、8、12、16 mg/kg,枯草芽孢杆菌添加水平均为250mg/kg。试验期12周。结果表明:1)Ⅱ~Ⅵ组的空肠绒毛高度和绒腺比极显著高于Ⅰ组(P0.01),空肠隐窝深度显著或极显著低于Ⅰ组(P0.05或P0.01);Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ组的空肠肠壁厚度显著高于Ⅰ组(P0.05)。Ⅱ~Ⅵ组之间的空肠绒毛高度、肠壁厚度和绒腺比无显著差异(P0.05);Ⅱ组的空肠隐窝深度显著低于Ⅴ和Ⅵ组(P0.05)。2)Ⅱ~Ⅵ组的盲肠大肠杆菌数量极显著低于Ⅰ组(P0.01),盲肠双歧杆菌和乳酸杆菌数量显著或极显著高于Ⅰ组(P0.05或P0.01)。Ⅱ~Ⅵ组之间的盲肠大肠杆菌、双歧杆菌和乳酸杆菌数量差异不显著(P0.05)。3)Ⅳ组的血清谷丙转氨酶(ALT)活性显著低于Ⅰ组(P0.05),Ⅴ组血清谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活性显著低于Ⅰ组(P0.05);Ⅱ组血清ALT、AST、LDH活性与Ⅰ组差异不显著(P0.05)。Ⅳ组血清碱性磷酸酶(AKP)活性显著高于Ⅰ组(P0.05);Ⅱ组血清AKP活性显著低于Ⅰ组(P0.05)。由此可见,低铜饲粮添加枯草芽孢杆菌能够促进五龙鹅肠道发育,优化微生物菌群结构;铜对鹅肠道发育及微生物菌群结构影响较小。适宜的枯草芽孢杆菌和铜添加水平能够维护机体健康,相互间具有协同作用。     

鹅源草酸青霉CBHⅠ基因克隆及真核表达载体构建

【目的】鹅源草酸青霉F67(Penicillium oxalicum Currie Thom)纤维素酶二糖水解酶(cellobiohydrolase,CBHⅠ)基因克隆并构建真核表达载体,为该菌株分子特性的进一步研究及构建高效纤维素分解菌奠定基础。【方法】首先通过兼并PCR法扩增CBHⅠ基因片段,然后利用改良热不对称交错PCR(TAIL-PCR)技术克隆CBHⅠ基因5′端和3′端侧翼序列,最后采用RT-PCR法扩增鹅源草酸青霉F67CBHⅠ基因序列全长,并对该基因进行生物信息学分析,构建pPIC9K真核表达载体。【结果】分别扩增到鹅源草酸青霉F67纤维素酶CBHⅠ基因片段A(EU574736)、5′端序列B1(EU603295)、3′端序列B2(EU652768)及全长基因C(EU727171),并成功构建真核表达载体pPIC9K-CBHⅠ;生物信息学分析表明,该基因蛋白序列与微紫青霉氨基酸序列同源性最高,达76%,前26个氨基酸为信号肽序列,疏水性可达2.63,由催化功能域、衔接区和真菌性纤维素结合域构成,其三级结构主要为β-sheet。【结论】鹅源草酸青霉纤维素酶CBHⅠ基因全长序列的克隆进一步丰富了丝状真菌的生物信息学资源;其真核表达载体的构建为将该菌株进一步在真核宿主中表达,从而获得高效工程菌株奠定了基础。