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高效毛细管电泳在分离植物蛋白质中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
蛋白质的分离技术在蛋白质研究中起到了举足轻重的作用。毛细管电泳作为一项较新的分离技术,以其高通量、高灵敏度、快捷低耗的优势弥补了传统双向凝胶电泳的不足。本文分别从毛细管电泳技术的不同分离方式出发,对其在植物蛋白质分离中的研究进展进行了综述,重点分析了毛细管区带电泳和涂层毛细管电泳对植物蛋白质进行分离的优缺点。 相似文献
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温度、盐度对条斑星鲽胚胎发育的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
就温度、盐度对条斑星鲽胚胎发育的影响作了初步探讨。实验表明,胚胎发育的适宜温度为6~12℃,最适水温为8~10℃,在适温范围内胚胎孵化速度与温度呈正相关关系(N=65.925T^-0.9672)。盐度低于27,受精卵下沉,27~30之间悬浮于水体中,盐度高于35,受精卵浮于水面。胚胎孵化的适宜盐度范围、最适盐度范围分别为25~40和28~36;盐度低于25或高于40,孵化率都降低。研究表明,条斑星鲽胚胎发育的生物学零度(阈温度)为-0.1℃,有效积温值为1726.48℃.h。另外,根据其Q10值推算的胚胎发育的适宜水温与实验结果相似。 相似文献
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根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Güther)类胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-I)基因的cDNA序列, 设计引物扩增编码IGF-I成熟肽序列, 此序列由210个碱基组成, 包括B-C-A-D 4个功能域。利用PCR方法将扩增片段克隆到原核表达载体pET-28a上, 得到重组质粒, 将重组质粒导入到大肠杆菌BL21( DE3)后经IPTG诱导产生N端含6个组氨酸的融合蛋白。以SDS-PAGE电泳检测和SigmaScan软件分析获得的多肽, 结果表明: IGF-I融合蛋白大小为11.4 kD, IPTG诱导3 h时目的蛋白表达量最高, 占细菌总蛋白的58.5%, 1 L菌液表达目的蛋白40.7 mg, 主要以包涵体形式存在。利用Western-blotting方法验证融合蛋白可特异性的被6×His抗体识别。诱导表达后的菌液沉淀经6 mol/L盐酸胍变性、Ni2+离子亲和柱纯化和尿素梯度复性, 获得大小为11.4 kD的纯化蛋白。细胞增殖实验表明, IGF-I融合蛋白可显著促进乳腺癌细胞MDA231细胞的增殖, 具有生物学活性。本研究通过原核表达技术获得了体外重组的具有生物活性的半滑舌鳎IGF-I融合蛋白, 结果可为半滑舌鳎生长调控技术研究提供基础资料。
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根据鲽形目和鲈形目鱼类的IGF-II基因保守序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆得到编码星突江鲽(Platichthys stellatus)IGF-II成熟肽的全长c DNA序列(210 bp),同源性分析显示IGF-II成熟肽在B、A和D区高度保守。利用原核表达载体p ET-28a构建了重组表达质粒(IGF-II/p ET28a),转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导,获得了N端含6个组氨酸的重组蛋白。37℃条件下用1.0 mmol/L的IPTG诱导6 h,目的蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的42.7%。重组蛋白主要以包涵体形式存在,经SDS-PAGE电泳检测,IGF-II重组蛋白大小为11.4 k D,Western-Blotting免疫印迹呈阳性。包涵体经6 mol/L盐酸胍变性、Ni2+离子亲和柱纯化和尿素梯度复性后,获得了纯化IGF-II蛋白。细胞增殖实验结果显示,重组蛋白可显著促进人胚胎肾细胞HEK293T的增殖,表明获得的IGF-II重组蛋白具有细胞水平的生物活性。研究结果为深入研究星突江鲽IGF-II的功能提供了基础资料。 相似文献
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异常高压页岩气藏岩石压缩系数不是一个定值,随着地层压力下降,岩石压缩系数不断变小。异常高压页岩气藏在利用物质平衡方程进行动态储量评价时,应该考虑这一特性。以常规物质平衡方程为基础,考虑页岩压缩系数的连续变化,考虑页岩气的吸附解吸过程,建立了考虑页岩压缩系数连续变化的异常高压页岩气藏物质平衡方程,适用于异常高压页岩气藏动态储量评价。实例计算表明:异常高压页岩气藏岩石压缩系数对动态储量评价影响明显,考虑岩石压缩系数影响的物质平衡方程动态储量计算的结果较不考虑岩石压缩系数影响时的低14%;建立的考虑岩石压缩系数随有效应力变化的物质平衡方程较岩石压缩系数为定值的物质平衡方程动态储量计算结果高6.5%;建立的新物质平衡方程考虑了异常高压页岩气藏岩石压缩系数的连续变化,能够反映异常高压页岩气藏岩石弹性能量不断下降这一特性,计算结果更准确,更符合实际。 相似文献