猪、鸡、鸭Myostatin成熟区段DNA的克隆及其同源性分析

克隆了金华猪、仙居鸡和绍鸭Myostatin成熟区段的DNA，并测定了各自的序列，通过与GenBank中登录的相应物种的序列比较，发现金华猪存在1个碱基的变异(T^241→A^261)，仙居鸡存在2个碱基的变异(T^218→C^218，C^219→T^219)，鸭的序列在GenBank中还未见报道。用软件对三者及其它物种的序列做了同源性分析，结果表明，Myostatin在不同物种间具有高度的保守性，DNA同源性均在81％以上(除鱼外)，提示其具有重要的生理功能，并用软件分析了该基因在不同物种中的变异，构建了系统进化树，并对各物种之间的亲缘进化关系进行了分析。     

环核苷酸（cAMP／cGMP）与肉鸡内分泌及免疫功能的关系

以艾维茵肉鸡为实验对象，研究了血清环核苷酸与肉鸡内分汔及免疫功能的关系。结果表明，以性法氏囊病病毒（IBDV）强毒株攻击后，肉鸡垂体－肾上腺轴活动加强，并发生针对IBDV的特异性免疫反应，血清cAMP与cGMP含量均上升，但cAMP/cGMP比值保持稳定，提示垂体－肾上腺轴活动加强使cAMP上升与抗IBDV特异性免疫细胞内效应大分子的合成有关，而cAMP/cGMP比值的稳定则是保持一种高阈平衡，以维持内环境的稳态。由于IBDV强毒株破坏了机体免疫系统，未经IBDV疫苗免疫的肉鸡cAMP、抗IBDV抗体和IL－2的上升幅度均比经IBDV疫苗免疫的肉鸡小。     

浙江省兼用型地方鸡种亲缘关系的研究

本研究测定了浙江省三个兼用型品种（萧山鸡、白银耳鸡、灵昆鸡）539bp的线粒体DNA D－环区序列，计算了各品种间的遗传距离，构建了各鸡种的聚类关系图。结果显示，三个鸡种之间的遗传差异较小，其中灵昆鸡和白银耳鸡关系较近，萧山鸡与这两种鸡关系较远。从品种外形、形成历史及DNA水平综合考虑，显昆鸡的母系来源可能就是白银耳鸡。结果还显示，萧山鸡是遗传上变异较大的类群，具丰定的遗传多样性。     

用Taq酶反转录、扩增及克隆中蜂溶血肽成熟区cDNA的研究

蜂毒的药用价值一直受到人们的关注.溶血肽(melittin)是蜂毒的一种主要成分,分子量约2.6 kD.陈仲兵等和Vlasak等已克隆到意蜂(Apismellifera)melittin的cDNA,王关林等在大肠杆菌中对意蜂melittin进行了融合表达.但对中蜂(Apis cerana)melittin基因的研究尚未见报道.近年已有研究发现TaqDNA聚合酶具逆转录活性.本研究所用的RNA抽提试剂盒能使mRNA在高温下保持稳定,故可利用TaqDNA聚合酶对中蜂melittin的mRNA在高温下进行RT-PCR,获得中蜂melittin的成熟区双链cDNA,克隆、测序后与已发表的意蜂相应序列进行比较,为研究中蜂melittin及用Taq DNA聚合酶直接进行RT-PCR提供基础资料.     

仙居鸡抑制素/活化素βB亚基成熟区cDNA的克隆及序列分析

根据发表的哺乳类抑制素 /活化素 βB亚基 c DNA序列设计引物 ,运用 RT- PCR技术从仙居鸡卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素 /活化素βB亚基成熟区序列 ,并进行了克隆和测序。结果显示 ,鸡成熟βB亚基是由 115个氨基酸(aa)残基组成的蛋白质 ,具有 9个半胱氨酸残基 ,与发表的哺乳类相应序列对比 ,其核苷酸序列的同源性为 79.7%～82 .9%,其编码氨基酸序列的同源性为 95 .7%～ 98.3%。 βB亚基成熟区半胱氨酸残基的数目和位置与发表的哺乳类相同。说明该亚基的序列及结构在不同物种间具高度保守性 ,提示抑制素 /活化素 βB亚基可能具重要的生理功能。     

肌抑素基因的结构、功能及应用

肌抑素(myostatin)属于TGF-β超家族成员,是动物骨骼肌生长的主要负调控因子。对肌抑素基因及其功能的研究,有助于提高畜禽的产肉性能和肉品质,也有利于治疗人类肌萎缩症等肌肉疾病。另外,肌抑素还具有降低脂肪含量,修复骨组织等功能。本文对肌抑素基因的结构、功能及应用进行了简要概述。     

肥胖基因及其产物的研究进展

Ob基因编码的Leptin具有降低脂肪，维持能量平衡，调节代谢、生殖、激素分泌，提高免疫机能等多方面的功能。本文在介绍Leptin、Leptin受体的基础上进一步对Leptin的生物学功能及其作用机制、Leptin的抗性做一简要论述，并提出了Leptin今后的研究方向及其在畜牧业上的应用前景。     

Taq plus Ⅰ DNA聚合酶的反转录活性

选择具有高保真性的Taq plusⅠDNA聚合酶．以小鼠表皮生长因子mRNA为模板研究其反转录性能。对cDNA的检验结果表明．Taq plusⅠDNA聚合酶在72C下有良好的反转录活性．且由于其高保真性，故在进行反转录时既可避免碱基错配．又可避免在低温下用AMV反转录酶或Mulv反转录酶进行反转录时可能造成的cDNA序列缺失。     

用蜂毒溶血肽和表皮生长因子构建膜毒性免疫毒素

表皮生长因子受体由于在许多种肿瘤细胞表面过度表达而成为特异杀伤肿瘤细胞的理想靶位;正电性抗菌肽有独特的膜毒性细胞毒机制.研究以小鼠(Mus musculus)表皮生长因子(mouse epidermal growth factor,MEOF)为导向部分,以蜂毒溶血肽(melittin,Mel)为毒性部分,构建特异杀伤肿瘤细胞的膜毒性免疫毒素MEGFMEL嵌合蛋白.该嵌合蛋白以大肠杆菌(Eschedchia coil)BL21为表达宿主,以pET30a为表达载体,采用低温诱导表达和无破胞程序的冻融法进行纯化,最终浓度为63.45μg/Ml、纯度为68%.体外活性检测表明,MEGFMEL嵌合蛋白对表面过度表达EGFR的肝癌A431细胞表现出显著杀伤力,其LD50为52.6μg/Ml.结果显示以正电性抗菌肽为毒性部分构建针对表皮生长因子受体的新型膜毒性免疫毒素(im-munotoxin,IT)是可行的.