鳜鱼病害防治新技术（四）

三、池塘底质修复与水质调控技术要养好鳜鱼,须创造良好的水质和底质环境,保持生态系统多样性在一个较高水平,使池塘生态环境处在相对平衡状态,减少因池塘生态环境的改变给鳜鱼造成的不良影响,从根本上防止鳜鱼病害的发生。(一)"配方制"鳜鱼池塘底质修复与水质调控技术的提出     

珠江三角洲地区鳜鱼病害现状及综合防治对策

１９９３年以前珠江三角洲地区鳜鱼主要以车轮虫、斜管虫等寄生虫性病害为主,偶有发生细菌性烂鳃症的报道。但这些病害通过常规抗细菌或杀虫药物可以得到有效治疗。１９９３年以来鳜鱼病害已经逐渐转变为寄生虫、细菌、病毒的或其他为不明原因单一感染或混合感染的暴发性死亡病害,并大都具有发病急、死亡率高、无法及时防治特点。１９９３年７月至８月广东中山和新会鳜鱼开始出现急性死亡,１９９４年９月中山市陆续流行蔓延细菌性和病毒性病害。７～９月份是鳜鱼发病高峰期,从开始发病至大量死亡仅１星期,死亡数量由每天数尾增加到每天…     

西伯利亚鲟停乳链球菌的分离、鉴定与致病性

从患暴发性流行病的两伯利亚鲟(Acipenser baerii)肝脏和心脏中各分离到1株细菌,分离纯化后获得2个分离株,编号分别为AeBF070904、AbHT070912,对分离菌进行了菌株鉴定、致病性分析及药敏实验.分别应用常规生理生化鉴定、全自动细菌测定卡API 20 STREP和ID 32STREP进行检测,结果表明,2个分离株均为停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae).对2个分离株的16S rRNA基因进行PCR扩增和测序,并与GenBank中收录的链球菌16S rRNA基因进行序列分析并构建系统进化树,结果显示,2个分离株的16S rRNA基因序列相同,与停乳链球菌同源性最高达97.3%,在系统进化树上与停乳链球菌聚为一簇,进一步确认2个分离株均为停乳链球菌.从人工感染后发病鱼的内脏组织再分离的细菌特性与原感染菌相同,确认停乳链球菌是西伯利亚鲟的致病菌.2个分离株对两伯利亚鲟、杂交鲟及剑尾鱼均有致死毒性,37℃培养的细菌毒力比28℃培养的细菌毒力强.2个分离株均对青霉素、诺氟沙星等7种药物敏感;对头孢唑啉、庆大霉素等2种药物耐受;对红霉素巾等敏感;对卡那霉素等8种药物菌株之间出现差异.     

一种检测鳜鱼病毒方法

<专刊>= <栏目>=研究简报 <图片>=N <表格>=N <连载>= <来源>= <中图分类号>= <主题分类>= <行业分类>= <本刊专题>= <本刊编号>= <基金项目>= <注释>= <参考文献>= <责任编辑>= <备注1>= <备注2>= <备注3>= <正文>=     

4种中草药单体对嗜热四膜虫生长和凋亡的影响

利用Hoechst 33258荧光染色、活细胞计数、CCK-8细胞活力测定、抗氧化酶活力测定等技术,研究了青蒿素、大黄素、芦荟大黄素、小檗碱(又名黄连素)等4种中草药单体对嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)生长和凋亡的影响,为应用嗜热四膜虫筛选抗鱼寄生虫中草药提供参考.结果表明,采用Hoech...     

维氏气单胞菌弱毒株FS12001及其疫苗对鲫鱼的免疫效果

为探究由维氏气单胞菌（Aeromonas veronii,简称Av）弱毒株FS12001制备的疫苗对异育银鲫（Carassius auratus gibelio,gibel carp）免疫效果。采用Av弱毒株FS12001制备活疫苗、灭活疫苗、ISA763A-灭活疫苗和蜂胶-灭活疫苗腹腔注射免疫异育银鲫,同时设ISA763A佐剂、蜂胶佐剂及0.65% NaCL作为对照组。于免疫后 1、3、5、7和 14 d经实时荧光定量 PCR 法检测脾脏组织中 IgM、IL-1β及LZM的基因表达量;于免疫后 7、14、21、28、42和 48 d尾静脉采血分离血清,检测抗体IgM,SOD和LZM活性;于免疫28 d 后用2株不同来源的Av强毒株分别攻毒各组实验鱼,连续观察记录7 d,计算各免疫组的相对保护率。结果显示,各免疫组脾脏组织中IgM、IL-1β及LZM的基因表达量高于对照组,且ISA763A-灭活疫苗组和蜂胶-灭活疫苗组的表达量显著高于其他各实验组。各疫苗免疫组血清特异性抗体水平均显著高于0.65% NaCL对照组和佐剂对照组。各疫苗免疫组的LZM活性均在28 d最高,灭活疫苗组、ISA763A-灭活疫苗组及蜂胶-灭活疫苗组SOD活性均在7 d 最高。菌株AVCA07攻毒后,活疫苗组、灭活疫苗组、ISA763A-灭活疫苗组和蜂胶-灭活疫苗组的RPS 分别为 63%、56%、100%、60%;菌株YC170511攻毒后,以上4个免疫组RPS分别为59%、55%、93%、72%。研究表明用弱毒株FS12001制备的几种疫苗,注射免疫异育银鲫后均可增加脾脏中 IgM、IL-1β及LZM的基因表达量,提高血清抗体水平,增强SOD和LZM酶活性,增强其抵抗Av感染的能力。本研究为运动性气单胞菌败血症疫苗研发做储备,为该病的预防和控制技术提供依据。     

鳜鱼病毒核酸随机引物扩增与克隆↑（*）

从感染鳜鱼病毒（ Ｓｉｎｉｐｅｒｃａ ｃｈｕａｔｓｉ Ｖｉｒｕｓ,简称ＳＣＶ） 的鳜鱼体中分离病毒,提纯核酸作模板。通过ＲＡＰＤ 法,用带酶切位点的引物进行病毒核酸随机引物扩增,获得扩增带谱。从带ＥｃｏＲⅠ酶切位点的引物扩增产物中,用琼脂糖凝胶电泳回收大小约为０ ．４ 和０ ．５ Ｋｂｐ 的片段,经ＥｃｏＲⅠ酶切处理制备成带粘性末端的片段,分别插入质粒ｐＵＣ１９ 的ＥｃｏＲⅠ位点。ＥｃｏＲⅠ酶对重组子进行了酶切鉴定,获得２ 种带插入ＳＣＶ 核酸ＰＣＲ扩增产物的重组子。     

锦鲤疱疹病毒GZ1301株的分离与鉴定

2013年4月,广东省一锦鲤养殖场暴发不明病因疾病,濒死锦鲤在塘边游动缓慢直至死亡,死亡率高达100%。现场采样发现,发病锦鲤体长25 cm,眼球凹陷,胸鳍及腹鳍出现出血斑点,解剖发现内脏器官包括肝、脾、肾肿大。细菌分离结果显示,内脏器官肝脏和肾脏中未分离到细菌。提取自然发病鱼的肝、脾、肾、鳃组织DNA作为模板,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的锦鲤疱疹病毒(KHV)检测引物进行PCR扩增,均能扩增出预期大小的特异性产物。NCBI的Blast搜索结果显示,扩增序列与KHV胸苷激酶(thymidine kinase,TK)基因核苷酸序列同源性为99%。病鱼内脏组织研磨过滤除菌后,腹腔注射20尾锦鲤,可复制出与自然发病相似的症状,并于7 d内全部死亡。取病鱼的鳃和肾脏研磨过滤除菌后进行细胞感染实验,结果显示,组织滤液感染CCB细胞后,盲传5代可以观察到典型的细胞病变效应(CPE)。将出现典型CPE的CCB细胞进行超薄切片制备和电镜观察,电镜下病毒呈对称20面体,直径约100 nm。将出现典型CPE的细胞进行间接免疫荧光实验,可以观察到特异性荧光。根据TK基因全长序列建立系统进化树,证实该毒株为KHV亚洲型毒株,暂命名为KHV-GZ1301株。研究结果可为KHV起源进化、分类以及疾病防控提供重要材料。     

剑尾鱼硫酸铜急性中毒的病理学研究

通过对实验动物化的剑尾鱼进行急性硫酸铜中毒实验,在观察症状和剖检变化以后,对实验96h期间死亡鱼与96h后仍存活的鱼进行石蜡切片,HE染色,光学显微镜观察。主要眼观病变为肝脏水肿和白色坏死点;鳃丝肿胀,黏液分泌增多;肾脏肿胀,充血。显微病变为肝细胞水泡变性,严重坏死;鳃小片上皮细胞肿胀,脱落严重;有的鳃小片发生融合,整个鳃丝呈棒状化;肾小管上皮细胞空泡变性,间质有充血或网织细胞增多,细胞间噬铁血红素细胞增多;肝胰腺的胰腺细胞的酶原颗粒减少。