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【目的】 对DkGAI2的亚细胞定位及表达特性进行分析,并将DkGAI2转化烟草,分析转基因烟草的生理和形态指标,为GAI的深入研究提供理论基础。【方法】 以‘南通小方柿’高通量转录组测序结果中标注的GAI2为原始序列(未发表),利用RT-PCR,3′ RACE和5′ RACE技术从‘南通小方柿’中克隆得到DkGAI2的序列全长。利用生物信息学分析其序列特征,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析DkGAI2在‘大方柿’及‘南通小方柿’5个不同物候期的表达特性以及DkGAI2在‘南通小方柿’不同组织中的表达特性,构建瞬时表达载体pCAMBIA-GFP-1302-DkGAI2,并瞬时侵染烟草分析DkGAI2的亚细胞定位,通过构建DkGAI2植物双元表达载体,利用农杆菌介导法转化烟草,经过GUS染色、RT-PCR对转基因烟草株系进行鉴定;并将野生型和转基因烟草移栽,于第一朵花开放时测定转基因植株的株高、节间长度、叶片长宽比以及GA1和GA4含量。【结果】 从‘南通小方柿’中克隆得到了1 827 bp的DkGAI2,DkGAI2核苷酸序列与猕猴桃(KF588651.1)、光皮烨(MF149049.1)、砂梨(KX078214.1)、苹果(FJ535245.1)、葡萄(MG738718.1)的相似度达72%-80%,DkGAI2具有DELLA蛋白家族特有的DELLA结构域,属于DELLA蛋白基因家族。DkGAI2编码608个氨基酸,相对分子质量为66.5 kD,理论等电点为5.54,不稳定系数为50.41,无明显疏水区,无跨膜区,无信号肽。序列系统进化分析结果显示,DkGAI2与葡萄亲缘关系最近。qRT-PCR结果显示,DkGAI2在‘南通小方柿’5个不同物候期的表达量都高于‘大方柿’;DkGAI2在‘南通小方柿’不同组织中表现出组织表达特异性,其中,在老叶中表达量最高,其次为茎尖和幼叶,而在幼果中几乎不表达。pCAMBIA-GFP-1302-DkGAI2融合蛋白的绿色荧光信号位于细胞核中,表明DkGAI2编码蛋白位于细胞核。经过GUS染色和RT-PCR检测,共获得5个转DkGAI2烟草株系,转基因烟草叶片GA1含量增加,GA4含量降低,GA1和GA4总含量降低,且转基因烟草植株出现植株矮化、节间缩短、叶片长宽比降低及花期延迟的表型。【结论】 DkGAI2具有组织表达特异性,定位于细胞核,DkGAI2在‘南通小方柿’5个不同物候期的表达量均高于‘大方柿’。推测DkGAI2可能通过降低GA4的含量进而引起植株矮化。 相似文献
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为挖掘果梅中NAC基因成员,探讨其组织表达特异性,本研究采用生物信息学方法鉴定了果梅NAC基因家族,并对其理化性质、染色体分布、亚细胞定位、保守基序、蛋白结构和亚族分类进行预测分析。结果表明,果梅NAC基因家族包含106个NAC基因成员,根据系统发育特征将其分为12个亚族。PmNAC基因在果梅的8条染色体上呈现不均匀分布,多编码酸性氨基酸;大部分NAC蛋白为亲水蛋白,其二级结构多以无规则卷曲为主要构成元件,且三级结构相似;亚细胞定位预测显示,果梅NAC蛋白为典型的核蛋白。选取12个NAC基因家族成员,利用实时荧光定量PCR技术进行组织表达分析,结果表明,12个果梅NAC基因在不同组织中均有表达,但表达差异明显。其中3个基因(PmNAC54、PmNAC32、PmNAC68)在果皮中表达最高,4个基因(PmNAC60、PmNAC95、PmNAC51、PmNAC2)在果肉中表达最高,3个基因(PmNAC31、PmNAC62、PmNAC48)在嫩茎中表达最高,其余2个基因(PmNAC61和PmNAC71)分别在果胚和花芽中具有最高的表达,表达特征的差异表明它们可能具有不同的生物学功能。本研究结果为果梅NAC蛋白的进一步功能分析奠定了一定的理论基础。 相似文献
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苹果抗病虫基因研究进展 总被引:1,自引:1,他引:1
苹果是研究果树抗病基因的模式植物,综述了苹果抗病虫基因的结构特点和基因定位,总结了抗黑星病、白粉病、火疫病、苹果棉蚜等苹果主要病虫害的研究进展,特别是分子标记技术在苹果抗病基因研究的应用情况,并对其中存在的问题与解决方法进行了讨论。 相似文献
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[目的]研究热空气处理对冠玉枇杷贮藏效果的影响。[方法]在枇杷贮藏前,进行了24和48h38℃热空气处理,并检测在低温贮藏下的可溶性固形物含量、可滴定酸含量、失重以及皱缩等的变化。[结果]经38℃热空气处理24h后冷藏,能有效延缓果实可溶性固形物含量的降低,有效降低失重率,抑制皱皮的产生,冷藏至30d外观仍保持光洁、风味较好。[结论]38℃热空气处理能有效保持冠玉枇杷的品质和外观。 相似文献
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叶绿体atpB-rbcL序列分析在核果类果树系统发育研究中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
为重建核果类果树的系统发育,选择桃、李、梅、杏、樱桃各4~5个主要种或变种,共24个基因型,测定了其叶绿体非编码区atpB-rbcL序列。以桂樱为外种群,用PAUP软件计算数据集的得分,Modeltest筛选最佳模型和参数,Mega计算遗传距离、变异,最大简约法构建系统发育树。结果表明,1)atpB-rbcL在核果类果树各组间分子进化速率不同,差异公布不均衡;2)樱桃较其他核果类果树原始;李、梅、杏亲缘关系较近,梅、杏关系最近。核果类果树是一个单系群,由一个共同的祖先沿着2个方向进化,一枝进化为樱桃,另一枝沿不同的途径产生桃、李、梅、杏等核果类果树。 相似文献
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近几年来 ,随着酥梨套袋技术的迅速普及 ,梨黄粉蚜为害日盛。为此 ,笔者 1999年选用了德国艾格福公司的 35%赛丹乳油进行梨黄粉蚜的防治试验。试验设在江苏省丰县李寨乡黑楼村 ,供试植株为 4 0年生砀山酥梨 ,树势一般 ,栽培密度 14株 6 6 6 7m2 ,土壤为泡沙土 ,pH值 8 8,属碱性土壤。上年黄粉蚜发生较严重。处理设 35%赛丹 10 0 0、20 0 0、30 0 0倍液 ,50 %一六○五 10 0 0倍液 ,以清水为对照。选择虫口密度较大的园块 ,根据其喜欢群居的特点 ,每一小区选择 4个虫斑 ,3次重复。 7月 2日 ,选用踏板式喷雾器进行喷药。药后 1天调查结… 相似文献
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为探究硫酸亚铁与不同浓度碧护复配改善苹果缺铁黄化的效果,本研究选用了二年生‘红星’苗木,分别设置4个浓度梯度:0.3% FeSO4+0.05%碧护(X1)、0.3% FeSO4+0.1%碧护(X2)、0.3% FeSO4+0.15%碧护(X3)、0.3% FeSO4+0.2%碧护(X4),以清水处理为对照(CK)。结果表明,与对照相比较,0.3% FeSO4+0.15%碧护处理叶绿素总含量比对照提高了79.2%,实际光化学效率比对照提高了68.0%,活性铁含量比对照高了60.1%,全铁含量比对照高了52.1%,POD活性比对照提高了228.6%,显著高于其它组合。因此,0.3% FeSO4+0.15%碧护对苹果黄化叶片复绿效果最为显著。 相似文献
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在3年生的富士和国光苹果幼树的萌芽期、盛花期和新梢旺长期,通过对其进行不同角度的拉枝处理,研究拉枝对苹果幼树生长发育的影响。结果表明:拉枝能够提高苹果叶片中可溶性糖和淀粉含量,但不呈现明显的变化规律,富士萌芽期处理枝条的可溶性糖含量总体要高于盛花期处理枝条,国光萌芽期处理枝条的还原糖含量以90?拉枝的平均水平最高,国光叶片和富士叶片的淀粉含量均以110?拉枝处理的最高;富士叶片叶绿素含量随拉枝角度的增大呈现先减小后增大的趋势,而国光的随拉枝角度的增大而减小;富士和国光叶片蛋白质含量随拉枝角度增大而增大。 相似文献