嗜水气单胞菌黏附素基因克隆、序列分析及表达

利用PCR方法对江浙一带淡水鱼类暴发病病原致病性嗜水气单胞菌主要血清型O:9和O:97代表菌株TPS-30和BSK-10的黏附素基因(Al)进行扩增,并分析不同血清型和不同来源菌株Al的序列差异.结果表明:嗜水气单胞菌TPS-30株与BSK-10株相比较,Al序列在N端有个突变区,TPS-30株的Al基因突变区较BSK-10株短;通过pET28a(+)载体构建TPS-30株黏附素基因的表达载体pET28a-AHal,转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,通过SDS-PAGE分析,显示与预期大小约41ku相吻合的融合蛋白带,诱导6h后目的蛋白获得了高效表达,表达量占菌体总蛋白的44.0%;通过免疫攻毒试验发现,免疫银鲫后血清效价在第5周达到峰值,重组表达的蛋白对同源菌株TPS-30和异源菌株BSK-10都具有较高的免疫保护率,分别达到94.7%和77.8%.这为基因工程亚单位疫苗的开发奠定了基础.     

嗜水气单胞菌细胞提取物特性的分析

对六株嗜水气单胞菌的全细胞和外膜成份在不同的培养条件下进行SDS-PAGE、免疫转印分析.在同一培养条件下6个供试菌株全细胞的蛋白质电泳图谱不同.同一菌株在五种不同的培养条件下,其蛋白质电泳图谱相似但有差异.6株菌株的细菌外膜提取物的蛋白质电泳图谱不同,同一菌株在5种不同的培养条件下,其蛋白质电泳图谱相似但有差异,但所有的图谱均具有34 kDa和30 kDa的条带.用Schiff's试剂,银染及生物素标记(BS-1,ConA,UEA-1)法测定及分析提取物中糖或碳水化合物的特征.生物素标记及经蛋白酶K处理后的所有菌株的提取物均显示不同分子量碳水化合物的条带,但具有相同分子量的条带,其中32 kDa条带被三种生物素及银染所显示,而34 kDa仅被生物素BS-1和UEA-1所识别.经Schiff's试剂染色后,仅出现少量的条带.用免疫转印法测定菌体提取物的抗原性,结果显示,提取物有多条不同的条带被两种血清所识别,且用活菌制备的血清比死菌的要强得多.所有菌株在不同培养条件下的提取物均具35 kDa条带被鱼血清所识别.所以,35 kDa条带可能是嗜水气单胞菌的共同抗原.同时,用ELISA法测定,证明鱼血清与其它菌株间有较强的交叉反应.     

枯草芽孢杆菌B115株的毒性研究

本文初步报道了枯草芽孢杆菌(Baclllus subtllls)B115株对鲫鱼、淡水青虾的急性毒性及对小白鼠的30天喂养试验,枯草芽孢杆菌B115株对鲫鱼的96hLD_(50)＞4000ppm,对淡水青虾的96hLD_(50)为1350ppm；以5×10~(10)、1×10~(10)和0．5×10~(10)分别口灌和拌饵投喂小白鼠30天,小白鼠的体表外观、运动能力及内脏器官与对照组无差异,血液学和血液生化指标与对照组无差异。结果表明枯草芽孢杆菌B115株对小白鼠无毒性。     

抗哈维氏弧菌脂多糖单克隆抗体的制备及其鉴定

以哈维氏弧菌GYC1108-1细菌颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合.用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,获得一株针对GYC1108-1脂多糖(LPS)的特异性单克隆抗体,命名为2 F 9.该株单抗细胞培养上清ELISA效价为1:1 600,腹水效价为6.4×104,交叉反应结果表明2 F 9除了与测试的多株哈维氏弧菌发生免疫识别外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌代表株发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌代表株等发生交叉反应.用温和高碘酸氧化法对LPS处理后,GYC1108-1的LPS与2 F 9的反应部分减弱,免疫印迹结果表明2 F 9识别LPS的类脂A抗原.用抑制ELISA法半定量检测GYC1108-1培养上清的LPS,测得培养48 h LPS释放量不超过39μg/mL,大大低于使鱼类致死所需的LPS的剂量.     

核酸疫苗的研究进展及其在鱼类免疫中的应用

核酸疫苗是20世纪90年代初发展起来的一种新型疫苗,它克服了传统疫苗所存在的一些缺陷,具有许多传统疫苗不可比拟的优点。有关核酸疫苗的研究已成为国内外科技界研究的热点之一,呈现出良好的应用前景。作者综述了核酸疫苗的研究背景、构建过程、作用机理以及疫苗本身具有的优缺点等,同时,概述了近年来国内外对鱼类DNA疫苗基础研究和应用研究的新进展,探讨了鱼用DNA疫苗当前需要解决的问题及发展前景。     

生物絮团在罗氏沼虾育苗中的应用

对罗氏沼虾育苗水体连续添加不同浓度的葡萄糖和定量的枯草芽孢杆菌培育生物絮团,自1日龄幼体培育至仔虾,连续监测水体的氨氮、亚硝酸氮、溶解氧、COD、葡萄糖和生物絮团等浓度;通过变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析生物絮团中微生物组成,测定出苗率及育成仔虾个体大小。通过27 d室内罗氏沼虾育苗试验发现:各组生物絮团含量无显著差异,应用生物絮团后,葡萄糖终浓度为20 mg/L组的氨态氮和亚硝酸氮明显低于对照组(P<0.05),溶解氧和COD浓度在试验组与对照组之间不存在显著差异。DGGE分析结果和序列测定结果显示,添加葡萄糖和枯草芽孢杆菌制剂产生的生物絮团,条件致病菌气单胞菌属细菌(Aeromonas sp.)显著少于自然产生的生物絮团,并促进水产有益菌芽孢杆菌属细菌(Bacillus sp.)的生长。出苗率及生长测定表明,对照组出苗率为32.60%,20 mg/L试验组为60.60%,比对照组高85.90%。对照组仔虾体长平均值为8.193 mm,20 mg/L试验组体长平均值为10.488 mm,比对照组高28.00%。添加一定浓度葡萄糖和枯草芽孢杆菌产生的生物絮团能有效地控制水质和减少有害细菌的生长。     

鳙鱼Aristichthys nobilis吻端细胞系BHS的建立及特性观察

以鳙鱼吻端组织为材料，建立了鳙鱼吻端细胞系，定命为ＢＨＳ。７个月期间细胞已传２５代，选用培养基为ＴＣ－１９９加２０％或１０％小牛血清。该细胞生长温度范围为１４℃－３５℃，最适温度２８℃－３０℃，形态主要为纤维样细胞，染色体数从５５－８２（２ｎ－４８）为异倍体细胞，克隆形成率较代为４．４％。     

斑点叉尾(鱼回)病害防治研究进展

斑点叉尾(鱼回)(Ictalurus punctatus)又称美洲鲶、沟鲇,属鲶形目、(鱼回)科,原产于美国,其商业化养殖占美国有鳍鱼类总养殖产量的50%～85%,我国湖北省水产科学研究所于1984年从美国引进后,因其具有生长速度比较快、肉质细嫩、销售价格较高的特点,受到了广大消费者和水产养殖业者的欢迎.2000年我国斑点叉尾(鱼回)开始出口美国,2005年1月就占美国市场6%,并且有逐年加大的趋势,更是加快了我国斑点叉尾(鱼回)养殖业的发展.     

鱼类虹彩病毒病及其疫苗的研究进展

渔业不仅是国民经济的重要组成部分,而且为国家粮食安全和社会发展作出了贡献.根据2020中国渔业统计年鉴统计显示,全国水产养殖产量5079.07万吨,同比增长1.76％.2019年全国水产养殖面积7108.50千公顷,其中海水养殖面积1992.18千公顷,淡水养殖面积5116.32千公顷.然而,疾病的流行给水产养殖业带来...     

三疣梭子蟹血清凝集素的生物学特性

对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)血清凝集素的凝集特性进行了研究。结果表明:三疣梭子蟹血清凝集素对鲫鱼、中华鳖、草鱼、鸡和人类A、B、O型血细胞没有凝集作用,但是对小鼠、兔的血细胞表现出较强的凝集活性,其中对小鼠血细胞的血凝活性达到210,对兔血细胞的血凝活性达到28;盐度对其凝集活性有较大影响,Na Cl浓度在0.6 mol/L以上时基本失活;凝集素活性最适p H值为6.0~7.4;血清凝集素对Ca2+、Mg2+离子有明显的依赖性,EDTA可以明显抑制其凝集活性;糖抑制结果表明,血清凝集素活性能被N-乙酰葡萄糖胺及N-乙酰甘露糖胺特异性抑制;对血清凝集素进行硫酸铵分级沉淀分离后,发现凝集素活性主要分布在25%饱和度硫酸铵沉淀区;聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明,主要蛋白条带在72~95 ku。