利用PCR-RFLP方法鉴别黄曲霉毒素产毒菌株

【目的】开发一种精准度高、灵敏性好、简便快捷的鉴别黄曲霉毒素产毒菌株的方法,为粮食储藏中黄曲霉毒素污染提供早期预警,为食品工业的质量安全控制提供技术保障,为黄曲霉毒素污染的生物防治提供无毒微生物来源。【方法】利用生物信息学方法分别以黄曲霉（Aspergillus flavus）、寄生曲霉（Aspergillus parasitieus）、米曲霉（Aspergillus oryzae）、酱油曲霉（Aspergillus sojae）的黄曲霉毒素合成基因簇中的关键调控基因aflR及其启动子序列为研究对象,采用PCR-RFLP方法对黄曲霉毒素可能产生菌株进行鉴别分析研究;为进一步验证PCR-RFLP方法对产毒菌株区分结果,利用大豆培养基对上述菌株进行发酵培养,并利用HPLC方法测定了菌株产毒能力。【结果】生物信息学分析结果表明黄曲霉毒素可能产生菌株的aflR高度同源, 但启动子和结构基因的部分碱基出现了规律性变异,并导致了限制性酶切图谱中的NheⅠ、PvuⅡ和HincⅡ等限制性酶切位点的改变;通过提取各菌株基因组DNA,PCR扩增得到aflR和启动子序列片段,测序得知片段长度分别为798 bp和 515bp;PCR-RFLP鉴定结果表明产生黄曲霉毒素菌株的aflR启动子片段经NheⅠ酶切后得到176 bp和339 bp 2个片段,不产毒菌株无该限制性酶切位点;试验进一步对黄曲霉菌和寄生曲霉菌aflR结构基因的分析发现,利用HincⅡ分别处理黄曲霉和寄生曲霉的aflR的结构基因,可以分别得到3个片段（387、250和161 bp）和2个片段（548、250 bp）;利用PvuⅡ分别处理黄曲霉和寄生曲霉的aflR结构基因,可以分别得到2个片段（652、146 bp）和3个片段（413、239和146 bp）;产毒试验表明,米曲霉菌和酱油曲霉菌不产生黄曲霉毒素,PCR-RFLP分析表明不产毒的黄曲霉菌的确丧失了产生黄曲霉毒素的能力;产生黄曲霉毒素各曲霉菌株之间产毒能力差异显著,不但产生的黄曲霉毒素总量高低相差几十倍,其产生的黄曲霉毒素组分也不尽相同。【结论】本研究阐明了在可能产生黄曲霉毒素关键基因aflR序列中存在的差异,通过PCR-RFLP方法快速鉴别黄曲霉菌株产毒与否,并且对黄曲霉和寄生曲霉两种曲霉进行了区分。黄曲霉毒素产生菌株鉴定方法的开发,将为粮油食品安全检测和质量控制,粮食食品生产过程的质量安全控制与监测提供基于分子水平的新型技术。     

云南保山烟区气象因子与烤烟化学成分的相关性分析

运用描述统计、简单相关和典型相关统计分析方法,研究了保山烟区主要气象因子与烤烟化学成分含量的关系。结果表明：①保山烟区气候条件适宜,气候特点有利于优质烤烟的种植;②光、温和水气象因子对烟叶化学成分的影响为：气温>降雨量>日照;气象因子对蛋白质、钾氯比、还原糖和总氮影响较大,其中7月的气象因子对化学成分含量影响最大;③烟叶蛋白质与5~7月气温、9月日照时数和7~8月降雨量呈显著负相关;还原糖与5月降雨量和5~9月平均气温呈显著负相关,与7月降雨量呈极显著正相关;总氮与5月气温、9月日照时数和7~8月降雨量呈显著负相关;钾氯比与8~9月气温呈显著正相关,与7月日照时数呈显著负相关;气温、降雨量对烤烟化学成分的影响分别为:还原糖>总氮>蛋白质、总氮>还原糖>蛋白质。     

云南腾冲火山区域主要植烟区土壤养分状况分析

对云南腾冲火山区域主要植烟区的175个植烟土壤样品的主要养分状况进行了分析,结果表明:土壤养分总体水平较高,符合火山灰土基本特性;土壤样品pH值达植烟适宜标准的占总数的82.29％,有机质含量丰富,其中达一级标准的占总样品数的73.71％;土壤有效氮、有效钾含量丰富,有效磷相对缺乏,土壤有效镁分布不均匀,微量元素有效锌及有效硼缺乏,低于临界值.     

低施氮、少留叶及其交互作用对烤烟主要化学成分的影响

为了在提高烟叶烟碱含量的同时控制总氮、蛋白质含量,通过在现蕾前足叶打顶并采用低施氮(45 kg/hm~2、67.5 kg/hm~2和90 kg/hm~2)、少留叶(12片/株、14片/株、16片/株)的措施来探索其对K326烟叶烟碱、总氮等化学成分的影响。结果表明:(1)所有低施氮少留叶处理的烟叶其烟碱含量和烟碱氮/总氮均有所提高,同时蛋白质含量下降,总氮和糖含量较为适宜。(2)施氮量对烟叶的烟碱、总氮、蛋白质、氯含量有极显著影响,留叶数对烟叶的烟碱、总糖、总氮含量和烟碱氮/总氮有极显著影响,施氮量×留叶数交互作用对各个部位化学成分的影响均不显著。(3)施氮量和留叶数对不同部位烟叶化学成分的影响程度不同。采用低施氮少留叶措施可提高烟叶烟碱含量和烟碱氮/总氮,降低蛋白质含量;施氮量主要影响了烟叶的烟碱、总氮、蛋白质和氯含量,留叶数主要影响了烟叶的烟碱、总氮、总糖含量和烟碱氮/总氮,二者的交互作用对化学成分影响不显著。     

采收成熟度对烘烤过程烟叶色素降解及抗氧化系统的影响

设置3个采收成熟度(尚熟、成熟、完熟)处理,对烘烤过程烟叶叶绿素和类胡萝卜素降解规律、抗氧化酶活性和相对电导率的变化进行系统研究.结果表明,(1)各个色素组分降解主要发生在变黄中后期(24～72 h),色素降解速率和烟叶变黄速率随着成熟度的提高而提高;(2)烟叶丙二醛(MDA)含量随烘烤进程逐渐升高,在72 h时达到峰值,成熟烟叶中的MDA含量低于尚熟和完熟烟叶处理;(3)不同处理烟叶抗氧化酶[过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)]活性均在随烘烤进程呈先升高后降低的趋势,且活性在变黄期达到峰值,成熟处理烟叶中的POD、T-SOD、CAT活性均表现出较高水平;(4)不同处理烟叶相对电导率随烘烤进程逐渐上升,完熟烟叶的相对电导率显著高于尚熟和成熟烟叶,定色中后期烟叶相对电导率明显增大,以成熟处理烟叶相对电导率最小.成熟烟叶的色素降解比例较大,MDA含量较低,抗氧化酶活性较高,相对电导率较低,说明成熟烟叶细胞膜的完整性更好,有利于烟叶细胞内部物质的生理生化转化.