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61.
对现地分离的4株H9亚型禽流感病毒HA基因进行序列测定,选取其中1株在新城疫病毒 La Sota弱毒疫苗株反向遗传操作系统的基础上,构建了表达H9亚型禽流感病毒野生型HA基因的重组新城疫病毒基因组cDNA克隆,经间接免疫荧光和RT-PCR鉴定,结果表明:拯救重组病毒为rL-H9HA;重组病毒MDT≥168 h,ICPI和IVPI均为0,与亲本疫苗株La Sota具有相似的生长特性;重组病毒保持了La Sota弱毒疫苗亲本毒株对鸡胚良好的高滴度生长适应和低致病特性,具有作为同时预防H9亚型禽流感和新城疫的双价苗的应用前景. 相似文献
62.
为了建立一种简便、快速、可靠和经济的牛γ干扰素(BOIFN-γ)的免疫学检测方法,本研究通过杂交瘤技术建立了2株抗rBoIFN-γ单克隆抗体(MAb)2G6和5F9.Western blot、抗病毒活性阻断实验表明2株MAb与rBoIFN-γ有高亲和活性.相加EUSA表明2G6和5F9识别rBoIFN-γ不同的抗原表位.利用2G6作为捕获抗体,5F9-HEP作为检测抗体建立的抗原捕获ELlSA方法可特异性的检测不同系统表达的rBoIFN-γ,而且与rBoIFN-a、rBoIFN-β不发生交叉反应.该方法的建立为抗原捕获ELISA定量检测BoIFN-γ试剂盒的研制奠定了基础. 相似文献
63.
为建立一种能够实现病毒活体示踪的狂犬病病毒(RABV),以有效地研究RABV的侵染机制,本研究基于重组RABV rERA载体,利用反向遗传技术构建了包含rERA全长基因组cDNA及萤火虫荧光素酶(Luc)基因的重组质粒,并经Pme Ⅰ酶切鉴定正确后,将该质粒与辅助质粒共转染鼠肾成纤维细胞(BSR),4 d后收集上清液,... 相似文献
64.
近年来,CRISPR/Cas系统凭借其操作简单、靶向精准、效率高等优点,在生物学领域的应用潜力备受关注。通过总结CRISPR技术在抗病毒药物潜在靶点筛选、疫苗开发、病毒核酸快速检测、病毒性疾病临床治疗等领域的应用,阐明了CRISPR/Cas系统目前面临的挑战及相应的解决措施。作为一种基因编辑技术,CRISPR/Cas系统可以快捷地筛选出多种病毒的潜在药物靶点;可以改造病毒基因组,为研发基因缺失活疫苗做储备;可以快速准确诊断病毒性疾病,也可以为乙肝、艾滋病等病毒性疾病的治疗提供新方向。CRISPR/Cas系统仍存在致癌风险、脱靶效应以及递送系统的安全准确性不足等问题。随着CRISPR技术的不断完善,该技术必将会给病毒性疾病的检测诊断与预防控制带来重大变革。 相似文献
65.
鸡γ-干扰素基因(ChIFN-γ)的瞬时表达及其抗病毒活性检测 总被引:1,自引:0,他引:1
采用PCR技术从质粒pET-ChIFN-γ中扩增得到鸡(Gallus gallus)γ-干扰素(chicken interferon gamma,ChIFN-γ)基因,将其亚克隆到真核表达载体pCAGGS中.将鉴定正确的克隆命名为pCAGGS-ChIFN-γ,体外转染鸡胚成纤维(CEF)细胞,24 h后经间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western blot)检测,表达蛋白具有良好的免疫原性.然后利用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组水疱口炎病毒(VSV*GFP)在CEF细胞上检测表达的ChIFN-γ抗病毒活性(AVA),经检测其抗病毒活性为2×10~3AU/mL,并且其活性可被抗鸡IFN-γ的多克隆抗体阻断. 相似文献
66.
HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果比较 总被引:5,自引:1,他引:5
为评估HA基因密码子优化及不同表达载体对H5亚型禽流感DNA疫苗免疫效果的影响,pCIHA5、pCAGGHA5 、pCIoptiHA5和 pCAGGoptiHA5分别以100 和10 μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后分别用100 LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV) A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5和7无采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化,对4种疫苗单次免疫的免疫保护效果进行比较评估。结果表明,100 μg剂量组中, pCAGGoptiHA5和pCAGGHA5 均可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死和不排毒),pCIoptHA5(75%) 和pCIHA5(50%)仅可形成部分免疫保护;10 μg剂量免疫组中, pCAGGoptiHA5和pCAGGHA5 可对免疫鸡形成100%的保护(不发病和不致死),pCIoptiHA5可形成对免疫鸡的部分免疫保护(75%),而pCIHA5则基本不能形成免疫保护。结果表明,HA基因密码子的优化以及鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果同时证明,通过密码子和载体的优化,可使H5亚型禽流感DNA疫苗有效免疫保护剂量降低至10 μg,其推广应用已具备充分的经济可行性。pCAGGoptiHA5作为免疫效果良好、成本低廉的优化DNA疫苗,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。 相似文献
67.
鸡传染性支气管炎(aviainfectiousbronchi-tis,IB)已成为养禽业中危害最大的病毒性传染病之一。鸡传染性支气管炎病毒(avianinfectiousbron-chitisvirus,IBV)基因组RNA的点突变、缺失、插入和不同毒株基因组间的同源重组是造成病毒临诊表现、病理变化、血清型、基因型、病毒复制、结构蛋白免疫原性及其免疫机制变异的主要分子基础。本文从以上几个方面系统综述IBV遗传变异的特性及其分子基础。一、临诊表现IB的临诊表现差异极大,主要取决于鸡体免疫状态、鸡群… 相似文献
68.
2008年5月12日四川省汶川县发生了8.0级强烈地震,地震波及到陕西、甘肃等地,灾情十分严重。许多房屋畜舍倒塌,大量动物死亡,生态环境受到极大破坏。动物疫病防控专家认为。在此情况下如果处置不当,极易发生炭疽、流行性乙型脑炎、猪链球茵病等人畜共患病疲情,给灾区人民的生命带来严重威胁。为此,农业部抗震救灾专家组与四川省畜牧食品局共同制定了《四川省灾区动物紧急免疫方案》,将狂犬病、猪乙型脑炎、猪Ⅱ型链球菌病、炭疽等人畜其患病列为紧急免疫病种,并组织调拨了大量的动物疫苗和消毒药剂。 相似文献
69.
DNA免疫防制鸡传染性支气管炎的探索研究 总被引:11,自引:0,他引:11
ORF完整的IBV类M41株S1基因cDNA插入真核表达质粒pCI CMV启动子下游我隆位点,构成pCIS1用于1周龄SPF雏鸡的DNA免疫试验。试验鸡生疏腿部肌肉注射pCIS1DNA100g,2周后加强免疫一次。二次免疫2周后,代感染IBV H52株。结果,IBV人工感染后第4天气管-泄殖腔棉拭子鸡胚病毒分离阳性者,免疫试验组为1/6,而对照组为6/6,鸡胚病毒中和试验显示,二次免疫后临感染前及 相似文献
70.
DNA免疫诱导SPF鸡对传染性法氏囊病的免疫保护反应 总被引:6,自引:0,他引:6
传染性法氏囊病病毒(IBDV)D78株VP2基因插入真核表达质粒pCI CMV启动子下游多克隆位点,构成pCIVP2用于3周龄SPF雏鸡DNA免疫。试验鸡每羽腿部肌肉注射pCI VP2 100μg,2周后加强免疫一次;二免2周后,人工感染vvIBDV G株。结果,两次免疫后血清中和抗体试验组为阳性而对照组为阴性;试验组攻毒后发病11/11,攻毒后1周存活10/11,所有存活鸡法氏囊较正常中度或轻度萎缩;对照组发病6/6,病死5/6,存活1/6;存活鸡法氏囊较正常严重萎缩。组织病理学观察表明,无论法氏囊淋巴滤面积还是其中的淋巴细胞数量,免疫试验组都要远远大于或多于免疫对照组。结果表明,VP2基因DNA免疫可诱导SPF鸡产生和中抗体,并形成对IBDV超强株致死攻击的免疫保护,虽不能阻止临床发病及法氏囊病理损伤发生,但有可能减缓法氏囊病理损伤程度。 相似文献